Method Article

تأثير طرق الاستخلاص المختلفة على ملفات النشاط البيولوجي في المختبر لترفيزيا كلافيري

DOI:

10.3791/69950

⸱

March 20th, 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biophysics, Department of Basic Medical Sciences, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering and Architecture, Kirsehir Ahi Evran University, 3Department of Physiology, Gulhane Faculty of Medicine, University of Health Sciences, 4Department of Medical Services and Techniques, Medical Laboratory Techniques Program, Vocational School of Health Services, Kirsehir Ahi Evran University, 5Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Kirsehir Ahi Evran University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان النشاط البيولوجي في المختبرات لمسخطات تيرفيزيا كلافيري يعتمد على طريقة الاستخراج البيوفيزيائي وقطبية المذيبات. أظهر مستخلص الماء من الاستخراج بمساعدة النقع (MAE) أقوى نشاط مضاد للأكسدة، بينما استخلاص سوكسهليت (SE) تسبب في سمية خلوية أكبر في خلايا SH-SY5Y. تظهر هذه النتائج فروقا واضحة تعتمد على الطريقة في النشاط البيولوجي داخل المختبر لمستخلص Terfezia claveryi.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تيرفيزيا كلافيري هو كمأ صحراوي صالح للأكل يستهلك تقليديا في المناطق الجافة. في السنوات الأخيرة، جذب اهتماما علميا متزايدا بسبب خصائصه المحتملة المضادة للأكسدة والمضادة للميكروبات والعلاج، مما يشير إلى تطبيقات محتملة في مجالات الغذاء والصحة. ومع ذلك، وعلى الرغم من تزايد الأدلة على إمكاناته البيولوجية، لم يتم بعد توضيح تأثير استراتيجيات الاستخلاص المختلفة على استعادة المركبات النشطة الحيوية والملف الصناعي للنشاط البيولوجي الصناعي لتيرفيزيا كلافيري في الأدبيات. في هذه الدراسة، تم تقييم النشاط البيولوجي في المختبر لمستخلصات Terfezia claveryi التي تم الحصول عليها باستخدام طرق استخراج مختلفة ومذيبات ذات قطبية متغيرة. تم تحديد عائد الاستخلاص، وتم تقييم المستخلصات التي تم الحصول عليها من حيث الأنشطة المضادة للأكسدة، ومضادات الميكروبات، والأغشية الحيوية، والسمية الخلوية باستخدام أنظمة اختبار معتمدة. تم قياس قدرة مضادات الأكسدة باستخدام اختبارات 2,2-ديفينيل-1-بيكريلهيدرازيل (DPPH)، 2,2′-أزينو-بيس (3-إيثيل بنزوثيازولين-6-سلفونيك حمض ABTS)، واختبارات مقاومة مضادات الأكسدة الحديدية (FRAP)، بينما تم دراسة التأثيرات السامة للخلايا في خلايا الورم العصبي SH-SY5Y. اختلفت نسبة الاستخلاص حسب الطريقة وقطبية المذيب، حيث تم الحصول على أعلى عائد من المستخلص المائي المعد بطريقة الاستخلاص بمساعدة الموجات فوق الصوتية (الإمارات) (18.40٪). تم تحديد أن نشاط مضادات الأكسدة أظهر فروقا كبيرة حسب طريقة الاستخلاص، وأن المستخلصات المائية التي تم الحصول عليها من طريقة الاستخلاص بمساعدة النقع (MAE) أظهرت مظهرا غنيا بالمركبات الفينولية إلى جانب أقوى قدرة على إزالة الجذور الجذرية. كشف تحليل LC-MS/MS لهذا المستخلص عن وجود تسعة مركبات فينولية؛ تم تحديد حمض الكوينيك وحمض الكلوروجينيك كمكونين سائدين. على النقيض من ذلك، أدت المستخلصات المشتقة من سوكسهليت إلى تأثيرات سامة خلوية أكبر في خلايا SH-SY5Y. أظهرت الاستجابات المضادة للميكروبات والأغشية الحيوية تباينا محدودا نسبيا بين طرق الاستخلاص، مما يشير إلى ضعف الاعتماد على استراتيجية الاستخراج لهذه الأنشطة. بشكل عام، تظهر هذه النتائج أن طريقة الاستخلاص الفيزيائي الحيوي واختيار المذيب هما محددان حاسمان لملف النشاط البيولوجي في المختبر لمستخلص تيرفيزيا كلافيري ، مع لوحظات واضحة على الأنشطة المضادة للأكسدة والسامة للخلايا.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعود استخدام أنواع الفطر المختلفة لتحسين الصحة والوقاية من الأمراض وعلاجها إلى العصورالقديمة 1,2,3. تصنف الفطريات الكبيرة عموما إلى مجموعتين: الفطريات الضخمة (الفطريات) والفطريات الخالصة (الكمأة)4. تعرف باسم الكمأ الصحراوي، Terfezia claveryi (T. claveryi) هي نوع من الكمأ المعروف عالميا والصالحا للأكل وينتمي إلى جنس Terfezia5. ينتشر T. claveryi عادة في المناطق الجافة وشبه الجافة حيث تنتشر أنواع Helianthemum 6,7,8,9,10,11. في السنوات الأخيرة، ازداد العبء العالمي للأمراض المزمنة مثل السرطان واضطرابات التنكس العصبي بشكل كبير، مما يبرز الحاجة الملحة إلى عوامل علاجية جديدة وآمنة وفعالة. وفقا لتقارير الصحة العالمية، لا يزال السرطان أحد الأسباب الرئيسية للوفاة على مستوى العالم، بينما تستمر الأمراض التنكسية العصبية في الزيادة مع تقدم عدد السكان في العمر. نظرا لهذه القضية الصحية العامة المتزايدة، أصبح البحث في المنتجات الطبيعية المستخرجة من الفطريات والنباتات الطبية كمصادر محتملة للمركبات النشطة الحيوية أولوية بحثية مهمة12.

