يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

اختبار نقطة النقطة للكشف عن مستويات تعديل الحمض النووي الريبي العالميN 6-ميثيلادينوزين

553 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69860

⸱

فبراير 6, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولا لتقييم مستويات m⁶A العالمية بشكل شبه كمي باستخدام نقطة النقطة. يتم استخراج الحمض النووي الريبي الكلي، وتفكيكه، ونشره على غشية نايلون، وفحص بجسم مضاد مضاد ل m⁶A، ويتم رؤيته بواسطة الإضاءة الكيميائية. تعكس شدة الإشارة، التي تم قياسها بواسطة تحليل ImageJ الرمادي، وفرة المثيلة النسبية، مما يوفر سير عمل قابل للتكرار للبحث.

الملخص

N 6-ميثيلادينوزين (m⁶A) هو التعديل الداخلي الأكثر وفرة في الحمض النووي الريبي الرسول حقيقي النواة (mRNA) ويعمل كمنظم رئيسي للتعبير الجيني بعد النسخ. يمكن تطبيق طرق التحقيق في m⁶A على مستويات دقة متعددة، بما في ذلك القياس العام، والكشف عن النيوكليوتيدات الخاصة، وتحليل النسخ المحددة ذات الاهتمام. من بين هذه الاختبارات، يوفر اختبار نقطة النقطة نهجا بسيطا وسريعا وفعالا من حيث التكلفة لتقييم شبه كمي لمستويات تعديل الاندماج-استحواذات العالمية. في هذا الاختبار، تعالج الخلايا أولا لاستخراج الحمض النووي الريبي الكلي، ثم يخفف ويغير الطبع. يتم رصد عينات الحمض النووي الريبي على غشاء نايلون، ويتم فحصها بجسم مضاد مضاد m⁶A، ويتم رؤيتها بواسطة التلميع الكيميائي، مع شدة إشارة تشير إلى وفرة الميثلة النسبية. أخيرا، يتم قياس ومقارنة شدة الإشارة عن طريق قياس قيم التدرج الرمادي باستخدام ImageJ. مقارنة بالطرق القائمة على التسلسل أو مطيافية الكتلة، يتطلب النقطة النقطية أجهزة وخبرة تقنية قليلة، مما يجعله مناسبا بشكل خاص للفحص الروتيني، والدراسات الوظيفية الأولية، والتحليلات المقارنة. يوفر هذا البروتوكول سير عمل مفصل وقابل للتكرار لتنفيذ اختبار نقطة النقطة m⁶A في كل من البحث الأساسي والتطبيقات الترجمية.

المقدمة

يعد N 6-ميثيلادينوزين (m⁶A) التعديل الداخلي الأكثر انتشارا في الحمض النووي الريبي الرسول حقيقي النواة (mRNA) ويلعب دورا أساسيا في تنظيم ما بعد النسخ، بما في ذلك استقرار الحمض الريبي، والربط، والتحليل، والترجمة، والتصدير 1,2,3. تم ربط خلل تنظيم تعديل m⁶A بعمليات فسيولوجية ومرضية متنوعة، بما في ذلك بدء الورم، وتطوره، والانتشار. في الساركوما العظمية، لوحظت مستويات مرتفعة من m⁶A في كل من خطوط الخلايا والأنسجة، مما يشير إلى دور في مثيلة RNA الشاذة في بيولوجيا المرض 6,7. لذلك، فإن التقييم المنهجي لوفرة الميثوليكية العالمية (m⁶a)، إلى جانب تغيراتها في النسخ المرتبطة بساركوما العظمية والمسارات التنظيمية، أمر ضروري لتوضيح الآليات البيولوجية والآثار السريرية لمثيلة الحمض النووي الريبي في الساركوما العظمية.

