يقدم هذا البروتوكول تقنية زراعة قلب غير متجانس في عنق الرحم خالية من الكفة وتعتمد على الغياطة في الفئران، مصممة لتمكين وضع طعم قلب ثان غير متجانس بشكل موثوق لتقييم تحمل المناعة الخاصة بالمتبرع في الظروف الفسيولوجية مع أقل تداخل من المادة الأجنبية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج عنق الرحم الخالي من الغرز لزراعة القلب الثانوية غير المتجانسة لتقييم تحمل المناعة الخاصة بالمتبرع لدى الفئران
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
زراعة القلب غير المتجانسة في الفأر هي نموذج راسخ للتحقيق في رفض الطيور الطيبية وتحمل المناعة. في دراسات التحمل، غالبا ما يطلب وضع طعم قلب غير متجانس ثان لتقييم خصوصية المتبرع، حيث توفر منطقة عنق الرحم موقعا تشريحيا مثاليا. بينما تبسط تقنيات الأكواف التشريح الوعائي، تقدم هذه الطرق مواد صناعية يمكن أن تعزز الالتهاب المحيط بالأنستوموتيك، وتغير الديناميكا الدموية، وتربك التحليلات المناعية. بالإضافة إلى ذلك، تضيق الأوعية الناتجة عن التعديلات الوراثية، أو العلاج المثبط للمناعة، أو تقدم عمر المتلقي، أو الحالات التجريبية المزمنة يمكن أن يجعل وضع الأصفاد صعبا تقنيا في الأوعية الصغيرة العيار. هنا، نقدم تقنية خالية من الكفة وتعتمد على الخياطة لزراعة القلب غير المتجانس في عنق الرحم في الفئران. تتجنب هذه الطريقة استخدام البوليمرات داخل اللومين، وتحافظ على تدفق الدم الفسيولوجي، وتقلل من المضاعفات المرتبطة بتغير ديناميكيات التدفق. يشمل البروتوكول التحضير الدقيق لكل من الأوعية المتبرعة والمتلقية، وإجراء التحليل الدقيق من الطرف إلى الطرف للشريان السباتي والوريد الوداجي الخارجي، وتقييمات الحساسية أثناء العملية، واستراتيجيات المراقبة بعد العملية. من خلال تقليل استخدام المواد الصناعية والتكيف مع الأوعية الصغيرة العيار، تؤسس هذه التقنية الخالية من الأكواف منصة فسيولوجية وقابلة للتكرار لزراعة القلب الثانوية. يتيح هذا النهج دراسات ميكانيكية دقيقة لتحمل المتبرع الخاص بالمتبرع في نماذج زراعة القلب في فئران الفئران.
المقدمة
زراعة القلب هي تدخل ينقذ الحياة للمرضى الذين يعانون من فشل القلب في المرحلة النهائية.1. يحتاج المتلقون الذين لديهم أطراف قلبية إلى علاج مثبط للمناعة مدى الحياة لمنع الرفض2. على الرغم من تثبيط المناعة، لا يزال البقاء طويل الأمد للطعم متأثرا بالرفض الحاد والمزمن، خصوصا الرفض المضاد (AMR) واعتلال الأوعية الدموية القلبية (CAV). بالإضافة إلى ذلك، تحمل هذه الأنظمة آثارا جانبية كبيرة، بما في ذلك السمية الكلى، ومتلازمة الأيض، والالتهابات، والأورام الخبيثة، مما يقلل من بقاء الطعم والبقاء على قيد الحياة للمريض 2,4. تؤكد هذه التحديات الحاجة الملحة إلى تحمل المناعة، وهي حالة يقبل فيها جهاز المناعة لدى المتلقي طعم المتبرع دونالحاجة إلى تثبيط مناعي مدى الحياة. تحقيق التحمل سيقضي على السموم المرتبطة بالأدوية، ويقلل من خطر العدوى والأورام الخبيثة، ويمنع الإصابات المناعية المزمنة، ويسمح بسحب الستيرويدات، مما يحسن السيطرة الأيضية ويحافظ على وظيفة الطعم. بينما أظهرت استراتيجيات تحمل متعددة وعدا في نماذج حيوانية، بما في ذلك الكيميرية المختلطة، والحصار التحركي التكلفي، وحقن الخلايا التنظيمية، والأساليب المستهدفة للجينات، إلا أن الترجمة السريرية لا تزال محدودة 6,7,8,9. هناك عائق كبير وهو الحاجة إلى نماذج موثوقة في الجسم الحي تختبر بدقة التحمل الخاص بالمتبرع5.