بالتوازي، يشكل الظهور السريع لمقاومة مضادات الميكروبات تهديدا رئيسيا آخر للصحة العالمية. لقد قللت مقاومة الأدوية بشكل كبير من فعالية المضادات الحيوية التقليدية، مما خلق حاجة ملحة لاستراتيجيات بديلة لمضادات الميكروبات13. تجذب المستقلبات الثانوية المشتقة من مصادر طبيعية، وخاصة المركبات الفينولية ومتعددة الفينولات، اهتماما متزايدا بسبب تنوع آلياتها المضادة للميكروبات وقلة ميلها لتطوير المقاومة14. الإجهاد التأكسدي هو عامل ميكانيكي أساسي يكمن وراء العديد من الأمراض المزمنة، بما في ذلك السرطان، والاضطرابات التنكسية العصبية، والمتلازمات الأيضية. يمكن أن يؤدي الإنتاج المفرط لأنواع الأكسجين التفاعلي (ROS) في نهاية المطاف إلى تعطيل توازن الخلايا من خلال التسبب في تلف الحمض النووي، وتأكسد الديبيد، وأكسدة البروتينات. في هذا السياق، تعتبر مضادات الأكسدة الطبيعية التي يمكنها إزالة الجذور الحرة وتنظيم توازن الأكسدة والاختزاز عوامل واعدة للتخفيف من الضرر التأكسدي وتطور المرض15.

الكمأ غنية بالأحماض الدهنية غير المشبعة، والبروتينات، والمعادن، والفيتامينات، والأحماض الأمينية، والفينوليكات، والبوليفينولات، وهي مكونات ارتبطت بخصائص مضادة للميكروبات ومضادات أكسدة ومضادة للسرطان 16,17,18,19,20,21,22,23,24. تم ربط قدرتها المضادة للأكسدة على التخلص من الجذور الحرة بفعاليتها في إزالة الجذور الحرة25، 26، 27. من بين أنواع الكمأ، تعد T. claveryi ملحوظة بشكل خاص بسبب تركيبها الصالح للأكل، وقيمتها الاقتصادية الإقليمية، وغنائها المبلغ عنها في المركبات الفينولية23. على الرغم من الأدلة الناشئة حول استهلاكه التقليدي ونشاطه البيولوجي، لا تزال الدراسات الشاملة التي تحقق كيف تؤثر استراتيجيات الاستخراج على تركيبه الكيميائي وتأثيراته البيولوجية محدودة.

يتأثر استرداد المركبات النشطة بيولوجيا من الكمأ بشكل كبير بمعايير الاستخلاص، بما في ذلك تقنية الاستخراج المطبقة وقطبية المذيبات. تظهر طرق الاستخلاص الحيوي مثل الاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية (UAE)، والاستخراج بمساعدة النقع (MAE)، واستخلاص سوكسهليت (SE) فروقا كبيرة من حيث الطاقة المدخلة، وكفاءة الاستخلاص، والانتقائية للمركبات القطبية28. ومع ذلك، اعتمدت معظم الأبحاث على طريقة استخراج واحدة أو أنظمة مذيبات محدودة، والدراسات التي تعالج تأثيرات هذه الطرق على ملف النشاط البيولوجي في المختبرات ل T. claveryi محدودة. لذلك، تقارن هذه الدراسة بشكل منهجي بين عدة طرق استخراج بيوفيزيائية باستخدام مذيبات ذات قطبية متفاوتة لتقييم الأنشطة البيولوجية المختبرية لمستخلص T. claveryi . تم افتراض أن طريقة الاستخلاص وقطبية المذيب سيؤديان إلى اختلافات تعتمد على الطريقة في الأنشطة البيولوجية. وبناء عليه، فإن أهداف الدراسة هي: (1) مقارنة إنتاجية الاستخلاص بين الطرق والمذيبات المختلفة، (2) تقييم التفاوت المعتمد على الطرق في أنشطة مضادات الأكسدة والسمية للخلايا، و(3) فحص استجابات المضادات الحيوية والمضادات الحيوية للأغلفة الحيوية، مع الأخذ في الاعتبار حساسيتها لاستراتيجية الاستخلاص.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: يتم تلخيص سير العمل التجريبي العام لتحضير وتحليل مستخلصات T. claveryi بشكل تخطيطي في الشكل 1. جميع المواد المستخدمة في الدراسة موصوفة في جدول المواد.

1. توثيق المواد الفطرية وتحضيرها

  1. جمع ومعالجة المواد
    ملاحظة: تم جمع كمأ T. claveryi الطازج في مايو 2023 من الأراضي غير المزروعة (غير الزراعية) في السهوب والرمل، غير المزروعة (غير زراعية) في محافظة كيرشهير، وسط الأناضول، تركيا. تم إجراء أخذ العينات في ثلاثة مواقع مميزة: قرية ديديلي (38°54′15.8" شمالا، 34°06′40.3" شرقا؛ ~1050 متر فوق مستوى سطح البحر)، قرية بويوكايابا (38°53′45.1" شمالا، 34°19′37.5" شرقا؛ ~1020 متر فوق مستوى سطح البحر)، وقرية أكجاجيل (39°01′39.9" شمالا، 34°12′39.8" شرقا؛ ~1100 متر فوق مستوى سطح البحر). تتميز مواقع الجمع بمناخ قاري شبه جاف، مع شتاء بارد، وصيف حار وجاف، ومتوسط هطول أمطار سنوي يتراوح بين 380–420 ملم. تم جمع جميع العينات خلال موسم الإثمار الطبيعي من مناطق لم يكن فيها نشاط زراعي حديثا لتقليل التلوث البشري المحتمل.
    1. اختر الكمأ النظيف والسليم، وتقشرها، واغسل ثلاث مرات بالماء المقطر.
    2. قم بتقطيع العينات إلى قطع صغيرة وجففها في الظل حتى يتم الوصول إلى وزن ثابت (حوالي 20 يوما).
    3. قم بسحق المادة المجففة باستخدام مطحنة ميكانيكية ومررها عبر منخل بحجم 328 ميكرون (50 شبكة).
    4. تخزين العينات المعالجة في أكياس زيبلوك في بيئة باردة وجافة ومظلمة في درجة حرارة الغرفة حتى إجراء المزيد من التحليلات.
  2. التعرف الجزيئي على T. claveryi
    1. عزل الحمض النووي الجيني من عينات T. claveryi المجففة للتعرف على الجزيئات.
    2. قيم كمية الحمض النووي ونقاء الحمض النووي مطيافا فوتومتريا.
    3. إجراء تفاعل بوليميراز متسلسل لتحديد الأنواع (PCR) عن طريق تضخيم منطقة الفاصل المكتوب الداخلي (ITS) باستخدام بادئات عالمية ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′) وITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′).
    4. حل منتجات تضخيم PCR عن طريق الرحلان الكهربائي على جل أغاروز بنسبة 1.5٪ تم تحضيره في مخزن TAE 1x وتم رؤيته تحت إضاءة UV بعد تلوين بروميد الإيثيديوم.
    5. قم بتنقية منتجات PCR أحادية النطاق وفقا لتعليمات الشركة المصنعة29. المضخمات النقية الموضوعة لتسلسل سانجر.
    6. قم بتجميع قراءات التسلسل الأمامي والعكسي إلى تسلسلات توافق باستخدام خوارزمية برنامج التجميع الكونتيجي (CAP).
    7. تم تأكيد هوية النوع من خلال مقارنة تسلسل ITS المتوافقة مع تسلسلات المراجع المتاحة في قواعد البيانات العامة.
      ملاحظة: تم الاحتفاظ بعينة قسيمة من T. claveryi في مجموعة المختبر للرجوع إليها مستقبلا. تم تأكيد تحديد الأنواع من خلال التحليل الجزيئي القائم على ITS (الملف التكميلي 1).

