مقالة منهجية

طريقة موحدة لاكتشاف أنابيب النانو النفقية في خلايا جلد الإنسان لتطبيقات هندسة الأنسجة

790 مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69883

⸱

يناير 13, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Savaid Stomatology School, Hangzhou Medical College, 2Engineering Laboratory for Biomaterials and Tissue Regeneration, Ningbo Stomatology Hospital, 3Ningbo Savaid Stomatology and Otolaryngology Medical Institute, Ningbo ENT Hospital, 4Department of Urology, the Affiliated People's Hospital of Ningbo University

في هذه المقالة

ملخص

هنا، يعرض بروتوكول موحد لتصوير أنابيب النانو النفقية بين خلايا الكيراتينوس البشرية والأرومات الليفية الجلدية باستخدام وسم الغشاء وF-actin مع تصوير كونفوكال z-stack، مع خيار التلوين المشترك α التيوبولين، مما يتيح الكشف القابل للتكرار وتوصيف الخلايا الهيكلية لتطبيقات هندسة الأنسجة.

الملخص

أنابيب النانو النافقية (TNTs) هي قنوات رقيقة تعتمد على الأكتين بين الخلايا تتيح النقل طويل المدى للعضيات وحمولة الإشارات. على الرغم من الإبلاغ الواسع في أنواع الخلايا المتعددة، إلا أن وجودها في خلايا الجلد البشرية لم يتم وصفه بشكل جيد. تصف هذه المقالة بروتوكولا موحدا لاكتشاف وتوصيف TNTs في المختبر بين خلايا الكيراتينية البشرية البشرية والأرومات الليفية الجلدية. تتضمن الطريقة تحضير زراعة مشتركة للخلايا الأولية، وتثبيت لطيف للحفاظ على مادة TNT الهشة، ووضع العلامات على الغشاء باستخدام معرقلة جرثومة القمح، وتلوين الأكتين F باستخدام الفالودين، والتصوير المائي المائي بالمجهر الكونفوكلي المقلوب لتمييز TNTs المعلقة فوق الطبقة السفلية عن الفيلوبوديا اللاصقة. يسمح التلوين المناعي الاختياري ل α-التيوبولين بتقييم دمج الأنابيب الدقيقة. تعرف TNTs بثلاث ميزات: نتوءات رفيعة ومستقيمة تربط بين خليتين أو أكثر، وجود F-actin، والاستمرارية عبر أزواج الخلايا في المقاطع البصرية المتسلسلة. تظهر النتائج التمثيلية أن TNTs تربط أزواج جلدية-جلدية، وبشرية-بشرية، وجلدية-بشرية، بتركيب هيكلي خلوي متغير (F-actin وحده أو F-actin بالإضافة إلى α-tubulin). تشمل الخطوات الحرجة التثبيت اللطيف، واستخدام الكواشف الجديدة، والحصول على عدد كاف من مستويات Z لتجنب التصنيف الخاطئ، بينما تشمل العيوب الشائعة تكسر TNT والتلوين غير الكامل. معا، تتيح هذه الخطوات المحسنة الكشف القابل للتكرار عن مادة TNT في أنظمة خلايا الجلد وتوفر أساسا منهجيا للبحث المستقبلي في التواصل الوسيط ب TNT في بيولوجيا الجلد وتجديدها.

المقدمة

أنابيب النانو النفقية (TNTs) هي قنوات نانوية تعتمد على الأكتين تمكن من النقل المباشر بين الخلايا للعضيات والجزيئات الإشارية. عادة ما يكون طولها بين 6-100 ميكرومتر وقطرها بين 50-500 نانومتر، وبعضها يصل سمكها إلى 700 نانومتر. على عكس نتوءات الغشاء الفارغة، تحتوي TNTs على خيوط هيكلية خلوية، وغالبا ما تكون F-actin، والتي توفر صلابة هيكلية وتدعم نقل الميتوكوندريا 2,3,4. في الزراعة ثنائية الأبعاد، تعرف TNTs بثلاث ميزات: نتوءات رفيعة (20-700 نانومتر)، مستقيمة معلقة فوق الطبقة السفلية تربط بين خليتين أو أكثر؛ وجود خيوط F-أكتين؛ والقدرة على نقل البضائع.

