مقالة منهجية

الإباضة الضخمة في الثدييات: تقنيات لتحليل الإباضة التلقائية الطبيعية وتعدد الإباضات المستحث في لاغوستوموس ماكسيموس

DOI:

10.3791/69653

⸱

فبراير 6, 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Estudios Biomédicos Básicos, Aplicados y Desarrollo (CEBBAD), Universidad Maimónides, 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول طرق تحليل الإباضة الطبيعية والمحفزة في لاغوستوموس ماكسيموس، بما في ذلك تعافي البويضات بعد الإباضة التلقائية أو الهرمونية أو المحفزة بالبلازما المنوية. يوفر إطارا شاملا لدراسة استجابة المبيض وفسيولوجيا التكاثر في نموذج ثديي متعدد الإباضات بشكل كبير.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعتبر فيزكاشا سهول أمريكا الجنوبية، Lagostomus maximus، النوع الثديي الذي يحمل أعلى معدل إباضة، حيث يمكن أن يصل إلى 300 بوضة. يمكن فحص هذه الظاهرة المذهلة في تعدد الإباضة من خلال عدة مناهج منهجية تعكس فسيولوجيتها التناسلية المميزة. يتم تقييم الإباضة الطبيعية من خلال إفراز البويضات خلال موسم التكاثر، مما يوفر رؤى حول آليات الإباضة التلقائية للنوع، حيث يتم استعادة البويضات عن طريق غسل قناة البيض وقرون الرحم. بالإضافة إلى ذلك، يسمح التحفيز التجريبي للإباضة باستخدام هرمونات خارجية، مثل الغدد التناسلية، بتقييم محكم لاستجابة المبيض ويوفر نموذجا قيما لفهم تنظيم الغدد الصماء في القوارض الهيستريكوجناث. النهج الثالث يتضمن استخدام البلازما المنوية الذاتية كمحفز فسيولوجي للإباضة، مما يبرز تعايش الآليات المستحثة والتلقائية في هذا النوع. معا، لا توضح هذه التقنيات فقط ديناميكيات تجنيد الجريبات وإفراز البويضات، بل ترسخ أيضا L . maximus كنموذج مقارنة لبيولوجيا التكاثر، مع آثار ترجمية محتملة لفهم التحكم في الإباضة لدى الثدييات.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فيزيكاشا سهول أمريكا الجنوبية (Lagostomus maximus) هو قارض هيستريكوجناث يتميز بفسيولوجيته التناسلية الاستثنائية، ويتميز بمعدل إباضة استثنائي يمكن أن يتجاوز 300 بويضة في الدورة 1,2. وقد وضعت هذه الميزة المميزة L. maximus نموذجا طبيعيا لدراسة وظيفة المبيض والتحكم في الإباضة في الثدييات 3,4,5,6,7,8,9,10,11.

على عكس المبيضات العفوية النموذجية، يظهر L. maximus آليات إباضة تلقائية ومحفزة 2. هذه الثنائية، إلى جانب النمو الجريبي الضخم والإباضة غير المتزامنة، تتحدى الأساليب التقليدية القائمة فقط على نقاط النهاية الصماء أو النسيجة 4,12,13,14. وبالتالي، فإن استخدام تقنيات مباشرة وكمية أمر ضروري لتحديد توقيت وكمية إطلاق البويضات بدقة.

تم الحصول على الإناث البالغة من مجموعة طبيعية مقيمة في مركز صماء الحيوانات (ECAS)، منتزه بيريرا إيراولا، بيرازاتيغي، محافظة بوينس آيرس، الأرجنتين (34°49′57" جنوبا، 58°06′12" غربا). نعترف بأن الحقوق السيادية على الموارد الطبيعية هي ملكية حصرية لمقاطعة بوينس آيرس. تم تفويض عدد الحيوانات التي تم اصطيادها من قبل وزارة الزراعة في مقاطعة بوينس آيرس. تم اصطياد الإناث باستخدام مصائد حية موضوعة عند مداخل الجحور في أوقات مختلفة على مدار السنة.