2. تحضير واستخراج المواد الفطرية

  1. تحضير مستخلصات T. Claveryi
    1. يزن حوالي 30 جراما من مسحوق T. claveryi المجفف.
    2. أضف 150 مل من المذيب (الميثانول، الأسيتون، n-هكسان، أسيتات الإيثيلي، أو الماء المقطر) للحفاظ على نسبة ثابتة بين الصلب والسائل عبر جميع طرق الاستخلاص.
    3. استخدم مذيبات تحليلية لجميع إجراءات الاستخلاص.
    4. قم بترشيح كل مستخلص تحت ضغط منخفض باستخدام ورق مرشح نوعي.
    5. تركيز المرشيحات تحت ضغط منخفض عند 30–45 درجة مئوية باستخدام مبخر دوار.
    6. تجفيف المستخلصات المركزة بالتجميد (الليوفيلية) حتى يتم إزالة المذيب بالكامل.
    7. تخزين المستخلصات الخام المجففة عند −20 درجة مئوية حتى إجراء تحليلات إضافية.
      ملاحظة: تطبيق خطوات معالجة ما بعد الاستخراج متطابقة على جميع العينات لضمان الاتساق المنهجي وقابلية المقارنة.
  2. طرق الاستخراج البيوفيزيائي
    1. الاستخراج بمساعدة النقع (MAE)
      1. ضع عينة T . claveryi المطحونة في حاوية استخلاص مغلقة.
      2. أضف المذيب المختار مع الحفاظ على نسبة ثابتة من المذيب إلى الصلب.
      3. حضن الخليط في درجة حرارة الغرفة تحت ظروف مظلمة لمدة 72 ساعة.
      4. حافظ على إغلاق الحاويات لمنع تبخر المذيبات.
      5. لا تطبق التحريك الخارجي خلال فترة النقع.
      6. دع الخليط يستقر في نهاية فترة الاستخلاص.
      7. قم بتصفية المستخرج قبل المعالجة الإضافية.
    2. استخراج سوكسليت (SE)
      ملاحظة: تأكد من دوران مياه المكثف بشكل صحيح وتجنب التسخين الجاف أثناء الارتجاع.
      1. ضع العينة المطحونة في كشتبان استخراج السليلوز.
      2. ضع الكشتنج داخل غرفة استخراج سوكسهليت المتصلة بقارورة ذات قاع مستدير.
      3. أضف المذيب المختار إلى القارورة مع الحفاظ على نسبة المذيب إلى الصلب ثابتة.
      4. سخن المذيب حتى يمر بالارتجاع باستخدام وشاح تسخين يتم التحكم فيه حراريا.
      5. حافظ على الاستخراج المستمر لمدة 24 ساعة.
      6. حافظ على درجة حرارة الاستخراج عند نقطة غليان كل مذيب (n-هيكسان: 68.7 °م؛ أسيتات الإيثيلي: 77.1 °م؛ ميثانول: 64.7 °م؛ أسيتون: 56 °م؛ ماء مقطر: 100 °م).
    3. الاستخلاص بمساعدة الموجات فوق الصوتية (الإمارات العربية المتحدة)
      ملاحظة: راقب درجة الحرارة باستمرار لمنع ارتفاع درجة الحرارة أثناء السونيكشن.
      1. ضع عينة T . claveryi المطحونة في وعاء الاستخلاص.
      2. أضف المذيب المختار مع الحفاظ على نسبة ثابتة من المذيب إلى الصلب.
      3. قم بسونيك الخليط بتردد ثابت 35 كيلوهرتز وقوة إخراج 520 واط لمدة 25 دقيقة.
      4. حافظ على درجة حرارة الاستخراج عند حوالي 30 درجة مئوية.
      5. أضف الثلج بفترات كل 5 دقائق للحفاظ على درجة الحرارة بين 25–28 درجة مئوية أثناء السونيكية.
  3. كفاءة الاستخراج
    1. زن المادة الفطرية المجففة (Wp) قبل الاستخلاص.
    2. زن مستخلص الخام المجفف (Wext) بعد إزالة المذيب بالكامل.
    3. احسب كفاءة الاستخراج باستخدام المعادلة (1).
      figure-protocol-1(1)
    4. أعد إذابة كل مستخلص خام مجفف في مذيبه الخاص لتحضير محلول مخزوني بتركيز موحد 10 ملغ/مل.
    5. حضر محاليل المخزون حديثا قبل كل تجربة نشاط حيوي في المختبر .
      ملاحظة: توحيد جميع تركيزات المستخلصات لضمان جرعات مماثلة عبر اختبارات النشاط البيولوجي اللاحقة.