منذ التعرف الأول على خلايا PC-12 بواسطة روستوم وآخرين، تمت دراسة TNTs في عدة أنظمة، بما في ذلك أنظمة القلب والأوعية الدموية6، والمناعة7، والجهاز التنفسي8، وظهارة القرنية9، والأورام10، والجهاز العصبي11,12. تساهم في العمليات الفسيولوجية والمرضية مثل الإشارات المناعية، والموت المبرمج، ونقل المواد، وتكوين الأوعيةالدموية 13,14,15. يمكن لل TNTs التوسط في نقل بعيد المدى لشحنات متنوعة، بما في ذلك الميتوكوندريا، والشبكة الإندوبلازمية، والأحماض النووية، والأيونات، وحتى الفيروسات 5,16,17.

الجلد عضو معقد هيكليا، حيث تعتمد البشرة والأدمة على التواصل المستمر للتوازن الداخلي، وشفاء الجروح، وتجديد الأطراف18، 19، 20. على الرغم من أن TNTs قد وصفت في العديد من الأنسجة، بما في ذلك الجهاز المناعي، والجهاز العصبي، وظهارة القرنية 7,9,12، إلا أن وجودها في خلايا جلد الإنسان لم يتم الإبلاغ عنه في الأدبيات المنشورة. استنادا إلى الإطار المنهجي الذي وصفه ساينز-دي-سانتا-ماريا وآخرون، نقدم بروتوكولا موحدا ومحسنا للكشف عن TNTs بين خلايا الكيراتينوسين الجلدية والأرومات الليفيةالجلدية 22 باستخدام التلوين المناعي الفلوري المدمج مع المجهر الكونفوكلي المقلوب.

مقارنة بطرق الكشف البديلة ل TNT، يوفر هذا البروتوكول توازنا عمليا بين الحساسية وسهولة الوصول. يمكن للتصوير بالخلايا الحية التقاط ديناميكيات TNT لكنه محدود بالسمية الضوئية وطبيعة TNTs قصيرة العمر 1,23. يوفر المجهر الإلكتروني تفاصيل فائقة البنية لكنه غالبا ما يفشل في الحفاظ على امتدادات طويلة من TNT وغير عملي للتحليل الروتيني لخلايا الجلد الأولية24,25. تمكن أنظمة الأنابيب النانوية المعتمدة على المراسل من التتبع في الوقت الحقيقي لكنها تتطلب تلاعبا جينيا، وهو أمر غير فعال عادة في الخلايا الكيراتينية الأولية والأرومات الليفية24,26. على النقيض من ذلك، يستخدم البروتوكول الحالي الفلورية المناعية القياسية والمجهر الكونفوكلي، مما يسمح بالكشف القابل للتكرار عن TNT عبر مزارع خلايا جلدية معدة بشكل مستقل مع الحفاظ على التوافق مع الخلايا الأولية الهشة.

تعد هذه الطريقة مناسبة بشكل خاص لتحليل العينة الثابتة حيث يكون تركيب الهيكل الخلوي وانتشار TNT محل اهتمام. نظرا لأن TNTs هشة للغاية، تظل خطوات التثبيت والتعامل قيودا رئيسية، ولا يمكن لهذا النهج التقاط ديناميكيات TNT في الوقت الحقيقي. ومع ذلك، بالنسبة للمختبرات التي تعمل مع خلايا الجلد البشرية الأولية، يوفر هذا السير الموحد طريقة سهلة ومتسقة لتصور TNTs ويدعم الدراسات اللاحقة حول وظائفها المحتملة في هندسة الأنسجة وتجددها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

جميع خلايا الجلد المستخدمة في هذه الدراسة كانت سابقا خلايا أولية مجمدة تم عزلها من أنسجة الجلد البشري التي تم الحصول عليها كعينات من القلفة المهملة من إجراءات الختان، وتم إزالة هويتها بالكامل22. تم جمع عينات الجلد البشري في قسم المسالك البولية، مستشفى الشعب التابع لجامعة نينغبو، وتمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات المؤسسة (البروتوكول رقم 2024104؛ تاريخ الموافقة: 30 أكتوبر 2024).