تم اختيار فترات الالتقاط وفقا لدورة التكاثر الطبيعية للنوع التي وضعها لانوس & كريسبو15، وتم تحسينها بناء على خبرتنا في العمل الميداني 7,8,10,14. يقدم هذا النوع موسم تكاثر رئيسي يمتد من أواخر الصيف (مارس) حتى بداية الربيع في أواخر سبتمبر16، 17، 18، وفترة تكاثر ثانوية تحدث في أكتوبر، خاصة عند الإناث اللواتي فقدن صغارها15. وبناء عليه، تم تحديد مجموعات العمل التالية: أ) المجموعة الأولى (N= 27): أواخر فبراير - أوائل أبريل (غير حامل، بداية موسم التكاثر الرئيسي); ب) المجموعة الثانية (N= 26): منتصف سبتمبر إلى أواخر أكتوبر (الشبق غير الحمل، بعد الرضاعة)؛ المجموعة الثالثة (N= 35): ديسمبر-يناير (الإباضة غير الحاملة، ناتجة عن الهرمون); المجموعة الرابعة (N= 7): ديسمبر-يناير (إباضة غير حامل، ناتجة عن بلازما منوية).

تقدم هذه الدراسة وتؤكد عدة طرق منهجية لتحليل الإباضة في L. maximus: (1) تقييم الإباضة الطبيعية من خلال استعادة البويضات مباشرة؛ (2) تحفيز الإباضة باستخدام الغنادوتروبينات الخارجية؛ و(3) تحفيز الإباضة باستخدام بلازما السائل المنوي الذاتي. كل تقنية توفر رؤى مكملة حول ديناميكيات الجريبات، ونضج البويضات، والآليات التنظيمية التي تحكم الإباضة.

يمكن تدفق قنوات البيض وقرون الرحم من استعادة مباشرة للبويضات وقياس الإباضة بدقة، مما يسمح بارتباط مع تطور الجريبات وشكل البويضات 19,20,21. التحفيز الهرموني باستخدام الغونادوتروبينات الخارجية، المعدلة من بروتوكولات مستخدمة في القوارض المختبرية22، يسمح بتقييم محكم لاستجابة المبيض وتوقيت إطلاق البويضات. وفي الوقت نفسه، فإن استخدام البلازما المنوية الذاتية كمحفز فسيولوجي للإباضة - كما وصف سابقا في المبيضين المحفزين مثل الأرانب والجمال 23,24,25 - يقدم وسيلة مبتكرة لاستكشاف العوامل الصماء والباراكرينية المشاركة في الإباضة.

من خلال دمج هذه المنهجيات التكميلية، يوفر العمل الحالي إطارا قابلا للتكرار لدراسة آليات الإباضة في L. maximus. يسمح الجمع بين النماذج الطبيعية والمحفزة بالتمييز بين التجنيد العفوي للجريبات، وكفاءة الإباضة، والاستجابات التي تعبر عنها البلازما المنوي. علاوة على ذلك، تكشف هذه الأساليب عن ظواهر مثل تنشيط الخلايا البويضة التفاميلية التلقائية وتعايش البويضات "المعيبة" و"البويضية"، مما يساهم في فهم الانتقاء الجيري وكفاءة البويضات2.

بعيدا عن تبعاته الخاصة بالنوع، يقدم نموذج الفيزكاشا أهمية أوسع لعلم الأحياء التناسلي المقارن. استراتيجيتها المختلطة للإباضة تربط خصائص المبيض المحفز والتلقائي، مما يوفر أوجه تشابه قيمة مع عمليات التكاثر في الثدييات الأخرى، بما في ذلك الأنواع المنزلية والبشر 7,14,26,27.

