Method Article

منصة نقطة رعاية للكشف المتزامن عن عدوى الشيكونغونيا، حمى الضنك، وزيكا باستخدام جهاز PCR ثلاثي الأبعاد

DOI:

10.3791/69580

⸱

December 30th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1the Fourth People's Hospital of Nanning, 2The Fangchenggang Hospital of the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region - The First People's Hospital of Fangchenggang City, 3Department of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توصي هذه المقالة بنظام متكامل مؤتمت بالكامل يستخدم تقنية PCR ثلاثية لتشخيص العدوى المشتركة لفيروس شيكونغونيا، وحمى الضنك، وزيكا باستخدام عينة واحدة في الوقت نفسه، مما يحسن كفاءة الاختبار في مختبرات السريرية والرعاية الأولية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حمى تشيكونغونيا (CHIKF)، وهي مرض فيروسي حاد ينتقل عن طريق البعوض وتم اكتشافه لأول مرة في تنزانيا عام 1952، أظهر انتشارا متقطعا في الصين، مع تزايد تفشيات محلية. بحلول يوليو 2025، أبلغت مقاطعة قوانغدونغ، التي تعد مركز التفشي حاليا، عن 4,824 حالة محلية، بما في ذلك ما يقرب من 3,000 إصابة جديدة خلال أسبوع واحد فقط. هذا الارتفاع السريع يخلق حاجة ملحة لتقنيات تشخيصية متقدمة. مثل هذه الأدوات ضرورية لدعم جهود الاحتواء في الخطوط الأمامية. نقترح حلا للكشف السريع في نفس الوقت عن عدوى حمى الضنك (DENV)، وشيكونغونيا (CHIKV)، وفيروس زيكا (ZIKV) لتعزيز قدرات الوقاية والسيطرة المبكرة على الأوبئة. يتضمن هذا النهج تطوير بروتوكولات اختبار مخصصة لنقاط التفتيش الحدودية ومرافق الرعاية الصحية الأولية.

غالبا ما تفتقر طرق التشخيص التقليدية لفيروس شيكابوس وفيروس نقص المناعة البشرية إلى الحساسية أو الخصوصية في حالات العدوى المصاحبة. نظرا لأن CHIKV وDENV وZIKV تشترك في أنماط وأعراض انتقال متشابهة، فإن المراقبة المتزامنة أمر بالغ الأهمية. يقدم هذا البروتوكول طريقة qPCR ثلاثية باستخدام مجسات TaqMan لاكتشاف هذه الفيروسات في أنبوب واحد خلال 90 دقيقة. مقارنة بالاختبارات الفيروسية والاختبارات المصلية، تحسن هذه الطريقة الكفاءة من خلال تحديد العدوى النشطة والعدوى المشتركة بدقة عالية مع تبسيط سير العمل وإلغاء متطلبات المعدات المتخصصة.

أكد التحقق من العينات بعينات تقييم الجودة السريرية والخارجية (EQA) توافقا 100٪ مع اختبارات السينجل بليكس ذات المعيار الذهبي. تعد هذه الطريقة أداة فعالة لمراقبة الأمراض الحمى في المناطق المتوطنة، خاصة في البيئات ذات الموارد المحدودة حيث يعد احتواء التفشي السريع أمرا بالغ الأهمية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حمى الشيكونغونيا (CHIKF) هي مرض فيروسي شجراني ينتشر بشكل متزايد وينتقل بشكل رئيسي عن طريق ناقلات البعوض Aedes aegypti وAedes albopictus. يتميز هذا المرض بتفشيات متكررة في المناطق الاستوائية، ويظهر سريريا كمرض حاد وحمى غالبا ما يصاحبه ألم شديد في المفاصلوالتهاب المفاصل المزمن. حتى 26 يوليو، بلغ المجموع التراكمي لحالات الشيكونغونيا المؤكدة مختبريا في مدينة فوشان 4,824، مع حدوث 87.2٪ من هذه الحالات في منطقة شوندي. هذا التركيز الجغرافي الواضح يفرض عبئا كبيرا على البنية التحتية للصحة العامة الإقليمية ويؤدي إلى تكاليف رعاية صحية كبيرة، إلىجانب تحديات اقتصادية كلية أوسع.