1. تحديد TNTs في الخلايا الكيراتينية الجلدية البشرية البشرية الأولية والأرومات الليفية الجلدية

  1. تحضير المحلول
    1. تحضير محلول تثبيت 1 (200 ميكرولتر) بإضافة 4٪ من PFA (100 ميكرولتر)، 2.5٪ جلوتارالديهيد (4 ميكرولتر)، 1 مليون HEPES (40 ميكرولتر)، و1x PBS (56 ميكرولتر). حضر طازجا ودافئا مسبقا حتى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
    2. تحضير محلول ثابت 2 (200 ميكرولتر) بإضافة 8٪ PFA (100 ميكرولتر)، 1 متر HEPES (0.4 ميكرولتر)، 1x PBS (99.6 ميكرولتر). حضر طازجا ودافئا مسبقا حتى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
    3. تحضير محلول تثبيت 3 (200 ميكرولتر) بإضافة 8٪ من PFA (100 ميكرولتر)، 2.5٪ جلوتارالديهيد (4 ميكرولتر)، 1x PBS (96 ميكرولتر). حضر طازجا ودافئا مسبقا حتى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
  2. زراعة الخلايا
    1. إذابة وزراعة خلايا الكيراتينية البشرية والخلايا الليفية الجلدية البشرية في أطباق بحجم 60 مم باستخدام وسط النمو المناسب. قم بإضافة زراعة الخلايا الكيراتينية بفيتامين Y-27632 بتركيز نهائي قدره 5 ميكرومولار أثناء الإنعاش. حافظ على الزراعة عند 37 درجة مئوية في حاضنة رطبة حتى تصل الخلايا إلى ~80٪ من التقاء الجسم.
    2. قم بإزالة الوسط وغسل الخلايا لفترة وجيزة ب 1 مل من 1x PBS (تستخدم للحفاظ على درجة الحموضة الفسيولوجية والأوسمالية أثناء الغسل). استنشق PBS.
    3. أضف 1 مل من 0.05٪ من تريبسين-EDTA، وزع بشكل متساو، وحضن على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 1.5-2.5 دقيقة.
    4. أعد تعليق الخلايا بلطف عن طريق استخدام الماصات. أضف 2 مل من وسط النمو، ثم انقله إلى أنبوب بسعة 15 مل، ثم استخدم الطرد المركزي بحرارة 200 x g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    5. تخلص من المادة الفائقة وأعد تعليق الحبيبات في 1-2 مل من المتوسط. عد الخلايا باستخدام عداد تلقائي.
    6. زرع 12,000 من الخلايا الليفية الجلدية أو 20,000 كيراتينية في كل بئر من شريحة حجرة مكونة من 8 آبار في حجم نهائي يبلغ 400 ميكرولتر. بعد البذر، اهز الحجرة جيدا لتوزيع الخلايا بشكل متساو. حضن لمدة ~24 ساعة عند 37 درجة مئوية.
    7. بعد حوالي 24 ساعة من الحضانة، راقب التقاء الخلية تحت المجهر. إذا وصل إلى ~80٪، تابع خطوات التثبيت التالية.
  3. التثبيت
    1. عندما تصل الزراعة إلى ~80٪ من التلاقط، أضف بلطف عدة قطرات من محلول التثبيت 1 مباشرة إلى بئر الحجرة لتثبيت الخلايا مسبقا. حضن لمدة 4 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تأكد من انتشار المثبت بشكل متساو دون إزعاج الخلايا.
      تحذير: تعامل بحذر لتجنب تعطيل مادة TNT. نظرا لأن المحاليل المثبتة تحتوي على مكونات سامة مثل PFA والجلوتارالديهايد، ارتد دائما قفازات واقية، وملابس واقية، وقناع، وتعامل معها في غطاء بخار. تأكد من غسل يديك جيدا بعد ذلك. اجمع نفايات تثبيت PFA وغلوتارالديهايد بشكل منفصل في حاويات معلمة للتخلص من المواد الكيميائية الخطرة.
    2. استنشق المحلول المسبق واستبدله ب 140 ميكرولتر من محلول التثبيت الجديد 1، لضمان تغطية البئر بالكامل. حضن لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    3. أزل المحلول التثبيتي 1 وأضف 140 ميكرولتر من المحلول التثبيتي 2. حضن لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. تأكد من أن المحلول يغطي الخلايا بالكامل للحفاظ على تثبيت منتظم.
    4. إزالة المثبت، ثم أضف 140 ميكرولتر من 100 مللي مولار NH₄Cl لتبريد الألدهيدات المتبقية. حضن لمدة 10-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    5. اشطف العينات ثلاث مرات باستخدام 1x PBS لمدة 30 ثانية لكل منها في درجة حرارة الغرفة، مع رش الأنابيب بلطف على طول جدار الحجرة لتجنب غسل الخلايا أو تكسر TNTs.
  4. التلوين الغشائي والهيكلي الخلوي
    1. احتضن الخلايا ب 140 ميكرولتر من 1:300 (v/v) WGA (أغلتينين جرعة القمح)-أليكسا فلور، الذي يضع علامات على جليكوبروتينات غشاء البلازما لرؤية TNTs المشتقة من الغشاء، في 1x PBS لمدة 20 دقيقة في الظلام ودرجة حرارة الغرفة.
      ملاحظة: يجب تنفيذ الخطوات التالية في بيئة مظلمة.
    2. اغسل 3 مرات مع 1x PBS (30 ثانية لكل واحدة). حضن ب 140 ميكرولتر من الفالودين المترافق، مخفف بنسبة 1:250 (v/v) في 1٪ BSA لمدة 30 دقيقة في الظلام ودرجة حرارة الغرفة.
    3. اغسل 3 مرات مع 1x PBS (30 ثانية لكل واحدة). حضن محلول DAPI بسعة 140 ميكرولتر لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    4. اغسل 3 مرات باستخدام 1× PBS. أضف 2-3 قطرات من وسط التثبيت، واحتضن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وخزن لمدة لا تقل عن 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية في الظلام حتى التصوير.
  5. التصوير
    1. التقط الصور باستخدام مجهر كونفوكالي مقلوب بهدف 40x. اختر حقول عشوائية واجمع مكدسات Z (10-20 طبقة) من الأسفل إلى أعلى الخلايا. المعايير المحددة للمجهر المستخدمة في التقاط الصور مدرجة أدناه:
      مجهر الليزر الكونفوكلي: ZEISS LSM 900
      خطوط الليزر: المسار 1 (561 نانومتر، 4.0٪)، المسار 2 (488 نانومتر، 16.0٪)، المسار 3 (405 نانومتر، 60.0٪)
      كسب الكاشف: 525 فولت
      حجم خطوة Z: 20 مقطعا بصريا (العمق الكلي: 5.32 ميكرومتر)