البروتوكولات المنهجية المفصلة هنا مصممة لضمان قابلية التكرار وتسهيل تكيفها مع سياقات تجريبية متنوعة تشمل ديناميكيات الجريبات، وتنظيم الإباضة، والتلاعب الهرموني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة البروتوكولات التجريبية الموضحة هنا والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لاستخدام ورعاية الحيوانات التجريبية (CICUAE، جامعة مايمونيديس، رقم البروتوكول #6184). تم تنفيذ الفخاخ والتعامل مع القتل الرحيم بواسطة موظفين فنيين مدربين وفقا لجميع اللوائح المحلية والولائية والفيدرالية التي تحكم رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. اتبع تربية الحيوانات إرشادات المعاهد الوطنية للصحة (NIH) لرعاية واستخدام الحيوانات المخبرية28 وإرشادات الجمعية الأمريكية لعلماء الثدييات (ASM) لاستخدام الثدييات البرية في البحث29. جميع التجارب امتثلت لإرشادات ARRIVE 2.030. تم بذل كل جهد لتقليل عدد الحيوانات المستخدمة. لا يعتبر فيزكاتشا سهول أمريكا الجنوبية (Lagostomus maximus) نوعا مهددا بالانقراض31.

1. التحفيز الهرموني للإباضة

ملاحظة: يعرض هذا القسم تحفيز الإباضة الهرموني لدى الإناث غير الحوامل من فيزكاشا المألوثة. تمت مناقشة ثلاثة خيارات بروتوكولات مختلفة.

  1. البروتوكول أ:
    1. أعط 200 وحدة دولية من الغونادوتروبين المشيمي للخيول (eCG) داخل العضلات عند 0 ساعة و24 ساعة، تليها 500 وحدة دولية من الغونادوتروبين المشيمي البشري (hCG) عند 48 ساعة.
    2. تريح الإناث حتى القتل الرحيم.
    3. قتل الإناث بعد 60-132 ساعة بعد إعطاء hCG (انظر القسم 3).
  2. البروتوكول ب:
    1. أعط 200 وحدة صناعية من eCG داخل العضلات عند 0 ساعة و24 ساعة، تليها 1000 وحدة دولية من hCG عند 72 ساعة.
    2. تريح الإناث حتى القتل الرحيم.
    3. قتل الإناث بعد 60-132 ساعة بعد إعطاء hCG (انظر القسم 3).
  3. بروتوكول C:
    1. أعط 250 وحدة دولية من eCG داخل العضلات عند 0 ساعة، 24 ساعة، و48 ساعة، تليها 2 ملغ من هرمون لوتيني الخنزير (pLH) عند 72 ساعة.
    2. تريح الإناث حتى القتل الرحيم.
    3. قتل الإناث بعد 60-132 ساعة بعد إعطاء pLH (انظر القسم 3 والجدول 1).
      ملاحظة: تم إعدام الحيوانات في كل مجموعة في نقاط زمنية مختلفة (تتراوح بين 60 ساعة إلى 132 ساعة بعد إعطاء الهرمون). كان هذا التوزيع الزمني ضروريا لتأكيد الطبيعة الممتدة لفترة الإباضة في هذا النوع. تحديدا، في التجارب التي تهدف إلى جمع حصري للبويضات الناضجة، تم إجراء القتل الرحيم بشكل منتظم بعد 120 ساعة من hCG.

2. تحفيز الإباضة بواسطة البلازما المنوية

ملاحظة: اختبر قدرة البلازما المنوية على تحفيز الإباضة عن طريق الإعطاء العضلي لدى الإناث المجهزات هرمونيا.

  1. جمع السائل المنوي وتحضيره
    1. جمع السائل المنوي من الذكور النشطين تناسليا عن طريق القذف الكهربائي، كما وصفه جياكينو32.
    2. قام بالسائل المنوي في الطرد المركزي عند 200 × جرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة لإزالة الخلايا المنوية والحطام الخلوي.
    3. أضف المواد الفائقة (البلازما المنية) بالبنسلين والستربتوميسين وتخزينها عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  2. تحفيز الإباضة لدى الإناث غير الحوامل بواسطة بلازما السائل المنوي
    1. أعط 200 وحدة إندونية من eCG داخل العضلات بمعدل 0 ساعة و24 ساعة لكل أنثى.
    2. حقن البلازما المنوية داخل العضلات بعد 48 ساعة من الجرعة النهائية من eCG.
    3. تريح الإناث حتى القتل الرحيم.
    4. قتل الحيوانات بعد 72 ساعة من حقن البلازما المنوية (انظر القسم 3).
      ملاحظة: أضف الإناث الضابطات اللواتي حقن بمحلول ملحي بدلا من البلازما المنوية.