3. تحديد نشاط مضادات الأكسدة

  1. قم بإجراء تحليل نشاط مضادات الأكسدة باستخدام اختبارات DPPH وABTS وFRAP.
  2. حضر خمسة تركيزات مختلفة من المستخلصات تتراوح بين 0.25 إلى 1.0 ملغ/مل من محاليل مخزون طازجة المحضرة.
  3. إجراء جميع القياسات بثلاث نسخ لضمان قابلية التكرار.
  4. سجل قيم الامتصاص مطيافا فوتومتريا باستخدام قارئ الميكروبليت (microplate).
    ملاحظة: قم بإجراء جميع الاختبارات وفقا لبروتوكولات الأدبيات المعتمدة مع تعديلات طفيفة.
  5. نشاط البحث الجذري في DPPH
    ملاحظة: تم تقييم نشاط التنقاء الجذري لمستخلصات T. claveryi في DPPH وفقا للطريقة الموصوفة في الأدبيات، مع تعديلات طفيفة30. حماية محلول DPPH وخلطات التفاعل من التعرض للضوء.
    1. حضر محلول DPPH بنسبة 70٪ ميثانول.
    2. اضبط محلول DPPH إلى امتصاص 1.00 ± 0.02 عند 517 نانومتر.
    3. مقطرة 50 ميكرولتر من المستخلص بتركيزات مختلفة داخل بئر ميكرولوح.
    4. أضف 250 ميكرولتر من محلول DPPH إلى كل بئر.
    5. حضن خليط التفاعل في الظلام ودرجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
    6. قس الامتصاص عند 517 نانومتر باستخدام مطياف الميكرولوتين.
    7. استخدم الميثانول كمادة تحكم سلبية وحمض الأسكوربيك كوسيلة تحكم إيجابية.
    8. بناء منحنيات الجرعة-الاستجابة وحساب قيم IC₅₀ لقياس نشاط البحث الجذري.
  6. نشاط البحث الجذري في كاتيونات ABTS
    ملاحظة: قم بإجراء اختبار الجمع الجذري ABTS وفقا للطريقة الموضحة في الأدبيات، مع تعديلات طفيفة31. جهز محلول ABTS⁺ الجذري قبل الاستخدام ب 16 ساعة على الأقل وحمه من الضوء.
    1. توليد حل جذري ABTS عن طريق حضن خليط التفاعل في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 16 ساعة.
    2. قم بتخفيف 1 مل من محلول ABTS مع 80 مل من الإيثانول قبل التحليل.
    3. اضبط امتصاص محلول ABTS المخفف إلى 0.80 ± 0.02 عند 734 نانومتر.
    4. مقطرة 50 ميكرولتر من المستخلص بتركيزات مختلفة داخل بئر ميكرولوح.
    5. أضف 250 ميكرولتر من محلول ABTS إلى كل بئر.
    6. حضن الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
    7. قياس الامتصاص عند 734 نانومتر باستخدام مطياف الميكرولوح الفوتوفوتوميتر.
    8. قم ببناء منحنيات الجرعة-الاستجابة وحساب قيم IC₅₀.
  7. اختبار تقليل مضادات الأكسدة الحديدية (FRAP)
    ملاحظة: قم بإجراء اختبار FRAP وفقا للطريقة المقترحة في الأدبيات، مع تعديلات طفيفة32. جهز مادة FRAP جديدة قبل الاستخدام واحمي خليط التفاعل من الضوء.
    1. جهز مادة FRAP وفقا للبروتوكول المشار إليه.
    2. يتم استخراج 20 ميكرولتر من المستخلص بتركيزات مختلفة في بئر ميكرولوح (ميكرولوحة).
    3. أضف 280 ميكرولتر من مادة FRAP الطازجة.
    4. حضن خليط التفاعل في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 45 دقيقة.
    5. قياس الامتصاص عند 593 نانومتر باستخدام مطياف الميكرولوح الفوتوفوتوميتر.
    6. توليد منحنى معايرة باستخدام Trolox كمعيار.
    7. تعبر عن قدرة مضادات الأكسدة على شكل معادل ترولوكس (TE) لكل غرام من المستخلص.

4. تحليل المحتوى الفينولي الكلي (TPC)

ملاحظة: تحديد المحتوى الفينولي الكلي (TPC) في مستخلصات T. claveryi باستخدام طريقة فولين–تشوكالتيو كما هو موضح في الأدبيات، مع تعديلات طفيفة33. حماية خليط التفاعل من الضوء أثناء الحضانة. حضر محلول كربونات الصوديوم طازجا قبل الاستخدام.

  1. حضر المحاليل المسخرة بتركيز 1 ملغ/مل من محاليل مخزون طازجة المحضرة.
  2. قم بعمل 25 ميكرولتر من المستخلص في بئر ميكرولوحة، ثم أضف 75 ميكرولتر من الماء المقطر، ثم أضف 25 ميكرولتر من كاشف فولين–تشوكالتيو.
  3. حضن الخليط في درجة حرارة الغرفة لمدة 6 دقائق.
  4. أضف 100 ميكرولتر من محلول كربونات الصوديوم بنسبة 7٪ (مع الفولت) إلى كل بئر.
  5. حضن خليط التفاعل في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 90 دقيقة.
  6. قس الامتصاص عند 665 نانومتر باستخدام مطياف الميكرولوحي.
  7. أعد منحنى معايرة باستخدام حمض الجاليك كمعيار وحساب المحتوى الفينولي الكلي، معبرا عن النتائج كمكافئ لحمض الجاليك (GAE) لكل مل من المستخلص.

5. التحليل الكيميائي النباتي باستخدام LC-MS/MS

ملاحظة: قم بإجراء تحليل LC-MS/MS وفقا لطرق كروماتوغرافية منشورة سابقا مع تعديلات طفيفة34. قم بترشيح جميع العينات والأطوار المتحركة عبر مرشحات غشائية بحجم 0.22 ميكرومتر وإزالة الغازات من الأطوار المتحركة قبل التحليل.

  1. اختر المستخلصات التي تحتوي على أعلى محتوى فينولي إجمالي للتحليل الكمي الكيميائي النباتي.
  2. قم بإجراء فصل كروماتوغرافي باستخدام عمود C18 معكوس الطور يحافظ عليه عند 30°C.
  3. جهز الطور المتحرك المكون من (أ) 0.1٪ حمض الفورميك في ماء منزوع الأيونات و(ب) 0.1٪ حمض الفورميك في الأسيتونيتريل، اضبط معدل التدفق إلى 0.4 مل/دقيقة، ضبط حجم الحقن إلى 5 ميكرولتر، وضبط زمن التشغيل الكلي إلى 17 دقيقة.
  4. إجراء الكشف الطيفي الكتلي تحت ظروف التأين بالرش الكهربائي (ESI) باستخدام النيتروجين كغاز للتجفيف والغمد والاستنباخ.
  5. اضبط درجة حرارة غاز التجفيف على 350 °م مع معدل تدفق 12 لتر/دقيقة، وضبط درجة حرارة غاز الغلاف إلى 250 °م مع معدل تدفق 5 لتر/دقيقة، وضبط ضغط جهاز التنشاق إلى 55 رطل/بوصة مربعة.
  6. تحضير منحنيات معايرة خارجية لكل معيار فينولي وقياس المحللات باستخدام منحنيات المعايرة المقابلة.

