يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

الآليات الجزيئية لصب داتشنغتشي في متلازمة الضيق التنفسي الحاد: تحليل علم الأدوية الشبكي والمعلوماتية الحيوية

228 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69651

⸱

مارس 27, 2026

 , 
1Department of Emergency Medicine, The Fourth Affiliated Hospital of Soochow University

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه الدراسة الآليات الجزيئية لمحلول داتشنغتشي (DCQD) ضد متلازمة الضيق التنفسي الحاد (ARDS) باستخدام علم الأدوية الشبكي، والمعلوماتية الحيوية، والربط الجزيئي. تم تحديد الأهداف الرئيسية والمسارات. وقد أكد الالتحام الجزيئي تفاعلات قوية بين الليغاند والهدف، مما يدعم الإمكانات العلاجية متعددة الأهداف ل DCQD لمرض ARDS.

الملخص

متلازمة الضيق التنفسي الحاد (ARDS) هي مضاعفة مهددة للحياة في الإنتان، وتتميز بنقص الأكسجين المقاوم للحرارة والتهاب رئوي. حاليا، لا تزال التدخلات الدوائية الفعالة محدودة. أظهر الطب الصيني التقليدي (TCM)، الذي يمثله ديكوكشن داتشنغتشي (DCQD)، إمكانات علاجية في تعديل الاستجابات الالتهابية المعقدة. لدراسة آلية DCQD في علاج ARD، تم أولا استرجاع المكونات النشطة ل DCQD وأهدافها المرتبطة بها من قواعد البيانات العامة. تم تحديد أهداف مرتبطة بنظام ARDS من خلال تحليل المعلوماتية الحيوية لمجموعات البيانات العامة. من خلال تقاطع الأهداف الخاصة بالدواء مع الأهداف المرتبطة بالمرض، تم بناء شبكة تفاعل DCQD-ARDS باستخدام تحليل تفاعل البروتين والبروتين (PPI) والتثريب. كشف التحليل الشامل عن 32 جينا متداخلا حاسما لفعالية DCQD العلاجية في مرض ARDS. سلط تحليل الإثراء الضوء على المسارات الرئيسية، بما في ذلك مسار إشارات الكيموكين، وإشارات المستقبلات الشبيهة ب NOD، وتكوين فخ العدلات خارج الخلية (NET)، والتي تشارك في التعديل المناعي والالتهاب. حددت شبكة PPI أهداف أساسية HSP90AB1، MMP9، HSP90AA1، ARG1، وMYC. أكد الالتحام الجزيئي وجود ارتباط قوي بين هذه الأهداف ومكونات DCQD. تحل نتائجنا الأساس الميكانيكي الذي يدعم DCQD كعلاج مساعد واعد لمتلازمة التعفن المزمن.

المقدمة

متلازمة الضيق التنفسي الحاد (ARDS) هي متلازمة سريرية شديدة التجانس تسببها عوامل رئوية أو خارج رئوية مختلفة، وتتميز بشكل رئيسي بإصابة رئوية منتشرة ونقص تأكسج مقاوم للمقاومة1. منذ تعريفه الأول في عام 1967، تطور فهم ARDS باستمرار، مما أدى إلى مراجعات متكررة لمعاييرهاالتشخيصية 2. علاوة على ذلك، فإن تطبيق استراتيجيات علاجية، بما في ذلك التهوية الواقية للرئة، والدعم خارج الجسم الحي، والوضعية المستلقية، أثر بشكل عميق على كل من الإدارة السريرية وتقدم البحث3. ومع ذلك، لا تزال وفيات متلازمة الحساسية السريعة مرتفعة بشكل مقلق. كشف مسح عالمي أن مرضى ARDS يشكلون 10.4٪ من جميع حالات الدخول في وحدات العناية المركزة. على الرغم من التقدم الكبير في الرعاية الحرجة خلال العقود الأخيرة، إلا أن معدلات الوفيات (سواء في العناية المركزة أو بعد الخروج) لا تزال بين 35-45٪.

الفسيولوجيا المرضية لمتلازمة ARDS معقدة، وتشمل إصابات بطانة الشعيرات الهوائية والبطانة الشعرية، واستجابات التهابية رئوية وجهازية، وإصابات الرئة الناتجة عن جهاز التنفسالصناعي. ومن الجدير بالذكر أن مرض ARDS المرتبط بكوفيد-19 يظهر خصائص مرضية فسيولوجية مميزة مقارنة بمتلازمة الالتهاب الضئيل الكلاسيكي، حيث قد يؤدي كوفيد-19 إلى جلطة أوعية دقيقة أكثر حدة والتهابا غير متجانس إقليميا. نظرا لتعقيد الفيزيولوجيا المرضية للمرض وتفاوتره العالي، لا يوجد علاج دوائي نهائي حاليا لمتلازمة الالتهاب الضحك المزمن. بعيدا عن الكورتيكوستيرويدات وعوامل الانسداد العصبي العضلي — التي يوصى بها بشكل مشروط بسبب فوائد الوفاة — لم تظهر علاجات دوائية أخرى (مثل أكسيد النيتريك [NO]، البروستاسيكلين، الإنترفيرون-β، المواد السطحية الرئوية، والبروتين النشط C) عدم فعالية سريرية. وعلى العكس، ثبت أن β-المنشطات (مثل ألبوتيرول) وعامل نمو الخلايا الكيراتينية ضارة 8,9. وبالتالي، يظل تطوير العلاجات الآمنة ومتعددة الوظائف أولوية بحثية حاسمة.