تتوفر عدة طرق تحليلية لدراسة تعديلات m⁶a 8,9. يستخدم اختبار الكروماتوغرافيا السائلة-مطيافية الكتلة/مطيافية الكتلة (LC-MS/MS)10 واختبار المقاومة المناعية المرتبطة بالإنزيمات (ELISA)11 كلاهما لقياس مستويات الميكروسيوم الكلي. الأول يوفر حساسية عالية لكنه يتطلب معدات وخبرة متخصصة، بينما الثاني يعطي مستويات m6أمبير نسبية ويساهم في تكلفة أعلى من اختبار النقطة النقطية. يتيح MeRIP-qPCR التقييم المستهدف للنصوص المحددة، لكنه يتأثر بشدة بكفاءة التكرار المناعي12. MeRIP-seq13، m⁶A-seq 14، و m⁶A-SAC-seq15 هي طرق قائمة على التسلسل، يمكنها رسم خريطة دقيقة لمواقع المثيلة m⁶A؛ ومع ذلك، فهي مكلفة وتتطلب تحليلا مكثفا في المعلوماتية الحيوية.

يقدم اختبار النقطة m⁶A طريقة بسيطة وسريعة وفعالة من حيث التكلفة لتحديد مستويات تعديل m⁶A العالمية في RNA. باعتباره اختبارا مناعيا شبه كميا، تكمن ميزته الأساسية في توليد رؤية شاملة لوفرة m⁶A دون الحاجة إلى معدات متخصصة أو تحليل معلوماتي حيوي معقدة. وهذا يجعل اختبار نقطة النقطة m⁶A أداة قيمة للفحص الروتيني، والتحقق الوظيفي الأولي، والبحث السريري، بالإضافة إلى كونه مكملا عمليا للتقنيات المتقدمة في التسلسل والتحليل الطيفي الكتلي. يقدم البروتوكول الحالي سير عمل مفصل خطوة بخطوة، يضمن اكتشافا قابلا لإعادة الإنتاج وتطبيقا واسعا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: البروتوكول منظم في ثلاثة أقسام: تحضير الحمض النووي الريبي، اختبار النقطة النقطية، والقياس. تلخص جدول المواد المواد المطلوبة، والجدول التكميلي 1 يوضح تركيبات الكواشف، ويوضح الشكل 1 سير العمل التجريبي.