6. اختبار النشاط المضاد للميكروبات

ملاحظة: قيم النشاط المضاد للبكتيريا باستخدام طريقة انتشار الآجار وفقا لبروتوكولات الميكروبيولوجيا المعتمدة. قم بإجراء جميع الإجراءات الميكروبيولوجية تحت ظروف معقمة في خزانة أمان حيوي. قم بتعقيم جميع المواد قبل وبعد الاستخدام.

  1. اختر النوع التالي من السلالات لإجراء اختبار مضادات الميكروبات: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853، Escherichia coli ATCC 25922، Staphylococcus aureus ATCC 25923، Enterococcus faecalis ATCC 29212، Bacillus cereus ATCC 14579، Staphylococcus epidermidis ATCC 12228، Listeria monocytogenes ATCC 19115، Acinetobacter baumannii ATCC 17978، Shigella dysenteriae ATCC 13313، Klebsiella pneumoniae ATCC 13883، و Enterobacter aerogenes ATCC 13048.
  2. قم بتلقيح كل سلالة بكتيرية في مرق الصويا التريبتون (TSB) وحضانه عند درجة حرارة النمو المثلى حتى تصل إلى كثافة بصرية تبلغ OD₆₀₀ = 0.7.
  3. انشر المزارع البكتيرية بشكل موحد على ألواح التريبتون الصويا (TSA) باستخدام مسحة معقمة.
  4. يدخل الأجار بشكل معقم باستخدام آلة حفر فلين معقمة.
  5. أضف 100 ميكرولتر من كل مستخلص (100 ميكروغرام/مل) إلى الآبار المقابلة.
  6. حضن الصفائح عند 37 درجة مئوية لمدة 18 ساعة.
  7. قس أقطار مناطق التثبيط المحيطة بكل بئر لتقييم النشاط المضاد للميكروبات.
  8. قم بإجراء جميع التجارب بثلاث نسخ والتعبير عن النتائج كقيم متوسطة.

7. تثبيط الأغشية الحيوية

ملاحظة: قيم نشاط الأغشية الحيوية باستخدام اختبار صبغ البنفسجي البلوري ضد السلالات البكتيرية المرجعية. قم بجميع الإجراءات في ظروف معقمة وتجنب إزعاج الأغشية الحيوية الملتصقة أثناء خطوات الغسيل.

  1. اختر الإشريكية القولونية ATCC 25922 وPseudomonas aeruginosa ATCC 27853 كسلالات مرجعية وزراعتهما في TSB عند 37 درجة مئوية حتى الوصول إلى مرحلة النمو اللوغاريتمي.
  2. اضبط المعلقات البكتيرية إلى كثافة بصرية تبلغ OD₆₀₀ = 0.132.
  3. قم بتوصيل 100 ميكرولتر من محاليل المستخلص (0.625–10 ملغ/مل) إلى ألواح ميكروتيتر بوليسترين معقمة بسعة 96 بئئر، وأضف 100 ميكرولتر من التعليق البكتيري إلى كل بئر، وامزج بلطف.
  4. حضن الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. استخدم الآبار التي تحتوي على TSB فقط كبوابات فارغة، والآبار التي تحتوي على تعليق بكتيريا بدون مستخلص كأدوات تحكم.
  5. أزل الخلايا غير الملتصقة بعناية، واغسل الآبار مرتين بالماء المقطر، ودع الألواح تجف في الهواء.
  6. أضف 200 ميكرولتر من محلول البنفسجي البلوري 0.4٪ (بضغط/ضغط) إلى كل بئر وحضنه لمدة 30 دقيقة.
  7. أزل البقع الزائدة، اشطف الآبار مرتين بالماء المقطر، واترك الصحون تجف تماما.
  8. أضف الإيثانول لإذابة الصبغة المرتبطة وقياس الامتصاص عند 595 نانومتر باستخدام قارئ ميكرولوبلايت.
  9. احسب نشاط الأغشية المضادة الحيوية باستخدام المعادلة (2).
    figure-protocol-2(2)

8. تحليل زراعة الخلايا والنشاط السام الخلوي (اختبار MTT)

ملاحظة: قيم التأثيرات السامة للخلايا باستخدام اختبار MTT وفقا لبروتوكولات بقاء الخلايا القياسية. قم بإجراء جميع الإجراءات تحت ظروف معقمة في خزانة السلامة البيولوجية ووسائط ومواد تدفئة مسبقة ومواد تدفئة إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.

  1. احصل على خط خلايا الورم العصبي البشري SH-SY5Y من مستودع خلايا معتمد وزرع الخلايا في وسط Eagle المعدل (DMEM) من Dulbecco مع 10٪ مصل أبقار جنيني (FBS)، 1٪ بنسلين/ستربتومايسين، و1٪ L-جلوتامين في قوارير زراعة بحجم 25 سم2 .
  2. حافظ على الزراعة عند 37 درجة مئوية في جو رطب يحتوي على 5٪CO2 ونمو الخلايا إلى حوالي 80٪ من التقاء البعض.
  3. افصل الخلايا عن طريق التريبسين، ثم ازرعها في صفائح بسعة 96 بئر بكثافة 2 × 10إلى 4 خلايا في كل بئر، ثم احتضن الخلايا لمدة 24 ساعة للسماح بالالتصاق.
  4. عالج الخلايا بمستخلصات T. claveryi بتركيزات 150، 300، 600، 1200، و2000 ميكروغرام/مل وحضن الخلايا لمدة 24 ساعة.
  5. أزل وسط الزراعة، وأضف 100 ميكرولتر من الوسط الطازج الذي يحتوي على 10 ميكرولتر من محلول MTT إلى كل بئر، وحضن لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.
  6. استنشق الوسط، وذوبان بلورات الفورمازان بإضافة 100 ميكرولتر من كبريتات ثنائي ميثيل (DMSO) إلى كل بئر، وقياس الامتصاص عند 570 نانومتر باستخدام مطياف الميكرولوح الفوتوفوتومي.
  7. قم بإجراء جميع التجارب على ثلاث نسخ.

figure-protocol-3
الشكل 1: نظرة عامة تخطيطية لسير العمل التجريبي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