الطب الصيني التقليدي (TCM)، الذي يمتد تاريخه لأكثر من 3000 عام، استخدم للوقاية وعلاج أمراض الجهاز التنفسي المختلفة. من خلال آلاف السنين من التطبيق السريري وتحديث أبحاث الطب الصيني التقليدي، أظهرت إمكانيات في إدارة ARDS10,11. يمارس طب الطب الصيني الصيني تأثيراته العلاجية من خلال آليات متعددة المكونات والمسارات والأهداف المتعددة، خاصة من خلال تخفيف الاستجابات الالتهابية، وتعديل وظيفة المناعة، وحماية الأنسجة الرئوية. على سبيل المثال، حقن شوبيجينغ (XBJ)، وهو تحضير مشتق من طب الصيني الصيني يتكون من جذور Paeonia lactiflora، وجذور Ligusticum chuanxiong، وجذور Salvia miltiorrhiza، وزهور Carthamus tinctorius، وجذور Angelica sinensis، على عدة مكونات نشطة. يخفف من ARDS من خلال تنظيم وظيفة المناعة، والإجهاد التأكسدي، والالتهاب من خلال مسارات إشارات IL-17 وHIF-1 وTNF13. أظهرت الدراسات السريرية أيضا أن المرضى الذين خضعوا لعلاج XBJ أظهروا معدلات وفيات أقل، وإقامة أقصر، ومستويات أقل من السيتوكينات الالتهابية14. خلال جائحة كوفيد-19، برز النشاط المناعي المفرط الناتج عن استجابات التهابية شديدة كعامل حاسم في الحالات الشديدة15,16. بالإضافة إلى ذلك، تمتلك بعض مكونات الطب الصيني الصيني خصائص مضادة للأكسدة، مما يمكنها من إزالة الجذور الحرة وتخفيف إصابات الرئة الناتجة عن الإجهاد التأكسدي. غالبا ما يصاحب ARDS خلل في وظائف الدورة الدموية الدقيقة الرئوية، مما يعيق تبادل الغازات. تظهر بعض تركيبات الطب الصيني الصيني تأثيرات تنشيط الدم وإزالة السكون، مما يحسن الدورة الدموية الدقيقة لتقليل الوذمة الرئوية وتعزيز الأكسجة. علاوة على ذلك، يمكن للطب الصيني التقليدي أن يخفف من إصابات الرئة من خلال تنظيم مسارات موت الخلايا 12,17,18. تؤكد هذه النتائج مجتمعة الإمكانات السريرية الكبيرة للرفاق الصيني التقليدي في علاج متلازمة الحساسية الضوئية (ARD).

صلصة داتشنغتشي (DCQD)، وهي تركيبة أساسية في طب الطب الصيني الصيني للحالات الحادة، تتكون من أربعة مكونات عشبية: الراوند، الميرابيليت، لحاء الماغنوليا، والبرتقال المر غير الناضج19. كتركيبة مركبة، يظهر DCQD تفاعلات متعددة المكونات والأهداف المتعددة، مما يثبط بشكل فعال إنتاج مختلف الوسطاء الالتهابيين وأنواع الأكسجين التفاعلية، بما في ذلك عامل نخر الورم-ألفا (TNF-α) والإنترلوكين-6 (IL-6)20,21. صندوق مجموعة الحركة العالية 1 (HMGB1)، وهو وسيط التهابي عميق، يلعب دورا محوريا في المرض وتطور الإنتان. المستقبل الشبيه ب Toll-4 (TLR4)، وهو مستقبل يعبر عنه في الخلايا المناعية، ينشط مسارات الإشارات الالتهابية اللاحقة، مثل العامل النووي - كابا B (NF-κB) وكيناز البروتين المنشط بالميتوجين (MAPK)، عند ارتباط HMGB1، مما يؤدي إلى زيادة إطلاق السيتوكينات الالتهابية. يمارس DCQD تأثيرات علاجية من خلال تعديل محور إشارة HMGB1-TLR4، مما يثبط تنشيط NF-κB وMAPK p38، ويقلل من إنتاج السيتوكين الالتهابي، ويخفف من الالتهاب الجهازي22,23. علاوة على ذلك، تمارس مكونات DCQD تأثيرات علاجية من خلال تعديل مسارات الإشارات المؤيدة للالتهابات، والإجهاد التأكسدي، والموت المبرمج، والبيروبوتوز 24,25,26,27. يلعب DCQD أيضا دورا حاسما في علاج ARDS من خلال تخفيف الاستجابات الالتهابية المفرطة الناتجة عن الدهون البوليسكارية (LPS) وتلف الظهارة الرئوية. ميكانيكيا، يثبط تجميع كيناز البروتين 1 (RIPK1) التفاعلي مع مستقبلات بروتين Z-DNA 1 (RIPK1)-PANoptosome (يشير إلى عملية تكوين مركب متعدد البروتينات يمكن أن يسبب موت الخلايا الالتهابية)، مما يخفف من مرض PANoptosis28 الناتج عن LPS. الإعطاء الفموي لعلاج DCQD يرفع من تعبير بروتين الأكوابورين-1 (AQP-1) والأكوابورين-5 (AQP-5) في أنسجة الرئة، بينما يثبط مسار إشارات TLR4/NF-κB وإنتاج السيتوكين الالتهابي، مما يخفف في النهاية من الالتهاب المرتبط ب ARDS.

التركيب المعقد للطب الصيني الصيني، الذي يتميز بالتأثيرات التآزرية لعدة مركبات، يقدم مزايا وتحديات في توضيح آلياته الدوائية. قد تؤثر مكونات الطب الصيني التقليدي المختلفة تأثيرات علاجية من خلال أهداف جزيئية ومسارات مختلفة، بينما تزيد التفاعلات المحتملة بين هذه المكونات من تعقيد الفهم الشامل لآلياتها المتكاملة29,30. على وجه التحديد، لا تزال المواد الكيميائية النباتية المشاركة في علاج ARDS ومساراتها الميكانيكية بعيدة المنال. لمعالجة هذه الفجوات المعرفية، يحمل علم المعلوماتية الحيوية، وهو مجال متعدد التخصصات ناشئ يدمج تحليلات البيانات الضخمة والذكاء الاصطناعي، وعدا في تحديد المكونات الدوائية الفعالة وفك رموز آليات الأدوية الأساسية 31,32,33. وبناء عليه، تستخدم هذه الدراسة أساليب المعلوماتية الحيوية، بما في ذلك علم الأدوية الشبكي والربط الجزيئي، لتحديد المواد الكيميائية النباتية الأساسية، والأهداف الجزيئية، والمسارات الكامنة وراء تأثيرات DCQD العلاجية في علاج ARDS بشكل منهجي.