1. تحضير الحمض النووي الريبي

  1. تحضير الخلايا
    1. قم بإزالة خلايا 143B التي تحتوي على SNHG21-knockdown مستقر (shSNHG21)، وخلايا التحكم السلبية (shCtrl)، والخلايا المعالجة ب 3-ديزادينوسين (3-DAA؛ [100 ميكرومو، 24 ساعة]) وحمض الميكلوفيناميك (MA؛ [100 ميكرومو، 24 ساعة]) من الحاضنة التي تبلغ حرارة 37 درجة مئوية.
    2. تحقق من أن التقاء الخلايا حوالي 80-90٪ وأن الخلايا في حالة جيدة تحت المجهر.
    3. أزل وسط الزراعة، ثم شطف الخلايا مرتين ب 1 مل من PBS.
    4. أزل PBS، ثم أضف 1 مل من التربسين لكل طبق بحجم 6 سم.
    5. اهز التربسين بلطف لتوزيع التربسين بشكل متساو ثم حضن لمدة دقيقة واحدة.
    6. أزل التربسين، ثم أضف 1 مل من وسط يحتوي على 10٪ FBS لإنهاء الهضم.
    7. قم بعمل معلق الخلية عدة مرات لتشتيت الخلايا.
    8. انقل تعليق الخلية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق خال من RNase بسعة 1.5 مل.
      ملاحظة: ضع علامة على الأنبوب قبل الاستخدام. يجب تنفيذ الخطوات من 1.1.3 إلى 1.1.8 في ظروف معقمة.
    9. استخدم الطرد المركزي عند 1000 × جرام لمدة 3 دقائق، ثم أزل المادة الفائقة بالكامل.
  2. استخراج الحمض النووي الريبي
    ملاحظة: يتم استخراج الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة تنقية RNA من EZ-press.
    1. أضف 600 ميكرولتر من محلول التحلل (الموجود في مجموعة تنقية RNA) إلى الحبيبة والدوامة بشكل جيد لتحليل الخلايا بالكامل، واتركها واقفة لمدة 5 دقائق.
      ملاحظة: تستخدم حوالي 2 ×10 6 خلايا لعزل الحمض النووي الريبي.
    2. أضف حجم مماثل من الإيثانول بنسبة 100٪ ودوامة جيدا.
    3. أضف 600 ميكرولتر من الخليط إلى عمود دوران مجمع بأنبوب تجميع.
      ملاحظة: قم بتجميع عمود الدوران وأنبوب الجمع قبل الاستخدام، ووضع علامة على الأنبوب قبل الاستخدام.
    4. استخدم الطرد المركزي بحرارة 12,000 × جرام لمدة دقيقة واحدة ثم تخلص من السائل في أنبوب التجميع.
      ملاحظة: تجنب التلامس بين أسفل العمود والسائل أو المشغل.
    5. كرر الخطوات السابقة 1.2.3-1.2.4 للخلطة المتبقية.
    6. أضف 500 ميكرولتر من محلول الغسيل (الموجود في مجموعة تنقية RNA) إلى كل عمود دوران، واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقة واحدة.
    7. استخدم الطرد المركزي على 12,000 × جرام لمدة دقيقة واحدة ثم تخلص من السائل في أنبوب التجميع.
    8. قم بجهاز الطرد المركزي مرة أخرى على 12,000 × جرام لمدة دقيقة واحدة لإزالة السائل المتبقي.
    9. انقل عمود الدوران إلى أنبوب جديد بسعة 1.5 مل خال من RNase، وافتح الغطاء، واجعل الغلاف يجف في الهواء لمدة دقيقتين.
      ملاحظة: ضع علامة على الأنبوب قبل الاستخدام.
    10. أضف 25-50 ميكرولتر من محلول التسقيير (ماء خال من الإنزيمات) إلى مركز عمود الدوران.
    11. حضن في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين.
    12. جهاز طرد مركزي عند 12,000 × جرام لمدة دقيقة واحدة لإطلاق RNA.
    13. تخلص من عمود الدوران وضع الحمض النووي الريبي على الثلج.
      ملاحظة: قم بتخزين الحمض النووي الريبي عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  3. تخفيف الحمض النووي الريبي
    1. قياس تركيز الحمض النووي الريبي لخلايا shSNHG21 بحجم 143B، وخلايا shCtrl من 143B، والخلايا المعالجة ب 3-DAA وMA باستخدام مطياف DS-11.
    2. جهز 1 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي من كل خط خلية.
    3. يتم تخفيف RNA بشكل تسلسلي إلى 400 نانوغرام، 200 نانوغرام، و100 نانوغرام باستخدام مياه معالجة بديثيل بيروكربونات (DEPC).
      ملاحظة: قم بضبط تدرج التركيز حسب الحاجة.
  4. إزالة الطبيعة من الحمض النووي الريبي
    1. تم تخفيف عينات RNA بالحرارة عند 95 درجة مئوية لمدة 3 دقائق.
    2. انقل العينات فورا إلى الثلج لتبرد.
      ملاحظة: يمكن تخزين الحمض النووي الريبي المغير الطبيعي عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد.