9. التحليل الإحصائي

  1. إجراء تحليلات إحصائية باستخدام برامج إحصائية مناسبة وقارن مجموعات الضابط والعلاج باستخدام اختبار t للطالب أو تحليل التباين ثنائي الاتجاه (ANOVA)، حسب الحاجة.
  2. عبر عن جميع البيانات كمتوسط ± خطأ معياري للمتوسط (SEM).
  3. حدد الدلالة الإحصائية عند p < 0.05.
  4. أشر إلى الدلالة الإحصائية في الأشكال باستخدام النجوم كما يلي: **** ل p < 0.0001، *** ل p < 0.001، ** ل p < 0.01، و * ل p < 0.05، واستخدم "ns" للدلالة على عدم الدلالة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعرف الجزيئي على T. claveryi
تم إجراء تضخيم PCR لمنطقة ITS باستخدام البادئات الشاملة ITS1 وITS4 للتعرف الجزيئي على T. claveryi. تم تحليل التسلسلات الناتجة ومقارنتها مع التسلسلات المرجعية في قاعدة بيانات NCBI باستخدام خوارزمية BLAST، مما أتاح تحديد النوع بشكل نهائي (الملف التكميلي 1).

كفاءة الاستخراج
اختلفت كفاءة الاستخلاص حسب طريقة الاستخراج وقطبية المذيب (الجدول 1). ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تؤسس هذه الدراسة منصة مقارنة وموحدة للاستخلاص والنشاط البيولوجي ل T. claveryi، مما يثبت أن استراتيجية الاستخلاص هي عامل حاسم لكل من التركيب الكيميائي والوظيفة البيولوجية. تكمن القوة المنهجية الأساسية لهذا البروتوكول في التحكم الصارم في معايير الاستخلاص، خصوصا النسبة الثابتة بين الصلب والسائل، وحجم المذيب الموحد، ومعالجة ما بعد الاستخلاص المتطابقة، وتحضير محلول المخزون بشكل موحد قبل الاختبارات الحيوية. تمثل هذه الخطوات نقاط تحكم حاسمة ضمن سير العمل. يمكن أن يؤدي تفاوت حجم المذيبا...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة. جميع البيانات الداعمة لنتائج هذه الدراسة متاحة ضمن المخطوطة الرئيسية وملفات المعلومات التكميلية. تتوفر مجموعات البيانات التي تم إنشاؤها وتحليلها خلال الدراسة الحالية من المؤلف المقابل عند الطلب المعقول.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أعلن المؤلفون أن هذه الدراسة لم تتلق أي دعم مالي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
صفائح البوليسترين الميكروتيتر ذات 96 بئرنيست ساينتيفك701001مزرعة الخلايا / ألواح الفحص
ABTS (2,2'-أزينو-بيس(3-إيثيل بنزوثيازولين-6-حمض السلفونيك))سيغما-ألدرتشA3219اختبار التقطيع الجذري كاتيون
الأسيتون (درجة تحليلية)سيغما-ألدرتش179124مذيب الاستخلاص
الأسيتونيتريل (درجة LC-MS)سيغما-ألدرتش34851الطور العضوي المتنقل
Acinetobacter baumanniiATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 17978
ثلاثي رباعي LC-MS/MS مع نظام UPLC 1290 Infinity UPLCتقنيات أجيلينت6460التحليل الكمي
عمود تحليلي (C18، 4.6 &0; 100 مم، 3.5 & mu; m)تقنيات أجيلينت (زورباكس)959990-902عمود الطور المعكوس
معايير مضادات الأكسدة (حمض الأسكوربيك / ترولوكس)سيغما-ألدرتشA7506 / 238813التحكم الإيجابي
محللات الحمض النووي Applied Biosystems 3730xlأنظمة حيوية تطبيقية  محللات الحمض النووي 3730xlنظام تسلسل الحمض النووي
الأنظمة الحيوية التطبيقية والتجارة؛ BigDye & trade; مجموعة تسلسل دورات تيرميناتور v3.1أنظمة حيوية تطبيقية  4337455مجموعة تسلسل سانجر
باسيلوس سيريوسATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 14579
تحليل المعلوماتية الحيوية، برنامج BioEdit، الخوارزمية المستخدمة: تجميع CAP contigإيبس بيوساينسزNAبرنامج تجميع التسلسل
كشتبان استخراج السليلوزفيشربراند وتجارة؛  11724043يستخدم في استخراج سوكسليت
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)ميرك102952المذيب
مجموعة عزل الحمض النووي (Plant& مجموعة عزل الحمض النووي للفطريات (بولندا)يورك جينماتريكسE3595عزل الحمض النووي  
DPPH (2,2-ديفينيل-1-بيكريلهيدرازيل)سيغما-ألدرتشD9132اختبار البحث الجذري
دولبيكو ميديف إيجلالجدي، DMEM-HA
جينات الحمض النووي المعويATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 13048
المكورات المعوية الفضليةATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 29212
الإشريكية القولونيةATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 25922
الإيثانولميرك100983المذيب
أسيتات الإيثيلميرك109623مذيب الاستخلاص
مصل الأبقار الجنيني (FBS)كابريكورن ساينتيفكFBS-16A
مجموعة تسلسل دورات BigDyeTerminator v3.1ثيرموفيشر4337455مجموعة التسلسل
كاشف فولين-تشوكالتيوسيغما-ألدريتش 47641المحتوى الفينولي الكلي
حمض الفورميكسيغما-ألدريتش 33015إضافة الطور المتنقل
حمض الغاليككارلو إربا406335منحنى المعايرة
جين ماتريكس بلانت & مجموعة عزل الحمض النووي للفطرياتEurX E3595مجموعة عزل الحمض النووي
منشور GraphPad (الإصدار 9)تصور البيانات والتحليل الإحصائيلا يوجدالتحليل الإحصائي
غطاء التدفئةكهروحرارية EME30500يستخدم للحفاظ على ارتجاع المذيب
هاي بريب والتجارة؛ نظام تنظيف PCRماجبيوAC-60005
آيسدرجة مختبرية—التحكم في درجة الحرارة خلال الإمارات
كليبسييلا الرئةATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 13883
إل-جلوتامينكابريكورن ساينتيفكألمانيا
الليستيريا مونوسيتوجينسATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 19115
الليوفيلايزرساينتزلا يوجدتجميد المستخلصات
خرزة مغناطيسية و-ndash; نظام تنظيف PCR القائم على الأنظمةماجبيوAC-60005PCR
الميثانولميرك106009مذيب الاستخلاص
n-Hexaneميرك103701مذيب الاستخلاص
البنسلين/الستربتوميسينكابريكورن ساينتيفكألمانيا
سودوموناس إيروجينوزاATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 27853
ورق الفلتر (رقم 541)سيتيفا1541-125 Vفي عملية الترشيح بالاستخراج
المبخر الدواربوتشي R10011100V101إزالة المذيبات
الزحار الشيغيلاATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 13313
كربونات الصوديومميرك106392التحليل الفينولي الكلي
قارئ اللوحة الدقيقة النانو من SPECTROstar  بي إم جي لاب تكقياسات الامتصاص