استنادا إلى المنطق أعلاه، نفترض أن DCQD يمارس تأثيرات علاجية على ARDS من خلال تعديل العمليات المرضية الرئيسية بشكل تآزري، بما في ذلك اختلال تنظيم الالتهاب وتنشيط الخلايا المناعية، من خلال شبكته متعددة المكونات. لاختبار هذه الفرضية والانتقال إلى ما بعد حدود التنبؤ التقليدي بالأهداف، استخدمنا نهجا متكاملا في المعلوماتية الحيوية. يكمن الابتكار الرئيسي في هذه الاستراتيجية في تقاطع الأهداف المحتملة ل DCQD مع الجينات المرتبطة ب ARDS المشتقة ليس فقط من قواعد البيانات العامة، بل والأهم من ذلك، من مجموعة بيانات النسخ السريرية (GSE32707) للمرضى المصابين ب ARDS الناتج عن الإنتان. يهدف هذا الفحص المكون من ثلاث مستويات إلى تعزيز الصلة السريرية لنتائجنا وتحديد الجينات الأساسية والمسارات التي قد يخفف من خلالها DCQD من ARDS، مما يوفر إطارا نظريا أكثر دقة وموثوقية لآلية عمله.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

جميع المواد، بما في ذلك قواعد البيانات والبرمجيات والكواشف التجريبية، المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في مستشفى بحيرة سوتشو دوشو (رقم التصريح: 2410008).

فحص المكونات النشطة واستهداف DCQD
تم فحص المكونات الفعالة للأعشاب المكونة مثل الراوند، الميرابيلايت، لحاء الماغنوليا، والبرتقال المر غير الناضج في محلول دا-تشنغ-تشي (DCQD) من قاعدة بيانات أنظمة الأدوية التقليدية للطب الصيني (TCMSP) باستخدام المعايير التالية: التوافر الحيوي الفموي (OB) ≥30٪) وتشبه الدواء (DL) ≥0.18). ثم تم جمع الأهداف المقابلة للمكونات النشطة المحددة. يتم اعتماد هذه العتبات على نطاق واسع في دراسات علم الأدوية الشبكي لتصفية المركبات ذات الخصائص الدوائية الإيجابية وإمكانات أعلى لتكون جزيئات شبيهة بالدواء34,35. لتحسين موثوقية اختيار المركبات وتقليل التحيز الناتج عن فحص قاعدة بيانات واحدة، تم إجراء التحقق المتقاطع باستخدام قاعدة بيانات باتمان-الطب الصيني التقليدي. باتمان-طب الطب التقليدي هو قاعدة بيانات متكاملة تخزن التفاعلات المعروفة والمتوقعة بين مكونات الطب الصيني التقليدي والبروتينات المستهدفة، مما يساعد في استكشاف الآليات الدوائية للطب التقليدي واكتشاف الأدوية. يقدم الإصدار المحدث 2.0 مجموعة بيانات TTI موسعة بشكل كبير وميزات محسنة، مما يجعله مصدرا قيما لفهم آليات الطب الصيني التقليدي الجزيئية وتطوير علاجات جديدة للأمراض المعقدة. تم استبعاد المركبات التي لم تكن أهدافا متوقعة أو بدرجات أهداف أقل من 20 في BATMAN-TCM. بالإضافة إلى ذلك، تم الاحتفاظ بالمركبات ذات قيم نسائية منخفضة نسبيا ولكن مع أهداف متوقعة في BATMAN-TCM وأنشطة دوائية موثقة جيدا (مثل الأنثراكوينونات والفلافونويدات) من خلال مراجعة الأدبيات. ولتقليل المكونات الإيجابية الكاذبة المحتملة بشكل أكبر، تم استبعاد الهرمونات الداخلية والمواد الشبيهة بالناقلات العصبية (مثل البروجسترون والسيروتونين) يدويا. تم استخدام المجموعة المركبة النهائية للتنبؤ بالأهداف لاحقا وبناء الشبكة. يتم توضيح سير العمل التفصيلي في الشكل التكميلي 1. القائمة النهائية للمكونات الفعالة موفرة في الجدول التكميلي 1.

معرفات SMILES (طريقة تدوين خطية تستخدم سلاسل ASCII لوصف البنية الكيميائية للجزيئات. من خلال استخدام رموز وقواعد محددة، يتم ترميز الذرات والروابط الكيميائية والطوبولوجيا الجزيئية في سلسلة مستمرة من الأحرف بدون مسافات، مما يتيح تخزينا ونقل معلومات جزيئية مختصرة وواضحة وقابلة للقراءة بواسطة الحاسوب لكل مكون نشط من قاعدة بيانات PubChem وتم التنبؤ بالأهداف المحتملة باستخدام توقع الأهداف السويسرية، مع تعيين معلمة الكائن الحي على 'الإنسان العاقل' وتطبيق حد التقدير لدرجة الاحتمالات >0. تم دمج مجموعات الأهداف التي تم الحصول عليها من كلا القاعدتين، وتمت إزالة الإدخالات المكررة لإنشاء مجموعة الأهداف النهائية للمرشح ل DCQD.