2. الزراعة المشتركة بين الخلايا الجلدية والجلدية

  1. جهز الخلايا الكيراتينية والأرومات الليفية كما في الخطوات 1.2.1-1.2.5.
  2. زرع 10,000 خلايا كيراتينية و6,000 من الخلايا الليفية في كل حجرة بعمق 400 ميكرولتر من الوسط. بعد البذر، اهز الحجرة جيدا لتوزيع الخلايا بشكل متساو. حضانه لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  3. بعد حوالي 24 ساعة من الحضانة، راقب التقاء الخلية تحت المجهر. إذا وصل إلى ~80٪، تابع خطوات التثبيت التالية.
  4. تثبيت وتلوين الأغشية كما هو موضح في الخطوات 1.3-1.4.
  5. نفي الخلايا بنسبة 0.1٪ من ترايتون X-100، للسماح بوصول الأجسام المضادة إلى الأهداف داخل الخلية، لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم غسل 3 مرات مع 1x PBS.
    ملاحظة: يجب تحضير Triton X-100 بنسبة 0.1٪ طازجا قبل الاستخدام.
    تحذير: ترايتون X-100، الضار بالحياة المائية، يجب أيضا التخلص منه كنفايات كيميائية وعدم سكبه في المصرف.
  6. قم بحظر 140 ميكرولتر من 2٪ BSA في PBS لتقليل ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: يجب تحضير 2٪ من BSA طازجا قبل الاستخدام.
  7. حضن المضاد طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة المضادة للسيتوكيراتين 5 مخفف بنسبة 1:200 (v/v) في 2٪ BSA.
  8. اغسل 3 مرات مع 1x PBS، ثم حضن الجسم المضاد الثانوي المترافق-أليكسا فلور 594 لمدة ساعة إلى ساعتين في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
  9. اغسل 3 مرات باستخدام 1× PBS. نوى الصبغة باستخدام DAPI والصورة كما في الخطوات 1.4.5-1.5.2.