المكورات العنقودية الذهبيةATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 25923
المكورات العنقودية الأديرميديسATCCماناساس، فيرجينيا، الولايات المتحدة الأمريكيةATCC 12228
برنامج التحليل الإحصائي (SPSS، v23)تحليل البياناتNA
ثيرمو ساينتيفك نانودروب 2000 ثيرمو فيشر العلميND-2000
تريبتون صويا أغار (TSA)ميركألمانيا—
مرق الصويا التريبتون (TSB)ميركألمانيا—
التوحيد بالموجات فوق الصوتيةساينتزSCIENTZ-650Lالاستخلاص بمساعدة الموجات فوق الصوتية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P. Current findings, future trends, and unsolved problems in studies of medicinal mushrooms. Appl. Microbiol. Biotechnol. 89 (5), 1323-1332 (2011).
  3. Badalyan, S. Medicinal aspects of edible ectomycorrhizal mushrooms. Edible Ectomycorrhizal Mushrooms: Current Knowledge and Future Prospects. Zambonelli, A., Bonito, G. M. , Springer. Berlin, Heidelberg. 317-334 (2012).
  4. El Enshasy, H. A., Hatti-Kaul, R. Mushroom immunomodulators: unique molecules with unlimited applications. Trends Biotechnol. 31 (12), 668-677 (2013).
  5. Morte, A., Kagan-Zur, V., Navarro-Ródenas, A., Sitrit, Y. Cultivation of desert truffles—A crop suitable for arid and semi-arid zones. Agronomy. 11 (8), 1462(2021).
  6. Gutiérrez, A., Morte, A., Honrubia, M. Morphological characterization of the mycorrhiza formed by Helianthemum almeriense Pau with Terfezia claveryi Chatin and Picoa lefebvrei (Pat.) Maire. Mycorrhiza. 13 (6), 299-307 (2003).
  7. Loizides, M., Hobart, C., Konstandinides, G., Yiangou, Y. Desert truffles: the mysterious jewels of antiquity. Field Mycology. 13 (1), 17-21 (2012).
  8. Atila, F., Kazankaya, A. Terfezia species natural distributed in Türkiye and their ecologies. Mantar Dergisi. 13 (3), 119-130 (2022).
  9. Türkoğlu, A., Castellano, M., Trappe, J., Yaratanakul Güngör, M. Turkish truffles I: 18 new records for Turkey. Turkish J. Bot. 39, 359-376 (2015).
  10. Doğan, H., Kurt, F. New macrofungi records from Turkey and macrofungal diversity of Pozantı-Adana. Turkish J. Bot. 40, 209-217 (2016).
  11. İnci, Ş, Kırbağ, S. Nutritional content, antioxidant and antimicrobial activity of Terfezia claveryi Chatin. Artvin Çoruh Univ. J. For. Fac. 19 (2), 138-143 (2018).
  12. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  13. Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P T. 40 (4), 277-283 (2015).
  14. Cushnie, T. P. T., Lamb, A. J. Antimicrobial activity of flavonoids. Int. J. Antimicrob. Agents. 26 (5), 343-356 (2005).
  15. Valko, M., et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int. J. Biochem. Cell Biol. 39 (1), 44-84 (2007).
  16. Morte, A., Honrubia, M., Gutiérrez, A. Biotechnology and cultivation of desert truffles. Mycorrhiza: State of the Art. Varma, A. , 467-483 (2008).
  17. Corrêa, R. C. G., et al. Biotechnological, nutritional and therapeutic uses of Pleurotus spp. related with its chemical composition: a review. Trends Food Sci Technol. 50, 103-117 (2016).
  18. Ma, G., et al. A critical review on the health promoting effects of mushrooms nutraceuticals. Food Sci. Hum. Wellness. 7 (2), 125-133 (2018).
  19. Reis, F. S., et al. Functional foods based on extracts or compounds derived from mushrooms. Trends Food Sci. Technol. 66, 48-62 (2017).
  20. Mandeel, Q. A., Al-Laith, A. A. Ethnomycological aspects of the desert truffle among native Bahraini and non-Bahraini peoples. J. Ethnopharmacol. 110 (1), 118-129 (2007).
  21. Patel, S. Food, health and agricultural importance of truffles: a review. Curr. Trends Biotechnol. Pharm. 6, 15-27 (2012).
  22. Janakat, S., Nassar, M. Hepatoprotective activity of desert truffle (Terfezia claveryi) compared with Nigella sativa in rats. Pak. J. Nutr. 9, 52-56 (2010).
  23. Al-Laith, A. A. A. Antioxidant components and activities of desert truffle (Tirmania nivea). J. Food Compos. Anal. 23 (1), 15-22 (2010).
  24. Shavit, E., Shavit, E. The medicinal value of desert truffles. Desert Truffles. Kagan-Zur, V., Roth-Bejerano, N., Sitrit, Y., Morte, A. 38, 323-340 (2014).
  25. Patel, S., et al. Potential health benefits of natural products derived from truffles. Trends Food Sci. Technol. 70, 1-8 (2017).
  26. Beara, I. N., et al. Phenolic profile, antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities of truffles. Food Chem. 165, 460-466 (2014).
  27. Dahham, S. S., et al. Antioxidant, anticancer and apoptosis properties of Terfezia claveryi. Saudi J. Biol. Sci. 25 (8), 1524-1534 (2018).
  28. Azmir, J., et al. Techniques for extraction of bioactive compounds: a review. J. Food Eng. 117 (4), 426-436 (2013).
  29. Kumar, M., Shukla, P. K. PCR targeting of ITS regions for rapid diagnosis of mycotic keratitis. J. Clin. Microbiol. 43 (2), 662-668 (2005).
  30. Bondet, V., Brand-Williams, W., Berset, C. Kinetics and mechanisms of antioxidant activity using the DPPH method. LWT Food Sci. Technol. 30, 609-615 (1997).
  31. Re, R., et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS assay. Free Radic. Biol. Med. 26 (9-10), 1231-1237 (1999).
  32. Đorđević, T. M., et al. Effect of fermentation on antioxidant properties of cereals. Food Chem. 119 (3), 957-963 (2010).