من المهم ملاحظة أن ميرابيليتوم (مانغشياو، Na₂SO₄·10H₂O)، وهو دواء معدني في DCQD، غير مدرج في قواعد بيانات TCMSP أو قواعد بيانات المركبات المستهدفة المشابهة. وبالتالي، وبسبب هذا القيد في قاعدة البيانات، لا تشمل شبكة المكون والهدف التي تم بناؤها في هذه الدراسة المساهمات المحتملة للميرابيلتوم. لذا تعتمد الشبكة على المكونات النباتية الكيميائية للمكونات العشبية الثلاثة الأخرى: روماتوم بالماتوم، ماغنوليا أوفيسيناليس، والحمضيات الهوائية.

تحليل التخصيب لأهداف DCQD
تم استيراد أهداف DCQD إلى قاعدة بيانات الميتا سكيب لتحليل الإثراء، مع اقتصار النوع على "الإنسان العاقل". تم إجراء تحليلات إثراء أنطولوجيا جينية (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)، حيث شملت الأولى العمليات البيولوجية (BP)، ومكونات الخلية (CC)، والوظائف الجزيئية (MF). تم اختيار أفضل 6 نتائج إثراء GO وأفضل 20 نتائج إثراء KEGG. تم توليد مخططات شريط KEGG و GO باستخدام الأداة الإلكترونية من المعلوماتية الحيوية. تم استيراد البيانات عبر حزمة DOSE في R لبناء مخطط شريط أنطولوجيا المرض (DO).

بناء شبكة "الطب العشبي-المكون-الهدف"
تم استيراد المكونات ذات الصلة ل DCQD وأهدافها المقابلة إلى Cytoscape 3.10.3 لبناء مخطط شبكة يوضح علاقات "الطب العشبي-المكون-الهدف". تم استخدام إضافة CytoNCA لحساب قيم الدرجات، وتم فحص أفضل 5 مكونات نشطة بناء على الترتيب.

استرجاع أهداف ARDS من قواعد البيانات العامة
باستخدام "متلازمة الضيق التنفسي الحاد" ككلمة مفتاحية، تم استرجاع الأهداف المتعلقة ب ARDS من قواعد بيانات OMIM وGeneCards. في بطاقات الجينات، تم اختيار أهداف بدرجة ملاءمة >5. بعد دمج وإزالة النسخ المكررة من كلا القاعدتين، تم الحصول على مجموعة أهداف مرشحة ل ARDS.

تحليل المعلوماتية الحيوية
تم تحميل مجموعة البيانات المتعلقة بالإنتان وARDS GSE32707 (منصة GPL570، n = 45)، والتي تضم بيانات RNA-seq من خلايا دموية أحادية النواة المحيطية ل 30 مريضا بمرض ARDS الناتج عن الإنتان و15 ضابطا سليما، من قاعدة بيانات NCBI GEO. تم استيراد البيانات باستخدام حزمة GEOquery في R، وتم إجراء التطبيع باستخدام حزمة ليما لتقليل التفاوت بين العينات. تم تحديد الجينات المعبر عنها بشكل تفاضلي (DEGs) باستخدام العتبات |log2FC| > 1 وP < 0.05. تم إجراء التصور عبر مخططات البراكين وخرائط حرارية. تم إجراء تحليلات إثراء GO وKEGG لتحليل المسارات، مع تقديم النتائج كمخططات فقاعية ومخططات شريطية.

التنبؤ بالأهداف المحتملة لاضطراب الحساسية العالية في علاج ARDS
تم إنشاء مخطط فين باستخدام أداة المعلوماتية الحيوية الإلكترونية لمقارنة DEGs، والأهداف المتعلقة ب ARDS من قواعد البيانات العامة، وأهداف أدوية DCQD، وبالتالي تحديد الأهداف العلاجية المحتملة ل DCQD لمرض ARDS.

بناء شبكة تفاعل البروتين والبروتين (PPI) وفحص الأهداف الأساسية
تم استيراد الأهداف المتداخلة إلى قاعدة بيانات STRING مع تعيين النوع على "الإنسان العاقل" وعتبة درجة التفاعل 0.4. تم تصدير بيانات شبكة PPI بصيغة TSV وعرضها باستخدام Cytoscape 3.10.3. تم تطبيق إضافة CytoHubba لفحص أفضل 10 أهداف بناء على درجات MCC، MNC، درجة، EPC، بين، قرب، شعاعية، ودرجات الإجهاد. أدى تقاطع هذه الأهداف إلى 5 أهداف أساسية.

بناء شبكة "الطب العشبي-المكون-المرض-المستهدف"
استنادا إلى الأهداف المتداخلة، تم تحديد مكونات DCQD المقابلة. تم استيراد المكونات ذات الصلة، إلى جانب أهدافها المرتبطة وروابطها بالأمراض، إلى Cytoscape 3.10.3 لإنشاء مخطط شبكي يوضح علاقات "الطب العشبي-المكون-الهدف-المرض".

تحليل إثرائي للأهداف الأساسية وبناء شبكة "الطب العشبي-المكون-الهدف-المرض-المسار"
لاستكشاف الوظائف البيولوجية المحتملة والمسارات الرئيسية للإشارات في DCQD في علاج ARD، خضع الأهداف الأساسية لتحليلات تخصيب GO وKEGG في Metascape (النوع: "الإنسان العاقل"). تم اختيار أفضل 10 في GO وأفضل 13 في نتائج إثراء KEGG. تم تنفيذ التصور باستخدام أدوات المعلوماتية الحيوية لإنشاء مخططات الفقاعات KEGG، ومخططات شريط GO، ومخططات الفقاعات Sankey. بالإضافة إلى ذلك، وبناء على نتائج الإثراء الوظيفي، تم إنشاء مخطط شبكة في Cytoscape 3.10.3 لتوضيح علاقات "الطب العشبي-المكون-الهدف-المرض-المسار".