في سياق التداخل المتزايد بين الدوران الفيروسي CHIKV وDENV وZIKV، تواجه المنهجيات التشخيصية الحالية ثلاث قيود رئيسية. أولا، لا تستطيع الاختبارات المصلية التمييز بين العدوى الحادة بسبب استمرار الأجسام المضادة لفترة طويلة بعد إزالة الفيروس1. ثانيا، تقنيات الزراعة الفيروسية تظهر معدلات حساسية منخفضة وتتطلب عدة أيام، مما يعيق اتخاذ القرار السريري في الوقت المناسب. ثالثا، على الرغم من أن اختبارات PCR الكمية تظهر تخصصا عاليا (تتجاوز 95٪)، إلا أنها لا تستطيع اكتشاف العدوى المشتركة داخل تفاعل واحد، وهو عيب كبير بالنظر إلى معدل العدوى المشتركة المبلغ عن CHIKV-DENV المبلغ عنه 12.8٪في الهند. تشير المراقبة التطورية إلى تحول جذري. سلسلة ECSA، التي كانت مهيمنة خلال وباء الهند 2019-2022، اكتسبت طفرات متقاربة في بروتيناتها المحيطة: E1-A226V (تعزيز عدوى البعوض) وE2-K252Q (المرتبطة بالتهرب المناعي). أدت هذه الطفرات إلى وجود نمط جيني موثق بضراوة أعلى، كما ورد في دراسات مراقبة حديثة من كيرالا وماهاراشترا3. في الوقت نفسه، تواجه الصين تحديات من استيراد النمط الجيني ECSA، كما هو موثق في تفشي يونان، وأنماط جينية أخرى، مع الإبلاغ عن انتقال ذاتي العدوى في عدة محافظات، بما في ذلك يونان4.

تخلق هذه الحقائق احتياجات عاجلة ومحدودة الموارد ل (1) التشخيص التفريقي رغم تداخل المظاهر السريرية5، (2) اختبارات تشخيصية تلغي تعقيد الأجهزة التي عادة ما تتطلبها أجهزة PCR الكمية التقليدية في الوقت الحقيقي (qPCR)6، و(3) التحقق الشامل لتقنيات نقطة الرعاية الجديدة، بما في ذلك RT-LAMP وطرق CRISPR5. لمعالجة هذه التحديات التشخيصية، نقترح إجراء اختبار PCR ثلاثي سريع يستخدم نظاما متكاملا مؤتمتيا بالكامل، مما يتيح الكشف المتزامن عن CHIKV وDENV وZIKV في تفاعل واحد. قمنا بالتحقق من أداء اختبار qPCR الثلاثي الخاص بنا من خلال المقارنة المباشرة مع اختبارات سينجل بليكس5 المعتمدة، والتي كانت بمثابة معيار مرجعي. توضح الأقسام التالية الإجراءات لكل من اختبار الثلاثي واختبارات المرجع المفردة. يتم عرض التحليل المقارن للنتائج من كلا الطريقتين في قسم النتائج التمثيلية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تلتزم هذه الدراسة بالإرشادات الأخلاقية التي وضعتها لجنة الأخلاقيات في مستشفى مقاطعة قوانغدونغ الشعبية، الجامعة الطبية الجنوبية، قوانغتشو، الصين (رقم الموافقة: KY2025-510-01). يمكن العثور على معلومات مفصلة حول المواد المستخدمة في هذا البحث (الكواشف، المواد الكيميائية، المعدات، والبرمجيات) في جدول المواد.

1. اختيار المشاركين

  1. اختر المشاركين في الفئة العمرية من 18 إلى 60 سنة.
  2. اختر المشاركين الذين ظهروا لديهم مرض حمى حاد (T الإبطي ≥ 38 درجة مئوية) خلال 12 يوما من ظهور الأعراض، بالإضافة إلى طفح جلدي أو ألم مفاصل أو تضخم غدد عنق الرحم، وسفر حديث إلى مناطق متوطنة للشيكونغونيا؛ أو الأفراد الذين لا تظهر عليهم أعراض ولديهم تاريخ سفر متطابق.
  3. الاستثناء: استخدام مضادات الميكروبات/مضادات الفيروسات خلال 7 أيام أو مرض حمى ناتج عن فيروس نقص المناعة البشرية المؤكد أو أورام خبيثة.