3. التخدير، القتل الرحيم، وجمع الجهاز التناسلي

ملاحظة: استخدم طرق التخدير والقتل الرحيم الإنساني للحصول على مسالك تناسلية سليمة لتحليل البويضات والنسيج.

  1. تحفز القتل الرحيم عبر حقنة عضلية واحدة محسوبة بجرعة 13.5 ملغ/كجم من كلوهيدرات الكيتامين و0.6 ملغ/كجم كلوهيدرات زيلازين وفقا لتوصيات الشركة المصنعة والبروتوكولات المؤسسية المعتمدة.
  2. تأكيد التخدير العميق بعدم الاستجابة للألم (ردود فعل الدواسات).
  3. ضع الحيوان في وضعية الاستلقاء على الظهر وقم بتعقيم البطن.
  4. افتح تجويف البطن جراحيا لكشف جميع أعضاء البطن بالكامل.
  5. إجراء فحص عام لتحديد الحالة العامة للحيوان وتأكيد الإباضة الطبيعية أو الهرمونية بسبب وجود وصمات الإباضة.
  6. احصل على عينة دم عن طريق ثقب مباشر للوريد الأجوف العلوي للفحص المصلي.
  7. قم بتنفيذ القتل الرحيم للحيوان بإعطاء 0.5 مل/كجم من بنتوباربيتال الصوديوم داخل القلب.
  8. قم بتشريح وإزالة المبايض وقنوات البيض وقرون الرحم بعناية، مع الحرص على عدم إتلاف هياكلها.
  9. احتفظ بالأنسجة في محلول ملحي مخزن بالفوسفات بارد جدا (PBS) حتى المعالجة (≤15 دقيقة).

4. استعادة البويضات

ملاحظة: استرجع البويضات من قنوات البيض وقرون الرحم عن طريق الغسل اللطيف لضمان تجمع الأمشاج المنبعثة بالكامل مع تقليل تلف الأنسجة.

  1. جهز جهاز الغسل عن طريق تثبيت إبرة 26-G غير مبتدة بحقنة بسعة 1 مل مملوءة ب 0.9٪ NaCl مع 4 ملغ/ملتر BSA، و100 ميكروغرام/مل بنسلين G، و100 IU/mL ستريبتومايسين.
  2. أدخل الإبرة بلطف في الجزء الداخلي لكل قناة بويض وحقن محلول الغسل ببطء.
  3. اجمع الغازات من قناة البيض البعيدة وقرن الرحم في أطباق بترى معقمة.
  4. كرر عملية الغسل حتى يبدو السائل المستخرج صافيا وخاليا من البويضات أو الحطام الخلوي المرئي.
  5. نقل البويضات إلى قطرات 100 ميكرولتر من وسط M2 تحتوي على 4 ملغ/مل BSA ومضادات حيوية تحت زيت معدني.
  6. تأكيد نجاح التعافي من خلال فحص القطرات تحت المجهر المجسم؛ توقع ملاحظة بويضات حرة تفتقر إلى خلايا ركامية متناثرة داخل السائل.
  7. استمر في الغسل حتى يبدو السائل صافيا ولا تلاحظ أي بويض إضافي تحت المجهر المجسم (عادة 3-5 دفعات في كل قناة بويض).
    ملاحظة: يجب أن تبدو البويضات المستخرجة كروية وشفافة تحت التكبير المنخفض.
  8. تصنيف البويضات وفقا للسلامة الشكلية كما هو موضح في القسم 6.

5. التقييم الشكل للبويضات

ملاحظة: قيم جودة الخلايا المبيضة المستعادة بناء على المظهر السيتوبلازمي، وتجانس المنطقة البيضاء الصغيرة، ومرحلة النضج النووي.