2. نقطة النقطة

  1. رصد الحمض النووي الريبي
    1. اقطع غشاء النايلون المشحون موجبا إلى الحجم المطلوب.
    2. ارسم خطوط مرجعية ووضع علامة على الغشاء باسم العينة.
    3. اخلط الحمض النووي الريبي جيدا عن طريق الدوامة اللطيفة أو استخدام الماصات.
    4. نقطة 1-2 ميكرولتر من كل عينة RNA على المواقع المحددة على الغشاء.
      ملاحظة: استخدم رؤوس الماصات الخالية من RNase في جميع الأوقات. تجنب التلامس المباشر بين طرف الماصة والغشاء. اسمح للحمض النووي الريبي بالانتشار بشكل طبيعي على الغشاء. استخدم رأس ماصة جديد لكل عينة. لا تتجاوز 2 ميكرولتر لكل نقطة لمنع الانتشار غير المنتظم.
  2. الربط المتقاطع بين الحمض النووي الريبي
    1. جفف الغشاء في الهواء لمدة 3 دقائق.
    2. قم بإجراء الربط المتقاطع للحمض النووي الريبي عن طريق إشعاع الغشاء في متقاطع UV عند 254 نانومتر، 120 mJ/cm².
      ملاحظة: حضن الغشاء عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة كخيار بديل.
    3. اغسل الغشاء ب 10 مل من 1x TBST على منصة هزاز لمدة 5 دقائق لإزالة RNA غير مربوط.
  3. انسداد الغشاء
    1. جهز حلا بنسبة 5٪ من BSA.
      ملاحظة: حضر هذا المحلول طازجا قبل الاستخدام.
    2. حضن الغشاء في محلول الانسداد على درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.
  4. حضانة الأجسام المضادة
    1. حضن الغشاء بجسم مضاد مضاد m⁶A طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: قم بتخفيف الأجسام المضادة 1:1000 في محلول 5٪ BSA قبل الاستخدام. حضانة الغشاء على منصة هزاز مع هز لطيف (50 دورة في الدقيقة).
    2. اغسل الغشاء ثلاث مرات ب 10 مل من 1x TBST على منصة هزاز لمدة 10 دقائق.
    3. حضن الغشاء بأجسام مضادة ثانوية مرافق من بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: قم بتخفيف الأجسام المضادة 1:1000 في محلول 5٪ BSA قبل الاستخدام.
    4. اغسل الغشاء ثلاث مرات ب 10 مل من 1x TBST على منصة هزاز لمدة 10 دقائق.
  5. كشف الإضاءة الكيميائية
    1. ضع ركيزة HRP المضيئة كيميائيا بشكل متساو باتجاه الأسفل على الغشاء.
      ملاحظة: حضن الغشاء بالركيزة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع هز لطيف.
    2. اكتشاف الإشارة باستخدام نظام تصوير كيميائي للتوليخ.
    3. استخدم وظيفة التعريض التلقائي في نظام التصوير الكيميائي التلويضي كمسح أولي.
      ملاحظة: اقبل الوقت التلقائي فقط إذا كانت الإشارة الأكثر سطوعا أقل من 65٪ مشبعة؛ وإلا، قلل التعريض إلى النصف وأعد الإشارة حتى تنخفض ذروة الإشارة إلى 30-60٪.
  6. صبغة الميثيلين الأزرق (MB)
    1. حضن الغشاء في محلول التلوين MB لمدة دقيقة واحدة.
    2. اغسل الغشاء ثلاث مرات باستخدام 10 مل من 1x TBST على منصة هزاز لمدة 5 دقائق، وصور كجهاز تحكم في التحميل.
      ملاحظة: قم بصبغ نفس الغشاء المستخدم في التلميع الكيميائي. تجنب إزعاج الرواسب في محلول التلوين. ارتد ملابس واقية وقناع، لأن ال MB صعب الخلع.
    3. قم بإزالة صبغة الغشاء المملموس بالكتلة بعد التصوير باستخدام محلول يحتوي على 1٪ من SDS على منصة هزاز لمدة 15 دقيقة لتسهيل التوثيق أو إمكانية إعادة الفحص.

3. القياس الكمية

  1. قياس القيمة الرمادية
    1. استيراد الصورة إلى برنامج ImageJ.
    2. حول الصورة إلى صيغة 8-بت باستخدام Image > Type > 8-بت.
    3. اطرح الخلفية باستخدام العملية > اطرح الخلفية.
      ملاحظة: نصف القطر: 50.0 بكسل، تحقق من خلفية الضوء.
    4. استخدم أداة المستطيل لاختيار منطقة التحليل.
    5. حدد المسارات بشكل متسلسل باستخدام Analyze > Gels > Select First Lane.
    6. توليد ملفات تعريف الشدة باستخدام تحليل الجل > > رسم المسارات وقياس القمم.
    7. قس قيم التدرج الرمادي ل m⁶A و MB على التوالي.
  2. انسخ البيانات في جدول للتحليل.
  3. قارن شدة الإشارة لتقييم مستويات تعديل m⁶a العالمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

للتحقق بدقة من أداء اختبار نقطة البقعة وفحص دور SNHG21 في تنظيم مستوياتm6 A العالمية، تم تعريض 143B لاضطرابات دوائية إما تثبيط أو تعزز ميثلةm6 أمبير، وتمت مراقبة وفرةm 6 أمبير في كلا الاتجاهين.