الالتحام الجزيئي والتصور
تم استرجاع البنى الجزيئية الثانوية للمركبات من قاعدة بيانات PubChem، بينما تم الحصول على البنى ثلاثية الأبعاد للأهداف الأساسية من قاعدة بيانات PDB (http://www.rcsb.org/). تمت إزالة جزيئات الماء وبقايا الأحماض الأمينية باستخدام PyMOL. تم استيراد البروتينات والمركبات المستهدفة إلى أوتودوك للالتحام الجزيئي لحساب طاقات الربط. تم إجراء التصور باستخدام PyMOL. تم إنشاء خريطة حرارة طاقة الربط باستخدام حزمة pheatmap في R، مع أهداف أساسية على المحور x، ومركبات على المحور y، وتدرج لوني يمثل طاقات الربط. تم إنشاء مخططات تفاعل ثنائية الأبعاد لنتائج الالتحام باستخدام Discovery Studio Visualizer 4.5. تم إجراء الالتحام الجزيئي لتقييم جدوى الارتباط بين المركبات والأهداف، بدلا من التنبؤ بفعالية التثبيط الفعلية.

بناء نموذج الفأر ARDS
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات الطبية في مستشفى بحيرة سوتشو دوشو (2410008). تم الحصول على فئران ذكور سليمة C57BL/6J (عدد = 30؛ 20 ± 5 ج). تم تقسيم الفئران إلى مجموعة ضابطة (n = 10)، ومجموعة LPS (n = 10، LPS 10 ملغ/كغ)، ومجموعة DCQD (n = 10، وتلقيت DCQD 0.9 ج/كغ عبر التجويم الفموي مع LPS 10 ملغ/كغ). تلقت فئران مجموعة LPS حقنة داخل الصفاق من LPS. تم إعطاء الفئران في مجموعة DCQD بجرعة 0.9 ج/كغ عبر التمقم الفموي مباشرة بعد الحقن داخل الصفاق لجرعة LPS. تم أخذ القياسات مباشرة قبل وبعد استخراج الرئة من جميع الفئران. بعد ذلك، تم تخزين أنسجة الرئة عند -80 درجة مئوية.

تحليل البقعة الغربية (WB)
تم عزل البروتينات من تحلل نسيج الرئة في الفأر، وتم قياس تركيزاتها باستخدام مجموعة قياس كمية بروتين BCA. بعد ذلك، تم تغيير طبيعة البروتينات عن طريق الغليان عند 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. تم فصل البروتينات المعدلة على جل SDS-PAGE بنسبة 10٪ معد باستخدام مجموعة تحضير جل، ثم نقلت إلى غشاء PVDF. لمنع الارتباط غير النوعي، تم حجب أغشية PVDF في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق باستخدام محلول حجب سريع خال من البروتين. بعد الغسل باستخدام PBST، تم حضن الأغشية طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد MMP9 وHSP90 وMYC وARG1. بعد غسل آخر باستخدام PBST، تم حضن الأغشية لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة باستخدام ماعز مضاد للأرانب IgG(H+L) المرتبط ب HRP. وأخيرا، تم تطبيق مجموعة الكشف الكيميائي فائقة الحساسية لتحليل التلميع، وتم اكتشاف أشرطة البروتين الكيميائي المضيء باستخدام نظام تصوير كيميائي للتلميع الكيميائي BIO-RAD. تم إجراء تحليل التدرج الرمادي باستخدام ImageJ. الأجسام المضادة المستخدمة في هذه التجربة مدرجة في الجدول التكميلي 2.

تحليل اختبار المناعة المرتبطة بالإنزيمات (ELISA)
أولا، تم جمع سائل غسل القصبات الهوائية (BALF) عن طريق غسل ثلاث مرات باستخدام 2 مل من المحلول الملحي. تم تجميع سوائل الغسيل الناتجة وطردها المركزي عند 10,000 جرام لمدة 10 دقائق لإزالة الخلايا. ثم يتم استنشاق المادة الفائقة وتخزينها مجمدة في النيتروجين السائل. لاحقا، تم تحديد تركيزات السيتوكينات المستهدفة وفقا لتعليمات الشركة المصنعة باستخدام مجموعة Mouse IL-6 ELISA، ومجموعة ELISA Mouse IL-18، ومجموعة ELISA TNF-alpha للفأر. بعد ذلك، وضعت لوحة التفاعل في قارئ ميكرولوح، وتم قياس قيمة الكثافة البصرية (OD) لكل بئر عند طول موجي قدره 450 نانومتر، مع استخدام بئر التحكم الفارغ لضبط الصفر. وأخيرا، تم رسم منحنى معياري بناء على التركيزات وقيم OD المقابلة للمعايير. تم حساب تركيز العامل المستهدف في كل عينة وفقا لمعادلة المنحنى القياسية.

التحليل الإحصائي
تم تحليل البيانات باستخدام منشور GraphPad 10.1.2. تم تقييم أهمية الفروق بين المجموعات إحصائيا من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه أو اختبار t للطالب. إذا كانت قيمة P أقل من 0.05، يعتبر الفرق دلاليا؛ إذا كانت قيمة P أقل من 0.01، تعتبر ذات دلالة عالية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تحليل النشاط الحيوي لتحليل DCQD
لفك تشابك الآليات الجزيئية الكامنة وراء النشاط الحيوي لDCQD، تم تحديد الأهداف المحتملة أولا من خلال فحص قواعد بيانات التنبؤ بالأهداف السويسرية وقاعدة بيانات TCMSP. تم مطابقة ما مجموعه 16 مكونا من الراوند، و17 من البرتقال المر غير الناضج، و2 من لحاء الماغنوليا، مما أتاح 614 هدفا محتملا (الشكل 1A). لاحقا، تم إنشاء مخطط شبكي لعرض العلاقات بين الأدوية العشبية الثلاثة، ومكوناتها الفعالة ال 35، والأهداف ال 614. كما هو موضح في

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تطور مرض ARDS ليصبح اضطرابا رئويا يهدد الحياة، يفرض عبئا كبيرا على الرعاية الصحية العالمية، حيث تتراوح معدلات الإصابة السنوية بين 1.5 إلى 79 حالة لكل 100,000 فرد، ومعدلات وفيات تتراوح بين 34.9٪ و46.1٪ عبر مستويات شدة متفاوتة.37. على الرغم من التقدم في استراتيجيات التهوية الميكانيكية، بما في ذلك التهوية الواقية للرئة والوضع المستلق، تظل النتائج السريرية غير مثالية بسبب تباين العمليات الفسيولوجية المرضية والخيارات العلاجية المحدودة38. تظهر ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن اعتبارها تضارب محتمل في المصالح. لم تستخدم تقنيات الذكاء الاصطناعي التوليدي والمدعومة بالذكاء الاصطناعي في إعداد هذا العمل.