  1. حدد البويضات كأنها طبيعية إذا أظهرت شكلا كرويا، أو منطقة بيلوسيدا موحدة، أو سيتوبلازم شفاف متجانس، أو حويصلية جرثومية مرئية أو جسم قطبي أول.
  2. حدد الخلايا البويضة كخلايا غير طبيعية إذا بدا السيتوبلازم داكنا أو حبيبيا أو مجزأا، أو إذا كان البويضة غير منتظمة.
  3. سجل مرحلة النضج النووي كحويصلة جرثومية (GV)، أو انهيار الحويصلات الجرثومية (GVBD)، أو الطور الميتافوري II (MII).

6. تقييم نضج نواة البويضات وسلامة المغزل الانقسام

ملاحظة: تقييم النضج النووي وشكل المغزل من خلال التلوين المناعي الفلوري لصبغ α-التيوبولين والكروماتين المضاد.

  1. ثبت البويضات في بارافورمالديهايد بنسبة 2٪ (PFA) لمدة 20 دقيقة.
  2. نفخ في ترايتون X-100 بنسبة 0.2٪ في PBS لمدة 40 دقيقة.
  3. بعد الإصلاح ب PFA بنسبة 2٪ لمدة 20 دقيقة واغسله ثلاث مرات ب PBS (كل مرة 30 دقيقة).
  4. استخدم حجبا ب 2٪ سيروم ماعز، 2٪ BSA، 2٪ مسحوق الحليب، 0.1 مليون جليسين، و0.01٪ ترايتون X-100 في PBS لمدة ≥ ساعة.
  5. حضن البويضات طوال الليل عند 4 درجات مئوية باستخدام الجسم المضاد المضاد للفئران α التيبولين (1:200).
  6. اغسله في PBS لمدة 30 دقيقة وحضن لمدة ساعة واحدة في الظلام باستخدام IgG مضاد للفأر الفلوريسين إيزوثيوسيانات (FITC) (1/1000).
  7. صبغ العكاس ب 10 ميكروغرام/مل Hoechst 33324 لمدة 10 دقائق واغسل في PBS يحتوي على 2٪ BSA.
  8. قم بتركيب البويضات في وسط مضاد للتلاشي وصور باستخدام مجهر كونفوكلي.
  9. التقاط ومعالجة الصور باستخدام برنامج EZ-C1 (إصدار EZ-C1 3.90); قم بضبط التباين والسطوع في برامج معالجة الصور حسب الحاجة.
    ملاحظة: يشير التلوين الناجح إلى نمط فلوري أخضر واضح للمغزل الانقساس (FITC) والتلوين النووي الأزرق المضاد باستخدام Hoechst 33324.

7. التحليل الإحصائي

ملاحظة: تحليل البيانات الكمية لمقارنة استجابات الإباضة وجودة البويضات بين مجموعات التجريب.

  1. عبر عن البيانات كمتوسط ± SD.
  2. استخدم اختبار t الخاص بطالب للمقارنات بين مجموعتين.
  3. طبق اختبار ANOVA أحادي الاتجاه يليه اختبار بونفيروني بعد الاختبار للمقارنات المتعددة.
  4. اعتبر p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإباضة الطبيعية