2. جمع العينات ومعالجتها

  1. تأكد من أن التغليف الخارجي لصندوق العينة لم يتضرر ولم ينته صلاحيته، ثم قم بإزالة المواد الداخلية.
  2. ضع الموضوع في وضعه مع الذراع الممدودة. حدد الوريد الذراعي الوسيط، وضع رباط ضاغط، وقم بتعقيم موقع الوريدي بمسحة كحولية بنسبة 70٪.
  3. اجمع 1~3 مل من الدم من الوريد الأمامي للشخص باستخدام أنبوب جمع دم خال من مضادات التخثر.
  4. اقلب الأنبوب بلطف 5-8 مرات واتركه يتجلط في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
  5. قم بعمل طرد مركزي عينة الدم عند 4 درجات مئوية، 1000 × جرام على جهاز طرد مركزي، لمدة 10 دقائق. يمكن اختبار عينة المصل التي تم الحصول عليها بعد الطرد المركزي فورا.
  6. قم بتقسيم المصل الفائق بعناية إلى أنابيب طرد مركزية دقيقة معقمة. استخدم المصل فورا للاختبار، أو خزن الليكوات عند -80 درجة مئوية حتى يتم تحليل المزيد من الأحماض النووية الممرضة عبر qPCR.

3. الكشف الآلي عن QPCR باستخدام ثلاثي الأبعاد لفيروس CHIKV وDENV وZIKV

  1. تحضير الكاشف والأنابيب
    1. استرجع جميع المواد المطلوبة من التخزين وذوبها في درجة حرارة الغرفة.
    2. افحص بصريا كل أنبوب كشف TD مغلق بحثا عن تلف أو فشل في الختم. تخلص من أي أنابيب تضررت.
    3. قم بتدوير مؤقت لمخزن استخراج حمض النووي TD لمدة 5 ثوان لضمان التجانس.
    4. يتم توزيع 500 ميكرولتر من المخزن المتجانس بشكل معقم في أنبوب كاشف استخراج TD (يحتوي على خرزات مغناطيسية متجمدة باللون البنفسجي).
    5. قم بتدوير الخليط بقوة لمدة 30 ثانية حتى تذوب جميع المكونات بالكامل وتعاد تعليق الخرزات بالكامل.
    6. انقل المحلول المعاد تشكيله بالكامل إلى أنبوب كشف TD معنون مسبقا.
  2. تحميل العينات
    1. بيبت 200 ميكرولتر من المصل الشفاف وغير المحلل وغير دهني في أنبوب الكشف عن TD المعد.
    2. أغلق الأنبوب بإحكام وقلبه عشر مرات ليتم خلطه بشكل متجانس.
      ملاحظة: أثناء الانعكاس، دع طبقة البارافين تطفو لفترة وجيزة داخل الأنبوب. هذا جزء طبيعي من العملية.
  3. تشغيل الأجهزة وجمع البيانات
    1. أدخل أنابيب الكشف المغلقة في الفتحات المخصصة للمحلل .
    2. على واجهة شاشة اللمس، أدخل معلومات تعريف العينة.
    3. اضغط زر Start Detection لبدء سير العمل الآلي بالكامل والمغلق.
      ملاحظة: سيقوم النظام تلقائيا بمسح الباركود، واستخراج الأحماض النووية عبر التقاط الخرزات المغناطيسية، وتضخيم PCR بالفلورة دون تدخل مستخدم إضافي. يتضمن البرنامج القياسي خطوة إزالة الطبعة عند 95 درجة مئوية لمدة 3 دقائق، تليها 40 دورة تضخيم.
  4. تفسير النتائج
    1. عند الانتهاء من التشغيل، راقب نتائج التضخيم لجميع الأهداف الثلاثة (CHIKV، DENV، ZIKV) والتحكم الداخلي على نفس الشاشة.
    2. سجل القراءة المولدة تلقائيا، "إيجابية" أو "سلبية" أو "غير صالحة"، لكل ممرض مستهدف في قناة الفلورة الخاصة به.
      ملاحظة: يستخدم البرمجيات الداخلية للنظام عتبة دورة (Ct) مقدارها 37.0 للتفسير التلقائي. لا حاجة لتحليل بيانات يدوي.