شكر وتقدير

وقد دعمت هذه الدراسة المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة: 82570078).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الأجسام المضادة متعددة النسيات أرجيناز-1مجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكية16001-1-AP
أوتودوكمعهد سكريبس للأبحاثNAhttp://autodock.scripps.edu/
قاعدة بيانات باتمان-TCM  جامعة بكين للطب الصينيNAhttp://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/
مجموعة قياس كمية بروتين BCAسيرفيسبيوG2026
المعلوماتية الحيويةالمعلوماتية الحيويةNAhttps://www.bioinformatics.com.cn/
نظام تصوير الإضاءة الكيميائية BIO-RADثيرمو فيشر العلميhttps://www.bio-rad.com/en-in/category/chemidoc-imaging-systems?ID=NINJ0Z15
فئران C57BL/6Jمختبر هانغتشو زييوان لتقنية الحيوانات المحدودة
الأجسام المضادة متعددة النسيلات c-MYCمجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكية10828-1-AP
سيتوسكيبسيتوسكيبالإصدار 3.10.3https://cytoscape.org/
DCQDقسم الطب الصيني التقليدي في مستشفى بحيرة دوشو في سوتشو
Discovery Studio Visualizer الاكتشافالإصدار 4.5
GraphPad Prism دوتماتكسversion10.1.2https://www.graphpad.com/
الأجسام المضادة متعددة النسيلات GAPDHمجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكية10494-1-AP
مجموعة تحضير الجلسيرفيسبيوG2003
GeneCards  قاعدة البياناتمركز الجينوم البشري كراونNAhttps://previous.genecards.org/
قاعدة بيانات GEOالمركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (NCBI)GSE32707 (منصة GPL570، عدد = 45)
IgG مضاد للأرانب من Affinipure الماعز المكون ب HRPمجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكيةSA00001-2
الأجسام المضادة متعددة النسيلات HSP90مجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكية13171-1-AP
الدهون البوليسكاريدية (LPS)سولاربيولوجياL8880
قاعدة بيانات ميتسكيبالمعاهد الوطنية للصحةNAhttps://metascape.org/gp/index
قارئ الميكروبليتBioTeKhttps://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/microplate-readers?srs
ltid=AfmBOoqJhJhNJW6vNU
fnskFb9jjcTgXww1A1km-JVP
P1SScq1Mx78HBi
MMP-9 (الطرف N) الأجسام المضادة متعددة النسيلاتمجموعة بروتين تك إنك، الولايات المتحدة الأمريكية10375-2-AP
طقم ELISA IL-18 من ماوسسيرفيسبيوGEH0010
مجموعة ELISA IL-6 من ماوسسيرفيسبيوGEM0001
مجموعة ELISA من نوع فأر TNF-ألفاسيرفيسبيوGEH0004
قاعدة بيانات OMIMجامعة جونز هوبكنزNAhttps://www.omim.org/
أومني-إي سي إل آند تريد؛ مجموعة كشف الإضاءة الكيميائية فائقة الحساسيةإبيزيم بيوتيكSQ201
قاعدة بيانات PDBRCSBNAhttp://www.rcsb.org/
حاجز سريع خال من البروتينإبيزيم بيوتيكG2052
قاعدة بيانات PubChemالمركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (NCBI)https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
غشاء PVDFميركNA
باي مولشرودنجرالإصدار 3.10.3
قاعدة بيانات السلاسل النصيةالتحالف العالمي للبيانات الحيوية وإيكسيرNAhttps://cn.string-db.org/
قاعدة بيانات توقعات الأهداف السويسريةالمعهد السويسري للمعلوماتية الحيويةNAhttp://www.swisstargetprediction.cn/
قاعدة بيانات أنظمة الأدوية التقليدية للطب الصيني (TCMSP)جامعة نورث وسترن بوليتكنيكالإصدار 2.3https://www.tcmsp-e.com/