لوحظ اثنتا عشرة من أصل 27 أنثى (المجموعة الأولى) تم اصطيادها من أواخر فبراير إلى منتصف أبريل، متزامنة مع موسم التزاوج الأولي، على أنها كانت في حالة إباضة، بينما خلال موسم التزاوج الثانوي (سبتمبر/أكتوبر) (المجموعة الثانية)، أظهرت 10 من أصل 26 أنثى تم اصطيادها إباضة. لوحظ معدل نجاح مماثل بلغ حوالي 40٪ من الإناث المبيضة خلال فترتي الالتقاط. لم يلاحظ أي تورم في منطقة الامبولاري من قناة البيض في أي حالة، وتم استخراج بويضات من الإناث بغض النظر عن وجود وصمات الإباضة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوفر البروتوكول المعروض هنا لدراسة الإباضة في السهول إطارا قابلا للتكرار لتقييم الأحداث الإباضية الطبيعية والأحداث التجريبية على حد سواء. تكمن ميزة هذا البروتوكول الرئيسية في قدرته على قياس وتوصيف العدد الهائل من البويضات التي تطلقها السهول في البويضات، وهي ميزة لا مثيل لها في نماذج الثدييات الأخرى. على عكس الطرق غير المباشرة التي تعتمد على الملفات الهرمونية أو المقاطع النسيجة، يوفر تدفق قنوات البيض والرحم وصولا فوريا إلى بويضات سليمة، مما يتيح تحليلات كمية ونوعية على حد سواء. كما يحافظ ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح يمكن اعتباره يضر بحيادية البحث المبلغ عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعم هذا العمل المساعدات المالية الداخلية من جامعة مايمونيديس في الأرجنتين، ووكالة FONCYT-AMPCYT في الأرجنتين (PICT-2018-04619، منحت ل NPL). يعبر المؤلفون بشكل خاص عن امتنانهم لوزارة الزراعة التابعة لحكومة مقاطعة بوينس آيرس، الأرجنتين، على السماح بصيد الحيوانات؛ وإلى موظفي مؤسسة الحياة الحيوانية (ECAS، مقاطعة بوينس آيرس، الأرجنتين) تقديرا لمساعدتهم القيمة في صيد الحيوانات والتعامل معها؛ وللدكتور سيرجيو فيراريس والدكتور فرناندو لانجي من CCV-جامعة مايمونيديس لمساعدتهما خلال عمليات التخدير والجراحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أدوبي فوتوشوبشركة أدوبي سيستمز، الولايات المتحدة الأمريكيةلا يوجدمعالجة الصور
مصل البقر الألبومين (BSA)سيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةA9647يستخدم في وسط الغسل وعازل الحجب
الطرد المركزي (لمعالجة السائل المنوي)إبندورف، ألمانيا5417Rتحضير البلازما المنوية
المجهر الكونفوكال (C1 Eclipse E800)نيكون المحدودة، اليابانلا يوجدتصوير البويضات
القذف الكهربائيصمم في المختبر؛ تم تعديلها من الثدييات المنزلية لاستخدامها في قوارض الكافيومورفلا يوجدجمع السائل المنوي
القتل الرحيم (صوديوم بنتوباربيتال، الصوديوم ديفينيل هيدانتوين)بروير S.A.، الأرجنتينلا يوجدالقتل الرحيم
مضاد الفأر الماعز المتعامل مع FITC IgG (AP124F)كيميكون، الولايات المتحدة الأمريكيةAP124Fالأجسام المضادة الثانوية
مجموعة تلوين الهيماتوكسيلين-إيوزينسيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةمختلفعلم الأنسجة
هوشت 33324ثيرمو فيشر ساينتفيك، الولايات المتحدة الأمريكيةH3570التلوين النووي
كلوهيدرات الكيتامينهوليداي سكوت ش.م.، الأرجنتينلا يوجدالتخدير
غطاء التدفق الطبقيثيرمو ساينتيفيك، الولايات المتحدة الأمريكيةلا يوجدالتعامل المعقم
المجهر الضوئيأوليمبوس، اليابانBX51علم الأنسجة
لوتروبين-V (pLH)بيوينيش للرعاية الصحية للحيوانات، كندالا يوجدالتحفيز الهرموني
M2 متوسطسيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةM7167استعادة البويضات
زيت المعادنسيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةM8410ثقافة البويضات
نوفورمون 5000 (eCG)سينتكس ش.م.، الأرجنتينلا يوجدالتحفيز الهرموني
أوفوسين (hCG)سينتكس ش.م.، الأرجنتينلا يوجدالتحفيز الهرموني
بارافورمالديهايد (PFA، 2٪ و4٪)سيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكية158127التثبيت
البنسلين Gسيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةP3032المضادات الحيوية للوسائط
المجهر المجسملايكا مايكروسيستمز، ألمانياM80تحديد البويضات
الستربتوميسينجيبكو، ثيرمو فيشر ساينتيفيك، الولايات المتحدة الأمريكية11860038المضادات الحيوية للوسائط
حقنة ذات إبرة ذات طرف حاد (1 مل)بي دي بي ساينسز، الولايات المتحدة الأمريكية305219تفريغ قنوات البيض/الرحم
ترايتون X-100سيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكيةT8787النفاذية
وسيط تثبيت فيكتا شيلدمختبرات فيكتور، الولايات المتحدة الأمريكيةH-1000التركيب للفلورة
زيلازين كلورهيدراتمختبرات ريتشموند، الأرجنتينلا يوجدالتخدير
زيلينسيغما-ألدريتش، الولايات المتحدة الأمريكية534056إزالة الشمع لأقسام البارافين
الأجسام المضادة وحيدة النسيلة α-tubulin (مضاد للفأر α-tubulin، SC-5286 B7)سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية، الولايات المتحدة الأمريكيةSC-5286 B7لصبغ المناعة المغزلي الانقسام