3. تحديد المكونات الهيكلية الخلوية في TNTs

  1. زراعة الخلايا
    1. زراعة الخلايا وثبيتها كما في الخطوات 1.2-1.3. قم بالنفخ ب Triton X-100 بنسبة 0.1٪ لمدة 3 دقائق على درجة حرارة الغرفة، ثم اغسل ب 1x PBS.
    2. قم بحجبهم بنسبة 2٪ من BSA لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. حضن التيوب طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة لأنابيب α.
    3. اغسلي 3 مرات مع 1x PBS وحضانة باستخدام الجسم المضاد الثانوي المكون من أليكسا فلور لمدة ساعة إلى ساعتين في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
      ملاحظة: يجب تنفيذ الخطوات التالية في بيئة مظلمة.
    4. اغسل ثلاث مرات مع 1x PBS. وسم F-actin مع فالويدين والصورة كما في الخطوات 1.4.3-1.5
  2. الزراعة المشتركة للخلايا
    1. جهز الثقافات المشتركة كما في الخطوات 2.1-2.2. أثبت المحلول المثبت 3 لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    2. استبدلها ب 140 ميكرولتر من 100 ملليمتر NH4Cl وحضن لمدة 10-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل ثلاث مرات مع 1x PBS.
    3. أولا، حدد خلايا البشرة من خلال إجراء النفاذية، والحجب الكهربائي، وتلوين المناعة بتقنية CK5 تماما كما هو موصوف في الخطوات 2.4-2.8.
    4. بعد ذلك، قم بإجراء تلطيخ المناعة بأنابيب α وفقا للخطوات 3.1.2-3.1.4.
    5. وأخيرا، صبغ F-actin بالفالويدين وتابع التصوير كما هو موضح في الخطوات 1.4.2-1.5.2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وباستخدام هذا البروتوكول الموحد، تم تحديد أنابيب النانو (TNTs) بنجاح في خلايا الجلد البشرية تحت ظروف الزراعة المفردة والزراعة المشتركة. للتحقق من خصوصية الأجسام المضادة، تم إجراء تلوين إيجابي وسلبي لجميع الأجسام المضادة قبل التحليلات التجريبية، كما هو موضح في الشكل التكميلي 1، الشكل التكميلي 2، الشكل التكميلي 3، والشكل التكميلي 4. تظهر الصور التمثيلية إمكانية إعادة الكشف عن TNTs كقنوات رفيعة تحتوي على أكتين تربط الخلايا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