المراجع

  1. ARDS Definition task force. Acute respiratory distress syndrome: the Berlin definition. JAMA. 307 (23), 2526-2533 (2012).
  2. Ashbaugh, D. G., Bigelow, D. B., Petty, T. L., Levine, B. E. Acute respiratory distress in adults. Lancet. 2 (7511), 319-323 (1967).
  3. Matthay, M. A., et al. A new global definition of acute respiratory distress syndrome. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 209 (1), 37-47 (2024).
  4. Jia, F., et al. A prediction model for 30-day mortality in patients with ARDS admitted to the intensive care unit. Eur J Med Res. 30 (1), 559(2025).
  5. Bos, L. D. J., Ware, L. B. Acute respiratory distress syndrome: causes, pathophysiology, and phenotypes. Lancet. 400 (10358), 1145-1156 (2022).
  6. Lippi, G., Mattiuzzi, C., Favaloro, E. J. Prone position and the risk of venous thrombosis in COVID-19 patients with respiratory failure. Semin Thromb Hemost. 50 (7), 1019-1021 (2024).
  7. Ball, L., et al. Understanding the pathophysiology of typical acute respiratory distress syndrome and severe COVID-19. Expert Rev Respir Med. 16 (4), 437-446 (2022).
  8. Battaglini, D., Iavarone, I. G., Rocco, P. R. M. An update on the pharmacological management of acute respiratory distress syndrome. Expert Opin Pharmacother. 25 (9), 1229-1247 (2024).
  9. Matera, M. G., Rogliani, P., Bianco, A., Cazzola, M. Pharmacological management of adult patients with acute respiratory distress syndrome. Expert Opin Pharmacother. 21 (17), 2169-2183 (2020).
  10. Rahman, M. M., et al. Natural therapeutics and nutraceuticals for lung diseases: Traditional significance, phytochemistry, and pharmacology. Biomed Pharmacother. 150, 113041(2022).
  11. Chen, Z., Ye, S. Y. Research progress on antiviral constituents in traditional Chinese medicines and their mechanisms of action. Pharm Biol. 60 (1), 1063-1076 (2022).
  12. Liu, Y., et al. Pharmacological mechanisms of traditional Chinese medicine against acute lung injury: From active ingredients to herbal formulae. Phytomedicine. 135, 155562(2024).
  13. Li, J., Shen, M., Yin, Z. Exploring the mechanism of action of xuebijing injection in treating acute respiratory distress syndrome based on network pharmacology and animal experiments. J Inflamm Res. 18, 6037-6047 (2025).
  14. Zhang, Y., Wang, J., Liu, Y. M., Yang, H., Wu, G. J., He, X. H. Analysis of the efficacy and mechanism of action of xuebijing injection on ARDS using meta-analysis and network pharmacology. BioMed Res Int. 2021, 8824059(2021).
  15. Mehta, P., et al. COVID-19: consider cytokine storm syndromes and immunosuppression. Lancet. 395 (10229), 1033-1034 (2020).
  16. Cavalcante-Silva, L. H. A., et al. Neutrophils and COVID-19: The road so far. Int Immunopharmacol. 90, 107233(2021).
  17. Zhang, Y., et al. Electroacupuncture alleviates LPS-induced ARDS through α7 nicotinic acetylcholine receptor-mediated inhibition of ferroptosis. Front Immunol. 13, 832432(2022).
  18. Zhang, H., et al. Pharmacodynamic advantages and characteristics of traditional Chinese medicine in prevention and treatment of ischemic stroke. Chin Herb Med. 15 (4), 496-508 (2023).
  19. Liu, Z., et al. Dachengqi Decoction alleviates intestinal inflammation in ovalbumin-induced asthma by reducing group 2 innate lymphoid cells in a microbiota-dependent manner. J Tradit Complement Med. 13 (2), 183-192 (2023).
  20. Shuhan, W., et al. Dachengqi decoction ameliorated liver injury in liver fibrosis mice by maintaining gut vascular barrier integrity. Phytomedicine. 136, 156272(2025).
  21. Yin, F. T., et al. Prediction of the mechanism of Dachengqi Decoction treating colorectal cancer based on the analysis method of " into serum components -action target-key pathway.". J Ethnopharmacol. 293, 115286(2022).
  22. Chen, Z., et al. Dachengqi Decoction attenuates inflammatory response via inhibiting HMGB1 mediated NF-κB and P38 MAPK signaling pathways in severe acute pancreatitis. Cell Physiol Biochem. 37 (4), 1379-1389 (2015).
  23. Zhu, Q., et al. Large Chengqi Decoction improves sepsis-related intestinal damage by inhibiting inflammatory response through the HMGB1-TLR4 signaling pathway. J Inflamm Res. 18, 5415-5425 (2025).
  24. Vajdi, M., Karimi, A., Karimi, M., Abbasalizad Farhangi, M., Askari, G. Effects of luteolin on sepsis: A comprehensive systematic review. Phytomedicine. 113, 154734(2023).
  25. Gao, L. L., Wang, Z. H., Mu, Y. H., Liu, Z. L., Pang, L. Emodin promotes autophagy and prevents apoptosis in sepsis-associated encephalopathy through activating BDNF/TrkB signaling. Pathobiology. 89 (3), 135-145 (2022).
  26. Fu, W., et al. Emodin inhibits NLRP3 inflammasome activation and protects against sepsis via promoting FUNDC1-mediated mitophagy. Int J Biol Sci. 21 (8), 3631-3648 (2025).
  27. Chunlian, W., Heyong, W., Jia, X., Jie, H., Xi, C., Gentao, L. Magnolol inhibits tumor necrosis factor-α-induced ICAM-1 expression via suppressing NF-κB and MAPK signaling pathways in human lung epithelial cells. Inflammation. 37 (6), 1957-1967 (2014).
  28. Zhang, M., et al. Dachengqi decoction dispensing granule ameliorates LPS-induced acute lung injury by inhibiting PANoptosis in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 336, 118699(2025).
  29. Li, J., et al. Macrophagedriven pathogenesis in acute lung injury/acute respiratory disease syndrome: Harnessing natural products for therapeutic interventions (Review). Mol Med Rep. 31 (1), 16(2025).
  30. He, Y. Q., et al. Natural product derived phytochemicals in managing acute lung injury by multiple mechanisms. Pharmacol Res. 163, 105224(2021).
  31. He, T., et al. Integrating network pharmacology and non-targeted metabolomics to explore the common mechanism of Coptis Categorized Formula improving T2DM zebrafish. J Ethnopharmacol. 284, 114784(2022).