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weir, B. J. The reproductive physiology of the plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 355-363 (1971).
  2. Leopardo, N. P., Inserra, P. I. F., Giacchino, M., Caram, D. A., Willis, M. A., Vitullo, A. D. Polyovulation in the South American plains vizcacha, revisited: coexistence of spontaneous and induced ovulation. J Exp Zool A Ecol Integr Physiol. 343 (6), 724-739 (2025).
  3. Caram, D. A., Inserra, P. I. F., Vitullo, A. D., Leopardo, N. P. Autophagy favors survival of corpora lutea during the long-lasting pregnancy of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia Caviomorpha). Sci Rep. 14 (1), 11220(2024).
  4. Cortasa, S. A., et al. Achieving full-term pregnancy in the vizcacha relies on a reboot of luteal steroidogenesis in mid-gestation (Lagostomus maximus, Rodentia). PLoS One. 17, e0271067(2022).
  5. Flamini, M. A., Barbeito, C. G., Gimeno, E. J., Portiansky, E. L. Histology, histochemistry and morphometry of the ovary of the adult plains viscacha (Lagostomus maximus) in different reproductive stages. Acta Zool (Stockh). 90, 390-400 (2009).
  6. Fraunhoffer, N. A., et al. Hormonal behavior correlates with follicular recruitment at mid-gestation in the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Gen Comp Endocrinol. 250, 162-174 (2017).
  7. Jensen, F., Willis, M. A., Albamonte, M. S., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. Naturally suppressed apoptosis prevents follicular atresia and oocyte reserve decline in the adult ovary of Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Reproduction. 132, 301-308 (2006).
  8. Jensen, F., Willis, M. A., Leopardo, N. P., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The ovary of the gestating South American plains vizcacha (Lagostomus maximus): suppressed apoptosis and corpora lutea persistence. Biol Reprod. 79, 240-246 (2008).
  9. Leopardo, N. P., Jensen, F., Willis, M. A., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The developing ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia): massive proliferation with no sign of apoptosis-mediated germ cell attrition. Reproduction. 141, 633-641 (2011).
  10. Leopardo, N. P., Vitullo, A. D. Early embryonic development and spatiotemporal localization of mammalian primordial germ cell-associated proteins in the basal rodent Lagostomus maximus. Sci Rep. 7 (1), 594(2017).
  11. Leopardo, N. P., Velazquez, M. E., Cortasa, S., González, C. R., Vitullo, A. D. A dual death/survival role of autophagy in the adult ovary of Lagostomus maximus (Mammalia-Rodentia). PLoS One. 15 (5), e0232819(2020).
  12. Weir, B. J. Reproductive Characteristics of Hystricogmorph Rodents. The Biology of Hystricomorph Rodents. , Symposia of the Zoological Society of London. London, UK. (1974).
  13. Dorfman, V. B., et al. Variation in progesterone receptors and GnRH expression in the hypothalamus of the pregnant South American plains vizcacha Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia). Biol Reprod. 89 (5), 115(2013).
  14. Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Willis, M. A., Freysselinard, A. L., Vitullo, A. D. Quantification of healthy and atretic germ cells and follicles in the developing and postnatal ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus: evidence of continuous rise of the germinal reserve. Reproduction. 147, 199-209 (2014).
  15. Llanos, A. C., Crespo, J. A. Ecología de la vizcacha (Lagostomus maximus maximus Blainv.) en el nordeste de la provincia de Entre Ríos. Rev Investig Agríc. 6, 289-378 (1952).