كمية البقعة النقطية للوفرة العالميةm 6 A
قمنا أولا بتقييم قدرة هذا الاختبار على اكتشاف الانخفاض في مستوياتm 6 A عن طريق تثبيط مثيلةm 6 A (الشكل 2). كما هو موضح

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة، أدى تقليل SNHG21 في خلايا الساركوما العظمية 143B إلى انخفاض شدة إشارة m⁶A، مما يثبت قيمة هذا الاختبار لتقييم ما إذا كانت التعديلات الجينية تؤثر على مثيلة الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك، يعمل هذا الاختبار كأداة لتطبيقات متعددة، منها: 1) الدراسات الوظيفية والتحقق الميكانيكي: يمكن استخدام هذا الاختبار للفحص الأولي السريع لتحديد ما إذا كانت مستويات الm⁶A العالمية مرتبطة بعمليات بيولوجية محددة، مثل تمايز الخلايا، الاستجابة للإجهاد، أو تقدم الورم16

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون لا يذكرون أي تضارب مصالح.

شكر وتقدير

وقد تم دعم هذا العمل بمنح من المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة (82174408، 82374477، و 82474535). تم إنشاء الشكل 1 باستخدام BioRender.com.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
3-ديزادينوسين (3-DAA)MCEهاي-W013332A1 ملغ
الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة ل m6Aبروتين تك68055-1-Ig50 & mu; L
مصل البقر الألبومين (BSA، Fraction V)BioFroxx4240GR100 100 جرام
نظام تصوير التصوير الطبي العسكري ChemiDocبيو راد12003154
مستوى الجلوكوز العالي DMEMالحكم319-005-CL500 مل
مطياف DS-11دينوفيكسDS-11
مجموعة تنقية الحمض النووي الريبي EZ-pressEZB B0004DP100 بريبس
FBS - جودة فائقةالحكم086-150500 مل
معالج IgG مضاد للفأر من نوع HRP (H+L)بيوتايمA02161 مل
ركيزة إموبيلون الغربية المضيئة لمعدل ضربات القلب الكيميائي ميليبورWBKLS0500مرتين &00; 250 مل
حمض الميكلوفيناميك (ماساتشوستس)MCEHY-1172751 ملغ
محلول تلوين الميثيلين الأزرقسولاربيولوجياG13000.1٪، 100 مل
غشاء نقل النايلونLABSELECTTM-NY-XS-457.4 &00; 8.5 سم، 0.45 & مو; ذكر، 10 أجزاء لكل كيس
مخزن PBS (مسحوق جاف جاهز للاستخدام)بايوشاربBL601Aالحموضة: 7.2-7.4، 2 لتر/كيس
كبريتات الصوديوم الدوديسيل (SDS)سيغماL5750-500G500 جرام
مسحوق البريمكس من TBSسانغون  A510025-00011EA (مسحوق 243.9 جرام)
إنزيم TrypLE Expressجيبكو12604-0211&00 م؛ 500 مل
توين-20سانغونA600560-0500500 مل
الرابط المتقاطع بالأشعة فوق البنفسجيةUVPCL-1000