  32. Liu, D., Zhang, Y., Bai, B., Xiong, X., Zhou, Q., Shi, R. Integration of single-cell RNA sequencing and network pharmacology to elucidate the effect of Yantiao Formula on alleviating ALI by regulating the polarization of alveolar macrophages. J Ethnopharmacol. 343, 119436(2025).
  33. Mao, X., et al. Toosendanin alleviates acute lung injury by reducing pulmonary vascular barrier dysfunction mediated by endoplasmic reticulum stress through mTOR. Phytomedicine. 136, 156277(2025).
  34. Li, X., Liu, Z., Liao, J., Chen, Q., Lu, X., Fan, X. Network pharmacology approaches for research of Traditional Chinese Medicines. Chin J Nat Med. 21 (5), 323-332 (2023).
  35. Zhao, L., et al. Network pharmacology, a promising approach to reveal the pharmacology mechanism of Chinese medicine formula. J Ethnopharmacol. 309, 116306(2023).
  36. Hsin, K. Y., Ghosh, S., Kitano, H. Combining machine learning systems and multiple docking simulation packages to improve docking prediction reliability for network pharmacology. PloS One. 8 (12), e83922(2013).
  37. Mannes, P. Z., et al. Molecular imaging of chemokine-like receptor 1 (CMKLR1) in experimental acute lung injury. Proc Nat Acad Sci U. 120 (3), e2216458120(2023).
  38. Lu, Y., Li, W., Qi, S., Cheng, K., Wu, H. Mapping knowledge structure and emerging trends of extracorporeal membrane oxygenation for acute respiratory distress syndrome: a bibliometric and visualized study. Front Med. 11, 1365864(2024).
  39. Sherman, E., Han, M. H. Acute and chronic management of neuromyelitis optica spectrum disorder. Curr Treat Options Neurol. 17 (11), 48(2015).
  40. Piccinini, A. M., Midwood, K. S. DAMPening inflammation by modulating TLR signalling. Mediators Inflamm. 2010, 672395(2010).
  41. Al-Husinat, L., et al. A narrative review on the future of ARDS: evolving definitions, pathophysiology, and tailored management. Crit Care. 29 (1), 88(2025).
  42. Ma, W., et al. Advances in acute respiratory distress syndrome: focusing on heterogeneity, pathophysiology, and therapeutic strategies. Signal Transduct Target Ther. 10 (1), 75(2025).
  43. Cao, Z., et al. Targeting of the pulmonary capillary vascular niche promotes lung alveolar repair and ameliorates fibrosis. Nat Med. 22 (2), 154-162 (2016).
  44. Fang, C., Wang, Y., Pan, Z. Formation of self-assembly aggregates in traditional Chinese medicine decoctions and their application in cancer treatments. RSC advances. 15 (7), 5476-5506 (2025).
  45. Shuhan, W., et al. Dachengqi decoction ameliorated liver injury in liver fibrosis mice by maintaining gut vascular barrier integrity. Phytomedicine. 136, 156272(2025).
  46. Pan, G., Wu, Y., Liu, Y., Zhou, F., Li, S., Yang, S. Dachengqi decoction ameliorates sepsis-induced liver injury by inhibiting the TGF-β1/Smad3 pathways. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 14 (3), 256-265 (2024).
  47. Guo, W., et al. Dachengqi decoction for the treatment of acute pancreatitis: a comprehensive analysis based on metabolites, pharmacokinetics, and metabolites efficacy mechanisms. Front Pharmacol. 16, 1549909(2025).
  48. Yin, F. T., et al. Prediction of the mechanism of Dachengqi Decoction treating colorectal cancer based on the analysis method of " into serum components -action target-key pathway.". J Ethnopharmacol. 293, 115286(2022).
  49. Hu, X., Liu, S., Zhu, J., Ni, H. Dachengqi decoction alleviates acute lung injury and inhibits inflammatory cytokines production through TLR4/NF-κB signaling pathway in vivo and in vitro. J Cell Biochem. 120 (6), 8956-8964 (2019).
  50. Yang, J. Y., et al. Material basis and molecular mechanism of Dachengqi Decoction in treatment of acute pancreatitis based on network pharmacology. Chin J Chin Materia Medica. 45 (6), 1423-1432 (2020).
  51. Lu, X., et al. Integrating network pharmacology, transcriptome and artificial intelligence for investigating into the effect and mechanism of ning fei ping xue decoction against the acute respiratory distress syndrome. Front Pharmacol. 12, 731377(2021).
  52. Liang, X., et al. Study on intervention mechanism of yiqi huayu jiedu decoction on ARDS based on network pharmacology. Evid-Based Complement Alternat Med. 2020, 4782470(2020).
  53. Yang, B., Liu, X., Liang, Y., Li, Y. Chemical inhibition of HSP90 inhibits TNF-α mediated proliferation and induces apoptosis in human rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes. J Cell Biochem. 120 (2), 2547-2553 (2019).
  54. Zhang, X., et al. Ponicidin-induced conformational changes of HSP90 regulates the MAPK pathway to relieve ulcerative colitis. J Ethnopharmacol. 321, 117483(2024).
  55. Albakova, Z. HSP90 multi-functionality in cancer. Front Immunol. 15, 1436973(2024).
  56. Chien, L. H., Deng, J. S., Jiang, W. P., Chou, Y. N., Lin, J. G., Huang, G. J. Evaluation of lung protection of Sanghuangporus sanghuang through TLR4/NF-κB/MAPK, keap1/Nrf2/HO-1, CaMKK/AMPK/Sirt1, and TGF-β/SMAD3 signaling pathways mediating apoptosis. Biomed Pharmacother. 165, 115080(2023).
  57. Warburton, D., Shi, W., Xu, B. TGF-β-Smad3 signaling in emphysema and pulmonary fibrosis: an epigenetic aberration of normal development. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 304 (2), L83-L85 (2013).
  58. Yadav, P., et al. Macrophage-fibroblast crosstalk drives Arg1-dependent lung fibrosis via ornithine loading. bioRxiv: The Preprint Server for Biology. , (2024).
  59. Lamoke, F., et al. Amyloid β peptide-induced inhibition of endothelial nitric oxide production involves oxidative stress-mediated constitutive eNOS/HSP90 interaction and disruption of agonist-mediated Akt activation. J Neuroinflamm. 12, 84(2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

شبكة تفاعل البروتيناتإشارات الكيموكينالمستقبل الشبيه بـ NODالمصيدة الخارجية للعدلاتالالتحام الجزيئيالاستجابة الالتهابية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.