  16. Weir, B. J. The management and breeding of some more hystricomorph rodents. Lab Anim. 4 (1), 83-97 (1970).
  17. Branch, L. C., Villarreal, D., Fowler, G. S. Recruitment, dispersal, and group fusion in a declining population of the plains viscacha (Lagostomus maximus; Mammalia, Chinchillidae) in scrub habitat of central Argentina. J Mammal. 74 (1), 9-20 (1993).
  18. Spotorno, A. E., Patton, J. L. Superfamily Chinchilloidea Bennett 1833. Mammals of South America. , University of Chicago Press. Chicago, IL, USA. (2015).
  19. Baker, T. G. A quantitative and cytological study of germ cells in human ovaries. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 158 (972), 417-433 (1963).
  20. Forabosco, A., Sforza, C., De Pol, A., Vizzotto, L., Marzona, L., Ferrario, V. F. Morphometric study of the human neonatal ovary. Anat Rec. 231, 201-208 (1991).
  21. Hirshfield, A. N. Development of follicles in the mammalian ovary. Int Rev Cytol. 124, 43-101 (1991).
  22. Suzuki, O. Sequence comparison of gonadotropin subunits in laboratory animals for improvement of superovulation techniques. Kansai J Lab Anim. 27, 72-75 (2006).
  23. Chen, B. X., Yuen, Z. X., Pan, G. W. Semen-induced ovulation in the Bactrian camel (Camelus bactrianus). J Reprod Fertil. 73, 335-339 (1985).
  24. El Allali, K., El Bousmaki, N., Ainani, H., Simonneaux, V. Effect of the camelid's seminal plasma ovulation-inducing factor/β-NGF: a Kisspeptin target hypothesis. Front Vet Sci. 4, 99(2017).
  25. García-García, R. M., et al. β-Nerve growth factor identification in male rabbit genital tract and seminal plasma and its role in ovulation induction in rabbit does. Ital J Anim Sci. 17, 442-453 (2017).
  26. Weir, B. J. The reproductive organs of the female plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 365-373 (1971).
  27. Vitullo, A. D., Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Halperin, J., Dorfman, V. B. The Plains Vizcacha. Assisted Reproduction in Wild Animals of South America. , CRC Press. Boca Raton, FL, USA. (2023).
  28. National Research Council Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th edn, National Academies Press. Washington, DC, USA. (2011).
  29. Sikies, R. S., et al. Guidelines of the American Society of Mammalogists for the use of wild mammals in research. J Mammal. 92 (1), 235-253 (2011).
  30. Percie du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).
  31. Roach, N. Lagostomus maximus. The IUCN Red List of Threatened Species. , (2016).
  32. Giacchino, M. Caracterización del proceso de implantación en Lagostomus maximus: un mamífero con poliovulación y reabsorción embrionaria selectiva. [Doctoral thesis]. , Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires. Argentina. (2017).
  33. Kershaw-Young, C. M., Druart, X., Vaughan, J., Maxwell, W. M. C. β-Nerve growth factor is a major component of alpaca seminal plasma and induces ovulation in female alpacas. Reprod Fertil Dev. 24, 1093-1097 (2012).
  34. Kubiak, J. Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest. Dev Biol. 136, 537-545 (1989).
  35. Soede, N. M., Noordhuizen, J. P. T. M., Kemp, B. The duration of ovulation in pigs, studied by transrectal ultrasonography, is not related to early embryonic diversity. Theriogenology. 38 (4), 653-666 (1992).
  36. Nicoll, M. E., Racey, P. A. Follicular development, ovulation, fertilization and foetal development in tenrecs (Tenrec eucaudatus). J Reprod Fertil. 74, 47-55 (1985).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة