هل مقاومة تيكوبلانين التي يتم اكتشافها بواسطة النظام الآلي في سلالات المكورات العنقودية spp موثوقة؟

ملخص

هنا، يقدم بروتوكول لتقييم موثوقية نظام آلي (VITEK 2) لتحديد قابلية التيكوبلانين في عزلات المكورات العنقودية بالمقارنة مع تخفيف المرق الدقيق (BMD)، مع تطبيقات في تأكيد المقاومة وتوجيه العلاج المضاد للميكروبات المناسب.

الملخص

تم تضمين ما مجموعه 467 عزلة من المكورات العنقودية الذهبية (S. aureus) و66 عزلة من المكورات العنقودية سالبة للتخثر (CoNS) التي جمعت بين يونيو 2022 وديسمبر 2024 في هذه الدراسة. تم إجراء اختبار قابلية التيكوبلانين باستخدام نظام اختبار الحساسية المضادة للميكروبات الآلي، وتخفيف المرق الدقيق (BMD)، وطريقة اختبار التدرج. تم اكتشاف مقاومة الميثيسيلين في 71.7٪ من عزلات S. aureus وفي جميع عزلات CoNS. في هذه الدراسة، تم تحديد 13 عزلة من S. aureus و4 عزلات CoNS على أنها مقاومة للتيكوبلانين من خلال نظام اختبار الحساسية الآلي. تم العثور على جميع عزلات S. aureus الثلاثة عشر معرضة للتيكوبلانين من خلال اختبار التدرج وBMD. تم تحديد جميع عزلات CoNS الأربعة على أنها معرضة للإصابة من خلال اختبار التدرج، بينما صنف BMD عزلتين على أنهما معرضتان واثنتان على أنهما مقاومتان. تم اكتشاف مقاومة تيكوبلانين في أربع سلالات [S. capitis (n = 1) و S. haemolyticus (n = 3)] بين معزولات CoNS بواسطة BMD. تم عزل السلالات الأربع من CoNS المقاومة للتيكوبلانين التي حددها BMD من زراعات الدم؛ تم الحصول على ثلاثة من مرضى أطفال وواحد من مريض بالغ. بشكل عام، كان معدل مقاومة الميثيسيلين (MRSA) مرتفعا نسبيا في الدراسة، وكانت جميع عزلات CoNS مقاومة للميثيسيلين. بالإضافة إلى ذلك، وجد أن الأنظمة الآلية غير موثوقة لتحديد مقاومة التيكوبلانين، ويجب تأكيد العازلات التي تم تحديدها كمقاومة بواسطة BMD. نظرا لأن تيكوبلانين هو مضاد حيوي آخر مخفي يستخدم لعلاج مسببات الأمراض مثل MRSA وCoNS المقاومة للميثيسيلين، يجب مراقبة قابليته للإصابة بدقة.

المقدمة

المكورات العنقودية الذهبية (S. aureus) هي واحدة من أكثر أنواع المكورات العنقودية أهمية سريريا بسبب تنوع عوامل الضراوة وقدرته على التسبب في عدوى شديدة في أنسجة وأعضاء مختلفة. هو مسؤول عن التهابات الجلد والأنسجة الرخوة، وعدوى الأنسجة العميقة، والتهابات الجهاز التنفسي، وعدوى المسالك البولية، وعدوى مجرى الدم، ولا يزال واحدا من أهم مسببات الأمراض في بيئات المستشفيات ^1,2. على وجه الخصوص، يعد الوريثوبوسيوم المقاوم للميثيسيلين (MRSA) سببا رئيسيا للعدوى المرتبطة بالرعاية الصحية حول العالم ولا يزال سببا رئيسيا لعدوى الجروح بعد العمليات ^2,3. المكورات العنقودية السلبية للتخثر (CoNS)، رغم أنها جزء من فلورا الجلد الطبيعية، أصبحت مرتبطة بشكل متزايد بالعدوى المحلية والجهازية في السنوات الأخيرة. أدى هذا الارتفاع إلى إجراء اختبارات أكثر تكرارا لحساسية مضادات الميكروبات، وبالتالي زيادة الكشف عن مقاومة مضادات الجليكوببتايد مثل تيكوبلانين⁴.

نظرا لأن سلالات S. aureus وCoNS تظهر عادة مقاومة لمضادات β-لاكتام، فإن مضادات الجليكوببتايد، وخاصة الفانكومايسين والتيكوبلانين، تستخدم على نطاق واسع لعلاج هذه العدوى. أدى انتشار متزايد مسببات الأمراض الطارية المقاومة إيجابية الجرام إلى توسيع استخدام الجليكوببتيدات، مما ساهم في انخفاض قابلية البكتيريا لهذه العوامل ^5,6. لفانكومايسين وتيكوبلانين فعالية مضادة للميكروبات مماثلة؛ ومع ذلك، أظهرت عدة دراسات أن تيكوبلانين مرتبط بآثار جانبية أقل، خاصة انخفاض سمية الكلى ^7,8. لذلك، غالبا ما يعتبر تيكوبلانين بديلا مناسبا للفانكومايسين في مجموعات مرضى محددة، بما في ذلك أولئك الذين يعانون من قلل العدلات أو بكتيريا الدم أو ضعف وظيفة الكلى ^9,10.

يعد التحديد السريع والدقيق لقابلية الجليكوببتيد مهما بسبب الاستخدام الواسع لهذه العوامل في عدوى المكورات العنقودية المقاومة للميثيسيلين وتزايد التقارير عن سلالات مقاومة للجليكوببتيد¹¹. تتوفر عدة طرق مخبرية لتقييم قابلية الجليكوببتايد في أنواع المكورات العنقودية، بما في ذلك تخفيف الأجار، واختبارات التدرج، وتخفيف المرق الدقيق (BMD)، وأنظمة اختبار الحساسية المضادة للميكروبات الآلية⁵. أفادت دراسات سابقة عن وجود فروق بين الأنظمة الآلية وطرق المرجع في اكتشاف انخفاض القابلية أو المقاومة للجليكوببتيدات، وخاصة تيكوبلانين، في أنواع المكورات العنقودية ^4,11.

هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم موثوقية نظام اختبار الحساسية المضادة للميكروبات الآلي لتحديد قابلية التيكوبلانين في عزلات المكورات العنقودية ، مقارنة بطريقة تخفيف المرق، وهي المعيار المرجعي. قد يساعد تقييم خصائص أداء النظام الآلي المختبرات السريرية في تقييم مدى ملاءمته للكشف الروتيني عن قابلية الإصابة بالجليكوببتيد في الممارسة السريرية.

البروتوكول

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المحلية في 27 يناير 2025 (رقم البروتوكول: HRU/25.02.03). أجريت الدراسة وفقا لمبادئ إعلان هلسنكي.

1. تصميم الدراسة

قامت هذه الدراسة الاستعادية بتقييم أداء نظام اختبار الحساسية المضادة للميكروبات الآلي لتحديد قابلية التيكوبلانين في أنواع المكورات العنقودية ، وقارنت النتائج مع طريقة التخفيف الدقيق للمرق (BMD) المرجعية وطريقة اختبار التدرج.

2. الانتقاء المعزول

1. تجميع العازلات السريرية
   1. يشمل ما مجموعه 467 عزلة من المكورات العنقودية الساقطة (CoNS) سالبة للتخثر و66 من المكورات العنقودية السلبية للتخثر (CoNS) تم الحصول عليها من عينات سريرية مختلفة بين يونيو 2022 وديسمبر 2024.
   2. معالجة جميع العينات السريرية وفقا لإجراءات ميكروبيولوجية روتينية في مختبر التشخيص.
   3. أدرج معزولا واحدا فقط لكل مريض في التحليل. استبعد العزلات المتكررة التي تم الحصول عليها من عينات مختلفة من نفس المريض.
2. التحديد الأولي والفحص
   1. تحديد جميع العزلات على مستوى النوع باستخدام مطياف كتلة الرحلة بمساعدة المصفوفة بإزالة الامتصاص بالليزر (MALDI-TOF MS).
   2. اختبر عزل S. aureus وCoNS لمقاومة الميثيسيلين وقابلية التيكوبلانين باستخدام بطاقات VITEK 2 AST-P664 باستخدام نظام اختبار الحساسية الآلي.
   3. سجل قيم التركيز المثبط الأدنى (MIC) التي تولدها نظام اختبار القابلية الآلي للمقارنة لاحقا.
3. تخزين العزل والزراعة الفرعية
   1. تخزين العزلات عند −80 درجة مئوية في مرق الصويا التريبتي مع 20٪ جليسرول وفقا لنظام اختبار الحساسية الآلي.
   2. قبل اختبار المرجع، قم بإذابة العزل في درجة حرارة الغرفة وزراعتها مرتين على أغار دم الأغنام بنسبة 5٪.
   3. حضانة الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة بعد كل ممر لضمان النقاء والاستمرارية.

3. اختبار الحساسية المضادة للميكروبات

1. تخفيف المرق الدقيق (BMD)
   1. تحضير محاليل تيكوبلانين
      1. تحضير محلول مخزن من مسحوق تيكوبلانين بتركيز 2560 ملغ/لتر في مرق مولر-هينتون المعدل بالكاتيونات (CAMHB).
   2. إجراء تخفيف المرق الدقيق
      1. قم بإجراء اختبار تخفيف المرق الدقيق باستخدام صفائح U-bottom معقمة بسعة 96 بئئ.
      2. قم بتوزيع 100 ميكرولتر من CAMHB في كل بئر. قم بتخفيف محلول مخزون تيكوبلانين عشرة أضعاف وأضف 100 ميكرولتر إلى البئر الأول.
      3. تحضير تخفيفات متسلسلة مزدوجة عبر الآبار 1–10 للحصول على تركيزات نهائية للمضادات الحيوية تتراوح بين 64 إلى 0.125 ميكروغرام/مل.
      4. استخدم البئر 11 كوسيلة تحكم للنمو تحتوي على CAMHB ولقاح بكتيريا. استخدم البئر 12 كنقطة تحكم سالبة تحتوي فقط على CAMHB¹².
   3. تحضير اللقاح والحضانة
      1. علق مستعمرات البكتيريا النقية في محلول ملحي معقم واضبط التعليق إلى عكارة تعادل معيار ماكفارلاند 0.5.
      2. جهز تخفيفا بنسبة 1:100 في CAMHB وأضف 100 ميكرولتر من التعليق البكتيري إلى الآبار 1–11 لتحقيق تركيز نهائي في اللقاح يبلغ حوالي 5 × 10⁵ CFU/mL.
      3. حضن الصفائح الدقيقة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة تحت ظروف جوية محيطة¹².
   4. تحديد وتفسير MIC
      1. حدد الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC) كأدنى تركيز من تيكوبلانين الذي يثبط تماما نمو البكتيريا المرئي بعد الحضانة.
      2. تفسير قيم MIC وفقا لإرشادات اللجنة الأوروبية لاختبار الحساسية المضادة للميكروبات (EUCAST) الإصدار 14.0¹³.

4. مراقبة الجودة

1. استخدم المكورات العنقودية الذهبية ATCC 29213، مع نطاق مرجعي لتيكوبلانين MIC بين 0.25–1 ملغ/لتر، كسلالة مراقبة الجودة.

5. التحليل الإحصائي

1. مقارنة الطرق
   1. قارن نتائج MIC التيكوبلانين التي تم الحصول عليها باستخدام نظام اختبار القابلية الآلي مع تلك التي تم الحصول عليها باستخدام طريقة مرجعية BMD.
   2. تعريف التوافق التصنيفي (CA) كنتائج متوافقة أو حساسة أو مقاومة بين الطريقتين.
2. تصنيف الأخطاء
   1. تعريف الأخطاء الكبرى جدا (VME) كعزلات مصنفة على أنها معرضة للإصابة بواسطة نظام اختبار الحساسية الآلي لكنها مقاومة ل BMD.
   2. تعريف الأخطاء الكبرى (ME) كعزلات مصنفة كمقاومة من قبل نظام اختبار الحساسية الآلي لكنها معرضة للضغط العضلي.
3. معايير الأداء
   1. اعتبر أداء الطريقة مقبولا عندما يكون الاتفاق التصنيفي ≥90٪ ومعدلات VME وME ≤3٪، وفقا لمعايير التقييم^{المنشورة 14,15}.

النتائج

تم تضمين ما مجموعه 533 عزلة تم استردادها من عينات سريرية خلال فترة 2.5 سنة في التحليل. تم العثور على جميع عزلات CoNS المقاومة للميثيسيلين (MR-CoNS)، و71.7٪ من عزلات S. aureus ، مقاومة للميثيسيلين. كانت عينات المسحات من الجروح هي العينات السريرية الأكثر شيوعا التي أظهرت عزلات S. aureus ، بينما تم العثور على عزلات MR-CoNS بشكل شائع من زراعة الدم (الشكل 1).

المناقشة

تعد مقاومة المضادات الحيوية واحدة من أهم التهديدات للصحة العامة العالمية، حيث تساهم في زيادة تكاليف الرعاية الصحية، وفشل العلاج، والوفيات³. تستمر معدلات العدوى المكتسبة من المجتمع والمستشفيات الناتجة عن المكورات العنقودية الذهبية في الارتفاع على الصعيدين الوطني والعالمي. مقاومة الميثيسيلين، على وجه الخصوص، مرتبطة بزيادة المراضة والوفاة؛ لذلك، يتم مراقبة ملفات المقاومة بشكل روتيني حول العالم¹⁶.

وفقا لتقري...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مرق مولر هينتون المعدل بنظام الكاتيون	سيغما-ألدريتش، دارمشتات، ألمانيا	CM0405B	لنمو البكتيريا في المرق باستخدام طريقة التخفيف الدقيق
خط مالدي-توف	ماجستير VITEK، BioMé ريو، فرنسا	410893	للتعرف على البكتيريا
معيار ماكفارلاند	bioMé ريو، فرنسا	95060-958	توحيد لقاح البكتيريا
أطباق بترى	RTA، Tü؛ rkiye	2102	للتحضير الوسيط وزراعة البكتيريا
بيبيت تيب 20 - 200 & mu; L	سيغما-ألدريتش، دارمشتات، ألمانيا	Z740105	لتوزيع مولر المعدل حسب الكاتيون– مرق هينتون (CAMHB) في صفائح دقيقة ذات قاع U وتحضير التخفيف التسلسلي
أغار دم الغنم	RTA، Tü؛ rkiye	2001	عزل وزراعة الكائنات الدقيقة
المكورات العنقودية الذهبية	مجموعة ثقافة الأنواع الأمريكية	29213	السلالة المرجعية المستخدمة في هذه الدراسة
مسحوق تيكوبلانين	سيغما-ألدريتش، دارمشتات، ألمانيا	T0578	المضادات الحيوية
مرق الصويا التريبتيكي	ميرك، ألمانيا	1,054,590,500	عزل وزراعة الكائنات الدقيقة
لوحة U في قاع البئر	ثيرمو فيشر العلمي	163320	لاختبار قابلية الحساسية المضادة للميكروبات باستخدام طريقة تخفيف المرق
بطاقات VITEK 2 AST-P664	bioMé ريو، فرنسا	414197	لاختبار الحساسية المضادة للميكروبات
VITEK2 كومباكت	bioMé ريو، فرنسا	4700030	لاختبار الحساسية المضادة للميكروبات