المراجع

  1. Wang, X., et al. N6-methyladenosine-dependent regulation of messenger RNA stability. Nature. 505 (7481), 117-120 (2014).
  2. Zhang, Z., Wei, W., Wang, H., Dong, J. N6-methyladenosine-sculpted regulatory landscape of noncoding RNA. Front Oncol. 11 (1), 743990(2021).
  3. Hsu, P. J., et al. The RNA-binding protein FMRP facilitates the nuclear export of N6-methyladenosine-containing mRNAs. J Biol Chem. 294 (52), 19889-19895 (2019).
  4. Chen, X. -Y., Zhang, J., Zhu, J. -S. The role of m6A RNA methylation in human cancer. Mol Cancer. 18 (1), 103(2019).
  5. Li, Y., et al. Molecular characterization and clinical relevance of m6A regulators across 33 cancer types. Mol Cancer. 18 (1), 137(2019).
  6. Hu, Y., Zhao, X. Role of m6A in osteoporosis, arthritis and osteosarcoma (review). Exp Ther Med. 22 (3), 926(2021).
  7. Zhang, Y., et al. N6-methyladenosine (m6A) modification in osteosarcoma: expression, function and interaction with noncoding RNAs-an updated review. Epigenetics. 18 (1), 2260213(2023).
  8. Zhu, W., et al. Detection of N6methyladenosine modification residues (review). Int J Mol Med. 43 (6), 2267-2278 (2019).
  9. Wang, Y., Jia, G. Detection methods of epitranscriptomic mark N6-methyladenosine. Essays Biochem. 64 (6), 967-979 (2020).
  10. Stejskal, S., et al. Global analysis by LC-MS/MS of N6-methyladenosine and inosine in mRNA reveal complex incidence. RNA. 31 (4), 514-528 (2025).
  11. Ensinck, I., et al. m6A-ELISA, a simple method for quantifying N6-methyladenosine from mRNA populations. RNA. 29 (5), 705-712 (2023).
  12. Liu, J., et al. m6A mRNA methylation regulates AKT activity to promote the proliferation and tumorigenicity of endometrial cancer. Nat Cell Biol. 20 (9), 1074-1083 (2018).
  13. Zhang, M., Li, Q., Xie, Y. A Bayesian hierarchical model for analyzing methylated RNA immunoprecipitation sequencing data. Quant Biol (Beijing). 6 (3), 275-286 (2018).
  14. Dominissini, D., et al. Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq. Nature. 485 (7397), 201-206 (2012).
  15. Mishra, T., Phillips, S., Zhao, Y., Wilms, B., He, C., Wu, L. Epitranscriptomic m6A modifications during reactivation of HIV-1 latency in CD4+ T cells. mBio. 15 (11), e0221424(2024).
  16. Li, J., et al. METTL16 promotes lipid metabolic reprogramming and colorectal cancer progression. Int J Biol Sci. 21 (11), 4782-4797 (2025).
  17. Ren, F., Cai, Y., Song, Y. OTUD7B stabilization by METTL14-mediated m6A methylation drives HIF-1α expression in esophageal squamous cell carcinoma. Oncol Res. 33 (8), 2055-2074 (2025).
  18. Chen, Y., et al. WTAP facilitates progression of hepatocellular carcinoma via m6A-HuR-dependent epigenetic silencing of ETS1. Mol Cancer. 18 (1), 127(2019).
  19. Gu, Y., et al. Upregulation of circGDI2 inhibits tumorigenesis by stabilizing the expression of RNA m6A demethylase FTO in oral squamous cell carcinoma. Noncoding RNA Res. 10 (1), 140-152 (2025).
  20. Ura, Y., et al. Quantitative dot blot analyses of blood-group-related antigens in paired normal and malignant human breast tissues. Int J Cancer. 50 (1), 57-63 (1992).
  21. Reed, K. C., Mann, D. A. Rapid transfer of DNA from agarose gels to nylon membranes. Nucleic Acids Res. 13 (20), 7207-7221 (1985).
  22. Herrin, D. L., Schmidt, G. W. Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization. Biotechniques. 6 (3), 196-200 (1988).
  23. Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. RNA: A Laboratory Manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2010).
  24. Sambrook, J., Russell, D. W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. , 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. (2001).
  25. Helm, M., Motorin, Y. Detecting RNA modifications in the epitranscriptome: Predict and validate. Nat Rev Genet. 18 (5), 275-291 (2017).
  26. Meyer, K. D., Jaffrey, S. R. The dynamic epitranscriptome: N6-methyladenosine and gene expression control. Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (5), 313-326 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

N6 m6A RNA ImageJ
اختبار نقطة النقطة للكشف عن مستويات تعديل الحمض النووي الريبي العالميN 6-ميثيلادينوزين
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.