4. اختبارات qPCR الموحدة المرجعية لمقارنة الطرق

  1. تحضير كواشف استخراج الأحماض النووية
    1. أخرج اللوحة المعبأة مسبقا من المجموعة. انقر بلطف على صفيحة 96 بئر لجعل الكواشف والخرزات المغناطيسية تتركز كلها في قاع صفيحة 96 بئر. قم بإزالة فيلم الختم المصنوع من رقائق الألمنيوم بعناية، مع تجنب اهتزاز لوحة 96 بئر لمنع تناثر السائل للخارج.
    2. في العمودين 1 و7 من صفيحة تحتوي على 96 بئرا، يضاف أولا 20 ميكرولتر من البروتيناز K أولا، يليه 200~300 ميكرولتر من العينة التي سيتم استخراجها.
    3. الاستخراج الآلي من الأحماض النووية (طريقة المعتمدة على الخرزات المغناطيسية)
      1. توضع ألواح 96 بئر معبأة مسبقا (مع عينات) في الفتحات المقابلة لنظام استخراج الأحماض النووية الآلي.
      2. عملية استخراج الحمض النووي هي كما يلي: امتصاص الخرزات المغناطيسية المرتبطة بحمض النووي باستخدام قضيب مغناطيسي داخل غرفة المختبر. انقل مركب الخرزات إلى فتحة الكاشف التالية المخصصة. فعل جهاز التحريك لخلط السائل جيدا مع الخرزات المغناطيسية من خلال التحريك السريع والمتكرر. السماح لمستخرج الأحماض النووية الآلي بتنفيذ الخطوات التالية تلقائيا: 1) تحلل الخلية: 10 دقائق عند 25 درجة مئوية. 2) امتصاص الأحماض النووية: 15 دقيقة عند 70 درجة مئوية، مع الامتصاص المغناطيسي 3 مرات. iii) الغسل: الخلط لمدة دقيقتين (تكرار 3 مرات)، يليه امتصاص مغناطيسي مرتين (15 ثانية لكل منهما). 4) الاستنساخ: يتم الامتصاص المغناطيسي مرتين (5 دقائق لكل منهما)، مع الامتصاص المغناطيسي ثلاث مرات. في النهاية، تحصل على أحماض نووية عالية النقاء.
    4. للكشف الفوري، استنشق مباشرة القطرات التي تحتوي على حمض نووي من العمودين 6 و12. للتخزين طويل الأمد، انقل عينات الأحماض النووية المتبقية إلى -20°C.
  2. تحضير كواشف التضخيم
    ملاحظة: لتفاعل PCR سينجبلكس، جهز ثلاثة أنابيب PCR منفصلة باستخدام ثلاثة إنزيمات مختلفة وثلاثة خلطات تفاعلية مقابلة. أكمل تحضير المادة على ثلاث خطوات منفصلة. نظرا لأن خطوات التحضير متشابهة، سنعرض فقط خطوات التحضير لكاشف كشف CHIKV أدناه.
    1. إزالة محلول تفاعل تضخيم الأحماض النووية ومحلول تفاعل CHIKV (بادئات/مجسات خاصة ب CHIKV) من المجموعة. بعد الذوبان، وضعها في بيئة بدرجة حرارة 22~25 درجة مئوية، وامزجها جيدا بحركة هز قوية، ثم قم بإجراء عملية طرد مركزي قصيرة (1000 × g، 15 ثانية، 22~25 °C).
    2. احسب العدد الكلي للتفاعلات ك N + 2 (حيث N = عدد عينات الاختبار، +2 = اختبار سلبي واحد وواحد إيجابي في الجودة). تحضير الخليط الرئيسي في أنبوب جهاز الطرد المركزي الدقيق بحجم مناسب عن طريق دمج ما يلي لكل تفاعل: محلول تفاعل تضخيم حمض نووي 17 ميكرولتر (يحتوي على محلول مخزن، dNTPs، بوليميرازين DNA، إنزيم UDG)، محلول تفاعل CHIKV بسعة 3 ميكرولتر (يحتوي على بادئات، مجسات لجينات هدف CHIKV، وIC). قم بعمل Vortex على Master Mix جيدا لضمان المزج الكامل. قم بعمل طرد مركزي مؤقت للأنبوب بقوة 10,000 × جرام لمدة 15 ثانية في درجة حرارة الغرفة (22~25 درجة مئوية) لجمع المحلول في الأسفل. قم بتوزيع 20 ميكرولتر من الخليط الرئيسي في كل أنبوب تفاعل PCR.
    3. أضف عينات حمض النووي ومراقبة الجودة: في أنابيب تفاعل PCR المعدة أعلاه (20 ميكرولتر)، أضف على التوالي 5 ميكرولتر من الحمض النووي من عينات مختبرة، وتحكم إيجابي، وتحكم سلبي، محققا حجما نهائيا يبلغ 25 ميكرولتر لكل أنبوب؛ أغلق الأنابيب بإحكام ونفذ الطرد المركزي الفوري (1000 × g، 15 ثانية، 22 ~25 درجة مئوية) ثم وضع الأنابيب في جهاز PCR.
  3. تضخيم PCR
    1. اضبط برنامج الدراجات كما يلي: ما قبل التباطؤ: 50 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، ثم عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة (كلا الخطوتين معا يشكلان دورة واحدة); الخطوتان التاليتان لمدة 40 دورة: إزالة الطبيعة بمعدل 94 درجة مئوية لمدة 15 ثانية والتلدين بدرجة 55 درجة مئوية لمدة 45 ثانية.
    2. اضبط معلمات كشف إشارة الفلورة كما يلي: وسم الفلورسنت FAM لجينات CHIKV؛ يستخدم وسم الفلورسنت VIC لجين IC كتحكم داخلي للطقم. اجمع البيانات عند 55 درجة مئوية. عند اكتمال التفاعل، تأكد من حفظ البيانات للتحليل المستقبلي.
    3. تحليل البيانات باستخدام برامج خاصة ب qPCR
      1. معلومات العينة: في مخطط تخطيط لوحة البئر للبرنامج، قم بتسمية أنواع العينات (مثل التحكم الإيجابي، التحكم السلبي، العينة غير المعروفة، الجين المرجعي الداخلي، إلخ) المقابلة لمواقع تحميل العينة.
      2. وضع أنابيب التفاعل: افتح غطاء وحدة تسخين الآلة، وضع لوحة/أنابيب PCR المغلقة بثبات بداخلها، تأكد من ملاءمتها بقوة مع وحدة التسخين، وأغلق غطاء الوحدة بإحكام (لتجنب عدم تساوي درجة الحرارة)
      3. بدء رد الفعل: بعد التأكد من صحة إعدادات البرنامج في البرنامج، اضغط على بدء التشغيل وسجل معرف التجربة للرجوع إليه لاحقا.
      4. إيقاف السير وإزالة الأنابيب: بعد اكتمال البرنامج، انتظر حتى تنخفض درجة حرارة وحدة التدفئة إلى أقل من 50 درجة مئوية. ثم افتح الغطاء وأزل بحذر لوحة أو أنابيب PCR. تابع التحليل اللاحق أو تخزين العينات حسب الحاجة.
      5. تحليل البيانات قبل المضي قدما في التحليل، تأكد أن: 1) منحنيات التضخيم لجميع العينات والتحكم الداخلي تكون على شكل حرف S بشكل مميز؛ 2) يتم ضبط عتبة الفلورة ضمن الطور الأسي، مما يعطي قيم Ct ≤ 38 دورة (CV < 5٪); iii) نتائج التحكم صحيحة، مما يشير إلى عدم وجود تلوث. إذا لم يتم تحقيق أي شرط أو إذا أظهرت العينة تضخيم غير طبيعي (مثل منحنى غير نمطي أو CT في النطاق الحرج)، أعد فحص الدفعة بأكملها أو العينة المحددة وفقا لذلك.
      6. معالجة البيانات الخام باستخدام البرنامج لتحديد قيم Ct باستخدام العتبة المختارة تلقائيا؛ تعتبر العينة موجبة إذا كانت Ct < 38 ومنحنى تضخيمها يظهر شكل سيغمويدي.

5. السلامة البيولوجية والتخلص من النفايات

  1. انقل جميع المواد إلى حاوية بيولوجية مخصصة مقاومة للثقب وقم بإزالة التلوث عن طريق التعقيم قبل التخلص النهائي من خلال نظام النفايات الطبية المؤسسي. انقل هذه المواد فورا إلى حاوية بيولوجية مقاومة للتسربات ومقاومة للثقوب وتحمل علامة على النفايات عالية الخطورة. وفقا للإرشادات المؤسسية، قم بتطهير جميع النفايات التي تحتوي على منتجات مضخمة عن طريق التعقيم (مثل 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة) لتعطيل مسببات الأمراض وتحليل الأحماض النووية. وأخيرا، التخلص من النفايات المعقمة من خلال نظام إدارة النفايات الطبية المخصص.
    ملاحظة: نفذ جميع الخطوات وفقا لممارسات السلامة الحيوية المستوى 2 (BSL-2)، باستخدام معدات الحماية الشخصية المناسبة لتقليل مخاطر التعرض.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

للتحقق من استقرار ودقة نظام الكشف ثلاثي PCR، اخترنا خمس عينات ممثلة سريريا من مختبرنا الداخلي وعشر عينات خارجية للكشف عن الحقيقة للتحقق من ذلك. تشمل هذه العينات السريرية الخمسة الممثلة الحالات السلبية والإيجابية (S1-S5)، بما في ذلك عينات إيجابية ل CHIKV وDENV، تم اختيارها لإثبات التطبيق السريري للاختبار ولدعم التحقق الداخلي لأداء الاختبار (الجدول 1). تضمنت لوحة العينات المعمية لعام 2025 لاكتشاف مسببات الأمراض المنقولة بالبعوض الناشئة 10 عينات بلازما معطلة (DZC2511-2520). احتوت هذه على تركيزات وتركيبات مخ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فيروس CHIKV هو فيروس RNA أحادي السلسلة ذو الإحساس الإيجابي، ويصنف ضمن جنس الفيروسات الألفا من عائلة Togaviridae7. تسارع الاحتباس الحراري، وتكثيف التجارة الدولية، وتوسع شبكات السياحة زادت بشكل جماعي من خطر التعرض البشري لتهديدات الفيروسات الأربوية. على مدى العقد الماضي، أدى التطور السريع للتشخيصات الجزيئية إلى تغيير جذري في مشهد إدارة الأمراض المعدية. من بين هذه التقنيات، اكتسب qPCR شهرة خاصة في المختبرات السريرية في جميع أنحاء الصين بسبب تس...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنهم لا يملكون مصالح متنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذه الدراسة من قبل مؤسسة قوانغدونغ للأبحاث الطبية (A2025034). لم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة، أو جمع البيانات وتحليلها، أو قرار النشر، أو إعداد المخطوطة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مستخرج الأحماض النووية الآليدانسمارت 32لاستخراج الحمض النووي
بيكمان X-12بيكمانALA04H01من أجل  الطرد المركزي في المصل 
BSC-1500IIA2-Xالقاعدة الحيويةSEDA 20143222263خزانة السلامة الحيوية
الطرد المركزي الإلكترونيويالتكقم بطرد مركزي بالسائل المتبقي من جدار الأنبوب
محلل PCR طبي آلي بالكاملBioustar‌  UP0102تضخيم PCR الكمي بالفلوريسنت
مجموعة كشف حمض النوى لفيروس شيكونغونيا (طريقة PCR-مسبار فلوري)DAAN 20250804اكتشاف وملاحظة جينات فيروس شيكونغونيا
مجموعة كشف حمض النوى لفيروس حمى الضنك (طريقة PCR-الفلوري)DAAN 202504003اكتشاف وملاحظة جينات فيروس فيروس الضنك
مجموعة كشف الحمض النووي لفيروس حمى الضنك، فيروس زيكا، وفيروس الشيكونغونيا (طريقة PCR-fluorescent probe)Bioustar‌  20250724اكتشاف وملاحظة فيروس حمى الضنك، فيروس زيكا، وجينات فيروس شيكونغونيا.
مجموعة كشف حمض نووي لفيروس زيكا (طريقة PCR-الفلوري)DAAN 202508041اكتشاف فيروس زيكا  الجينات
مجموعة استخراج الأحماض النوويةداناستخلاص حمض النووي
نظام تحليل PCR الطبي الآلي بالكامل من SLANهونغشيتحليل البيانات
جهاز PCR الوقت الحقيقي SLAN-96SهونغشيSLAN-96Sتضخيم PCR الكمي بالفلوريسنت
المجمدات فائقة الحرارة منخفضة الحرارة (DW-YL450)ميلينج20172220091 SEDA-20 & deg; C لتخزين الكواشف
فورتكس-5كيلين-بيللمادة الخلط