  33. Herald, T. J., et al. High-throughput micro plate assays for screening flavonoid content and DPPH-scavenging activity in sorghum bran and flour. Sci. Food Agric. 92 (11), 2326-2331 (2012).
  34. Kısa, D., et al. Evaluation of Biological Potency of two Endemic Species Integrated with in vitro and in silico Approches: LC-MS/MS Analysis of the Plants. Chem. Biodivers. 21 (3), e202301351(2024).
  35. Kumoro, A., Singh Hasan, Effects of solvent properties on the soxhlet extraction of diterpenoid lactones from andrographis paniculata leaves. ScienceAsia. 35, 306-309 (2009).
  36. Ng, Z. X., Samsuri, S. N., Yong, P. H. The antioxidant index and chemometric analysis of tannin, flavonoid, and total phenolic extracted from medicinal plant foods with the solvents of different polarities. Food Process. Preserv. 44 (9), e14680(2020).
  37. Kıvrak, İ Analytical methods applied to assess chemical composition, nutritional value and ın vitro bioactivities of Terfezia olbiensis and Terfezia claveryi from Turkey. Food Anal. Methods. 8 (5), 1279-1293 (2015).
  38. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2015).
  39. Monteiro, M., et al. Effect of extraction method and solvent system on the phenolic content and antioxidant activity of selected macro- and microalgae extracts. J. Appl. Phycol. 32 (1), 349-362 (2020).
  40. Pingret, D., et al. Degradation during application of ultrasound in food processing: A review. Food Control. 31, 593-606 (2013).
  41. Şahin, A., et al. Total phenol, antioxidant activity, fatty acid composition and mineral contents of the species of fungi known as domalan. J. Agroalimentary Process. Technol. 26 (3), 149-154 (2020).
  42. Fidan, M., et al. cytotoxic and protective effects of truffles. Anal. Biochem. 641, 114566(2022).
  43. Awika, J. M., et al. Screening methods to measure antioxidant activity of sorghum (sorghum bicolor) and sorghum products. J. Agric. Food Chem. 51 (23), 6657-6662 (2003).
  44. Gursoy, N., et al. Antioxidant activities, metal contents, total phenolics and flavonoids of seven Morchella species. Food Chem. Toxicol. 47 (9), 2381-2388 (2009).
  45. Elsayed, E., et al. Truffles: A potential source of bioactive compounds. Bioactive Compounds in Food. , CRC Press. 163-174 (2021).
  46. Elsayed, E. A., et al. Mushrooms: a potential natural source of anti-inflammatory compounds for medical applications. Mediators Inflamm. 2014, 805841(2014).
  47. Stanikunaite, R., et al. Cyclooxygenase-2 inhibitory and antioxidant compounds from the truffle Elaphomyces granulatus. Phytother. Res. 23 (4), 575-578 (2009).
  48. Doğan, H. H., Aydın, S. Determination of antimicrobial effect, antioxidant activity and phenolic contents of desert truffle in Turkey. Afr. J. Tradit. Complement. Altern. Med. 10 (4), 52-58 (2013).
  49. Abu-Odeh, A., et al. In vitro and In vivo Antidiabetic Activity, phenolic content and microscopical characterization of Terfezia claveryi. Molecules. 27 (15), 4843(2022).
  50. Nguyen, V., et al. Chlorogenic Acid: A systematic review on the biological functions, mechanistic actions, and therapeutic potentials. Nutrients. 16 (7), 924(2024).
  51. Suhag, R., et al. Mapping antioxidant mechanisms in plant extracts via reactivity kinetics inhibiting oil autoxidation. Appl. Food Res. 5 (2), 101476(2025).
  52. Harir, M., et al. Evaluation of antimicrobial activity of Terfezia arenaria extracts collected from Saharan desert against bacteria and filamentous fungi. 3 Biotech. 9 (7), 281(2019).
  53. Hamza, A., et al. Nutraceutical potential, antioxidant and antibacterial activities of Terfezia boudieri Chatin, a wild edible desert truffle from Tunisia arid zone. Arab. J. Chem. 9 (3), 383-389 (2016).
  54. Neggaz, S., et al. In vitro evaluation of antioxidant, antibacterial and antifungal activities of Terfezia claveryi Chatin. Phytothérapie. 13, 1-7 (2020).
  55. Dib, S., Fortas, Z. Antimicrobial activities of desert truffle extracts and their chemical ıdentification. J. Pharm. Pharmacol. 7, 1-7 (2019).
  56. Gargano, M. B., et al. Antimicrobial activity of the extracts of Terfezia Claveryi and Tirmania Pinoyi against gram-positive and gram-negative bacteria causal agent of diseases in tomato. Chem. Eng. Trans. 58, 73-78 (2017).
  57. Khojah, H. M. J., et al. Antimicrobial efficacy of extracts of Saudi Arabian desert Terfezia claveryi truffles. Saudi J. Biol. Sci. 29 (11), 103462(2022).
  58. Akyüz, M., et al. Cytotoxicity and DNA protective effects of the Terfezia and Picoa species from the eastern region of Turkey. Istanbul J. Pharm. 51 (2), 198-203 (2021).
  59. Al Obaydi, M. F., et al. Terfezia boudieri: A Desert Truffle With Anticancer and Immunomodulatory Activities. Front. Nutr. 7, 38(2020).
  60. Pakrashi, S., et al. Quercetin alleviates 6-OHDA-caused apoptosis in SH-SY5Y cells. Toxicol. Res. 13 (4), tfae117(2024).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Terfezia ClaveryiExtraction MethodsIn Vitro BioactivityAntioxidant ActivityAntimicrobial ActivityCytotoxic ActivityUltrasound Assisted ExtractionMaceration Assisted ExtractionPhenolic CompoundsLC MS MS Analysis

Related Articles