خطوة حاسمة في هذا البروتوكول هي الحفاظ على TNTs أثناء التثبيت والتلوين، حيث أن هذه الهياكل هشة للغاية وسهلة الاضطراب. التعامل اللطيف أثناء التثبيت، والتوقيت المناسب، واستخدام المثبتات الطازجة ضرورية للحفاظ على سلامة مادة TNT. استخدام التصوير الكونفوكالي بنمط Z-stack لا يقل أهمية لتمييز TNTs المعلقة فوق الطبقة السفلية عن الفيلوبوديا أو النتوءات الملتصقة الأخرى، والتي قد تؤدي إلى سوء التفسير. تؤكد هذه الاعتبارات الحاجة إلى إجراءات موحدة لتحقيق رؤية قابلة لإعادة إنتاج TNT عبر المختبرات، خاص...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لا يوجد لدى المؤلفين مصالح مالية متنافسة ليعلنوا عنها.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا المشروع من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 82273554). يشكر المؤلفون مختبر هندسة المواد الحيوية وتجديد الأنسجة في مستشفى نينغبو لطب الأسنان على الدعم المستمر، ويشكرون أعضاء الفريق الحاليين والسابقين على مناقشاتهم القيمة. كما يشكر المؤلفون المعلم فنغ لي من مركز البحث والتجارب في كلية هانغتشو الطبية على المساعدة السخية والدعم القوي في تسهيل الوصول إلى المجهر الكونفوكلي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنبوب 15 ملكيرغنKG2611معقم، RNase/Dnase وخالي من البيروجينية
37 & درجة؛ حاضنة Cثيرمو ساينتفيك51032877توفر حاضنة ثاني أكسيد الكربون بزاوية 37 درجة بيئة مثالية في المختبر.
أكتين-تراكر ريد-رودامينبيوتايمC2207sمسبار الأكتين-تراكر ريد-رودامين هو فالويدين موسوم بصبغة فلورية رودامين، بأقصى طول موجي إثارة يبلغ 540 نانومتر وأقصى طول موجي انبعاث يبلغ 565 نانومتر.
أليكسا فلور مرافق جرثومة القمح (WGA)المجسات الجزيئيةW11261  أليكسا فلور 488 كونزوجيت
الأجسام المضادة للتوبولين المضادة ألفاأبكامab7291الجسم المضاد لألفا توبولين - التحكم في التحميل (ab7291) هو جسم مضاد وحيد النسيلة للفأر يكشف عن توبولين ألفا. مناسب للإنسان، الفأر، الجرذ.
الأجسام المضادة المضادة للسيتوكيراتين 5&nb;أبكامAB52635الجسم المضاد المضاد للسيتوكيراتين 5 - مؤشر الهيكل الخلوي (ab52635) هو جسم مضاد وحيد النسيلة للأرنب يكشف عن سيتوكيراتين 5. مناسب للإنسان، الفأر، الجرذ.
أكوا-بولي/ماونتالعلوم متعددة18606وسط تثبيت قابل للذوبان في الماء وغير متوهج مصمم لتركيب الأقسام من المحاليل المائية. مفيد لتقنيات الفلورية المناعية لأنه يعزز ويحافظ على الصبغات الفلورية.
عداد الخلايا الآليكونتستارIC1000عداد خلوي آلي للعد السريع والدقيق للخلايا
الطرد المركزي على سطح الطاولةبيوريدجTD5جهاز الطرد المركزي على سطح الطاولة لفصل العينات بسرعة وكفاءة في بيئات المختبر
خزانة السلامة البيولوجيةثيرمو ساينتفيك1379خزانة السلامة البيولوجية هي جهاز احتواء معقم يحمي المشغلين والعينات والبيئات من المخاطر البيولوجية عن طريق تصفية مسببات الأمراض المحمولة جوا ومنع التلوث المتبادل أثناء العمل الميكروبيولوجي.
مصل البقر الألبومين (BSA)يوبيبيوU5010-10gBSA هو غلوبولين في مصل البقر يحتوي على 583 بقايا حمض أميني، بوزن جزيئي 66.430 كيلو دالتون ونقطة متساوية كهربائية 4.7
طبق زراعة الخلايا (60X15 مم)إبندورف30701119زراعة الأنسجة المعالجة كانت معقمة، خالية من البيروجينات القابلة للكشف عن الريجينات والريناز، وRNase DNase، DNA.
غرفة سيلفيس - غرفة الانزلاق 8سيلفيسC8-1.5H-Nمصمم للتصوير عالي الدقة مثل المجهر الكونفوكلي.
حل التلوين DAPIبيوتايمC1006-10 ملمحلول التلوين DAPI مناسب للتلوين النووي لجميع الخلايا والأنسجة الشائعة.
ماعز مضاد للفأر IgG H& L (أليكسا فلور 405) أبكامab175660ماعز مضاد للفأر IgG H& L (أليكسا فلور 405) هو جسم مضاد ثانوي بأقصى طول موجي لامتصاص يبلغ 401 نانومتر وأقصى طول موجي انبعاث يبلغ 421 نانومتر.
ماعز مضاد للأرنب IgG H& L مرافق إلى أليكسا فلور 405أبكامab175652ماعز مضاد للأرنب IgG H& L (أليكسا فلور 405) هو جسم مضاد ثانوي بأقصى طول موجي لامتصاص يبلغ 401 نانومتر وأقصى طول موجي انبعاث يبلغ 421 نانومتر.
ماعز مضاد للأرنب IgG H& L مرافق إلى أليكسا فلور 594أبكامab150080IgG H& ضد الأرانب الماعز L (أليكسا فلور 594) هو جسم مضاد ثانوي بأقصى طول موجي لامتصاص يبلغ 590 نانومتر وأقصى طول موجي انبعاث يبلغ 617 نانومتر.
مجهر فلوري كونفوكالي مقلوبلايكاTCS SP8 Xيقدم مجهر الكونفوكال الليزر Leica SP8 X تصويرا عالي الدقة لا مثيل له مع قدرات متقدمة للكشف عن الفلورة وتحليل الخلايا الحية.
مجهر فلوري كونفوكالي مقلوبأندورBC43يعد Andor BC43 مجهره كونفوكلي مدمج وعالي السرعة يقدم تصويرا أسرع بعشر مرات من الأنظمة التقليدية التي تتيح التصوير ثنائي الأبعاد أو ثلاثي الأبعاد بنقرة واحدة
NH4Cl ميدكيم إكسبريسHY-Y1269 كلوريد الأمونيوم كمركب قطبي لتنظيم درجة الحموضة.
فالويدين مترافقات أوريغون جرينTM488تقنيات الحياةO7466اللون: أخضر. نطاق طول موجة الإثارة: 496/520.
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)فيفا سيل بايوساينسزC3582-0500وظيفته هي الحفاظ على درجة الحموضة في الوسط ضمن النطاق الفسيولوجي والحفاظ على توازن الضغط الأسموزي داخل وخارج الخلية.
ترايتون-إكس 100سولاربيولوجياT8200-100 ملإنه مادة فعالة متعددة الاستخدامات غير أيونية تستخدم لاستعادة مكونات الأغشية في ظروف تغيير الرطوبة الخفيفة.
حل تريبسين-إيدتاجيبكو25300054وبفضل قوته الهضمية، يستخدم التربسين على نطاق واسع في تفكك الخلايا، ومرور الزراعة الخلوية بشكل روتيني، وتفكك الأنسجة الأولية.
Y-27632ميدكيم إكسبريسHY-10071Y-27632 هو مثبط نشط عن طريق الفم ومنافس ATP لكل من ROCK-I وROCK-II