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chikungunya epidemiology update - June 2025. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/m/item/chikungunya-epidemiology-update-june-2025 (2025).
  2. Li, Y., Chen, H., Wang, J., Zhang, X., Liu, B. Notes from the field: An outbreak of chikungunya fever in China - Foshan City, Guangdong Province, China, July 2025. Curr Med Sci. 7, 1064-1065 (2025).
  3. Naren Babu, N., et al. Clinical and molecular epidemiology of chikungunya outbreaks during 2019-2022 in India. Sci Rep. 15, 27280(2025).
  4. Liu, L. B., et al. Epidemiological and clinical characteristics of the chikungunya outbreak in Ruili City, Yunnan Province, China. J Med Virol. 94, 499-506 (2021).
  5. Cardona-Trujillo, J. D., Ocampo-Cárdenas, T., Tabares-Villa, F. A., Zuluaga-Vélez, A., Sepúlveda-Arias, J. C. Recent molecular techniques for the diagnosis of Zika and chikungunya infections: A systematic review. Heliyon. 8, e10225(2022).
  6. Hauner, A., et al. Technical validation of a multiplex real-time PCR for combined detection of Rift Valley fever, chikungunya, Zika and dengue viruses. J Virol Methods. 337, 115174(2025).
  7. Burt, F. J., et al. Chikungunya virus: An update on the biology and pathogenesis of this emerging pathogen. Lancet Infect Dis. 17, e107-e117 (2017).
  8. de Souza, W. M., et al. Chikungunya: A decade of burden in the Americas. Lancet Reg Health Am. 30, 100673(2024).
  9. Laurent, P., et al. Development of a sensitive real-time reverse transcriptase PCR assay with an internal control to detect and quantify chikungunya virus. Clin Chem. 53, 1408-1414 (2007).
  10. Pongsiri, P., Praianantathavorn, K., Theamboonlers, A., Payungporn, S., Poovorawan, Y. Multiplex real-time RT-PCR for detecting chikungunya virus and dengue virus. J Trop Med. 5, 342-346 (2012).
  11. Santiago, G. A., et al. Performance of the Trioplex real-time RT-PCR assay for detection of Zika, dengue, and chikungunya viruses. Nat Commun. 9, 1391(2018).
  12. Kanti, D., et al. Simultaneous detection of Zika, chikungunya and dengue viruses by a multiplex real-time RT-PCR assay. J Clin Virol. 83, 66-71 (2016).
  13. Waggoner, J. J., et al. Single-reaction multiplex reverse transcription PCR for detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses. Emerg Infect Dis. 22 (7), 1295-1297 (2016).
  14. Souza, J. V. C., et al. Viral metagenomics for the identification of emerging infections in clinical samples with inconclusive dengue, Zika, and chikungunya viral amplification. Viruses. 14, 1933(2022).
  15. Berrueta, M., et al. Safety, immunogenicity, and effectiveness of chikungunya vaccines in pregnant persons, children, and adolescents: A protocol for a living systematic review and meta-analysis. Reprod Health. 22, 56(2025).
  16. Lura, T., et al. A validated triplex RT-qPCR protocol to simultaneously detect chikungunya, dengue and Zika viruses in mosquitoes. J Vector Borne Dis. 59, 198-205 (2022).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Triplex PCRPoint Of Care TestingChikungunya DetectionDengue DetectionZika Virus DetectionTaqMan ProbesArbovirus CoinfectionqPCR MethodFebrile Illness MonitoringRapid Virus Detection
Video Coming Soon

Related Articles