المراجع

  1. Austefjord, M. W., Gerdes, H. H., Wang, X. Tunneling nanotubes: Diversity in morphology and structure. Commun Integr Biol. 7 (1), e27934(2014).
  2. Liu, Z., Sun, Y., Qi, Z., Cao, L., Ding, S. Mitochondrial transfer/transplantation: an emerging therapeutic approach for multiple diseases. Cell Biosci. 12 (1), 66(2022).
  3. Yang, F., et al. Tunneling Nanotube-Mediated Mitochondrial Transfer Rescues Nucleus Pulposus Cells from Mitochondrial Dysfunction and Apoptosis. Oxid Med Cell Longev. 2022, 3613319(2022).
  4. Yang, C., et al. Mitochondria transfer from early stages of erythroblasts to their macrophage niche via tunnelling nanotubes. Br J Haematol. 193 (6), 1260-1274 (2021).
  5. Rustom, A., Saffrich, R., Markovic, I., Walther, P., Gerdes, H. H. Nanotubular highways for intercellular organelle transport. Science. 303 (5660), 1007-1010 (2004).
  6. Alarcon-Martinez, L., et al. Pericyte dysfunction and loss of interpericyte tunneling nanotubes promote neurovascular deficits in glaucoma. Proc Natl Acad Sci U S A. 119 (7), 2110329119(2022).
  7. Zhu, C., Shi, Y., You, J. Immune Cell Connection by Tunneling Nanotubes: The Impact of Intercellular Cross-Talk on the Immune Response and Its Therapeutic Applications. Mol Pharm. 18 (3), 772-786 (2021).
  8. Zhang, F., et al. TFAM-Mediated mitochondrial transfer of MSCs improved the permeability barrier in sepsis-associated acute lung injury. Apoptosis. 28 (7-8), 1048-1059 (2023).
  9. Jiang, D., et al. Mitochondrial transfer of mesenchymal stem cells effectively protects corneal epithelial cells from mitochondrial damage. Cell Death Dis. 7 (11), e2467(2016).
  10. Zheng, Y., et al. Tunneling nanotubes mediate KRas transport: Inducing tumor heterogeneity and altering cellular membrane mechanical properties. Acta Biomater. 185, 312-322 (2024).
  11. Dilsizoglu Senol, A., et al. α-Synuclein fibrils subvert lysosome structure and function for the propagation of protein misfolding between cells through tunneling nanotubes. PLoS Biol. 19 (7), e3001287(2021).
  12. Scheiblich, H., et al. Microglia rescue neurons from aggregate-induced neuronal dysfunction and death through tunneling nanotubes. Neuron. 112 (18), 3106-3125.e8 (2024).
  13. Solimando, A. G., et al. Tunneling nanotubes between bone marrow stromal cells support transmitophagy and resistance to apoptosis in myeloma. Blood Cancer J. 15 (1), 3(2025).
  14. Korenkova, O., et al. Tunneling nanotubes enable intercellular transfer in zebrafish embryos. Dev Cell. 60 (4), 524-534 (2025).
  15. Ma, L., et al. Dynamic three-dimensional culture enhances tunneling nanotubes-mediated mitochondrial transfer in mesenchymal stromal cells to accelerate wound healing. J Nanobiotechnol. 23 (1), 559(2025).
  16. Sahinbegovic, H., et al. Intercellular Mitochondrial Transfer in the Tumor Microenvironment. Cancers (Basel). 12 (7), 12071787(2020).
  17. Gurke, S., Barroso, J. F., Gerdes, H. H. The art of cellular communication: tunneling nanotubes bridge the divide. Histochem Cell Biol. 129 (5), 539-550 (2008).
  18. Kobielak, K., Pasolli, H. A., Alonso, L., Polak, L., Fuchs, E. Defining BMP functions in the hair follicle by conditional ablation of BMP receptor IA. J Cell Biol. 163 (3), 609-623 (2003).
  19. Nowak, J. A., Polak, L., Pasolli, H. A., Fuchs, E. Hair follicle stem cells are specified and function in early skin morphogenesis. Cell Stem Cell. 3 (1), 33-43 (2008).
  20. Woo, W. M., Zhen, H. H., Oro, A. E. Shh maintains dermal papilla identity and hair morphogenesis via a Noggin-Shh regulatory loop. Genes Dev. 26 (11), 1235-1246 (2012).
  21. Sáenz-de-Santa-María, I., Henderson, J. M., Pepe, A., Zurzolo, C. Identification and Characterization of Tunneling Nanotubes for Intercellular Trafficking. Curr Protoc. 3 (11), e939(2023).
  22. Liu, Z., et al. A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue. J Vis Exp. (138), e57784(2018).
  23. Dupont, M., Souriant, S., Lugo-Villarino, G., Maridonneau-Parini, I., Vérollet, C. Tunneling Nanotubes: Intimate Communication between Myeloid Cells. Front Immunol. 9, 43(2018).
  24. Gerdes, H. H., Rustom, A., Wang, X. Tunneling nanotubes, an emerging intercellular communication route in development. Mech Dev. 130 (6-8), 381-387 (2013).
  25. Sartori-Rupp, A., et al. Correlative cryo-electron microscopy reveals the structure of TNTs in neuronal cells. Nat Commun. 10 (1), 342(2019).
  26. Dagar, S., Pathak, D., Oza, H. V., Mylavarapu, S. V. S. Tunneling nanotubes and related structures: molecular mechanisms of formation and function. Biochem J. 478 (22), 3977-3998 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

agglutinin

مقالات ذات صلة