زراعة القلب غير المتجانسة في الفأر هي نموذج تجريبي قوي وواسع الاستخدام لدراسة آليات رفض الطيور اللوغرافية وتحملها10،11،12،13،14. توفر سلالات الفئران المعرفة وراثيا والنماذج المعدلة وراثيا تتيح تشريحا صارما لمسارات المناعة المرتبطة بإصابة الطعم وتنظيم 9,15,16. في دراسات التحمل، غالبا ما يطلب زراعة قلب ثانية غير متجانسة، سواء كانت مطابقة مع متبرع أو طرف ثالث، لتقييم خصوصية المتبرع لتنظيم المناعة 13,17,18. توفر منطقة عنق الرحم موقعا تشريحيا مثاليا لهذه الزراعة الثانية، حيث توفر وصولا جراحيا مباشرا، ومراقبة موثوقة للطعوم عبر اللمس أو التصوير، واسترجاع فعال للأنسجة للتحليلات المناعية والنسيجية في المراحل النهائية8،19. تجعل هذه الميزات نموذج عنق الرحم ذا قيمة خاصة لدراسة آليات تحفيز ورفض التحمل، عبر مجموعة واسعة من بيئات الزراعة.
تم وصف عدة تقنيات زراعة قلب غير متجانسة باستخدام الغرز خلال العقود الثلاثة الماضية. أظهرت الدراسات المبكرة أن الرقبة موقع عملي لزرع الطعم والمراقبة الوظيفية المباشرة باستخدام التناسل القائم على الخياطة بين أوعية المتبرع والجهاز السباتي والوداجي للمستلم20. أبلغت مجموعات أخرى عن تكوينات أكمام خالية من الكفة كوسيلة بديلة لتثبيت الشريان الرئوي أو الشريان الأورطي المتبرع بالأوعية العنقية21. تم اقتراح نموذج عنق الرحم الجديد من طرف إلى جانب للحفاظ على استمرارية السبايا السباتي الأصلية وتقريب هندسة التشريح البطني القياسي من طرف إلى جانب22. معا، تبرز هذه الأساليب مرونة موقع عنق الرحم وتوضح المقايضات الضرورية بين التعقيد التقني، والديناميكا الدموية، وكمية المواد الغريبة عند واجهة الأنستوموتيك.
إحدى تقنيات التشريح الوعائي الوعائي الشائعة في زراعة قلب عنق الرحم في الفأر هي تقنية الكفة داخل اللمعان 23,24,25,26. تقدم تقنيات عنق الرحم المعتمدة على الكفة دعامات داخل اللوئية لتبسيط التشريح الميكروأوعية الدموية وزيادة معدلات النجاح التقني، خاصة للجراحين الدقيقين الأقل خبرة 24,25,26. بينما تبسط الطرق القائمة على الأصفاد التحدي التقني لربط الأوعية، فإن هذه التقنية تدخل مادة غريبة إلى موقع الأناستوموتيك. قد يؤدي وجود البوليمرات إلى تعزيز الالتهاب المحيط بالأنستوموتيك، وتغيير الديناميكا الدموية المحلية، وقد يربك تحليلات المناعة27,28. علاوة على ذلك، فإن تضيق الأوعية المتلقية، سواء بسبب سلالات الفئران المعدلة وراثيا، أو العلاج المثبط للمناعة، أو تقدم عمر المتلقي، أو الحالات التجريبية المزمنة، قد يجعل وضع الأصفاد صعبا تقنيا في الأوعية الصغيرةالعيار 29.
ولمعالجة هذه القيود، طورنا تقنية خالية تماما من الكفة وتعتمد على الدرز لزراعة القلب غير المتجانس في عنق الرحم. في هذا التكوين، يتم تجسم الشريان السباتي المستلم من طرف إلى طرف إلى طرف الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع، ويتم تجسم الوريد الوداجي الخارجي من طرف إلى طرف إلى طرف جذع المتبرع الرئوي، مما يوفر تدفق وخروج مباشر للتروية التاجية (الشكل 1A). من خلال تقليل استخدام المواد الصناعية داخل اللم، يتجنب هذا النهج التلامس المباشر بين البوليمر والدم في موقع الأناستوموتيك، وهو جذاب من الناحية المفاهيمية للدراسات التي تركز على الاستجابات المناعية والالتهابية المحلية. تتضمن الطريقة تحضيرا دقيقا لكل من الأوعية المتبرعة والمتلقية، بالإضافة إلى التشريح الدقيق من طرف إلى طرف للشريان السباتي والوريد الوداجي الخارجي. بالإضافة إلى ذلك، يتم إجراء تقييم الحساسية أثناء العملية والمراقبة بعد العملية. في الواقع، يطبق هذا النموذج العنقي الخالي من الكفة عندما يطلب طعم قلب ثانوي لاختبار تحمل خاص المتبرع بعد زراعة بطنية مع بقاء طويل الأمد، خاصة في الفئران المعدلة وراثيا أو المصابة بالمناعة الضعيفة ذات الأوعية الصغيرة العيار. ومع ذلك، تتطلب التقنية أيضا خبرة متقدمة في الجراحة الدقيقة والوصول إلى مجهر جراحي؛ تناقش القيود الإضافية المتعلقة بربط السباتي السباتي واختيار المتلقي أدناه. من خلال توفير منصة قابلة للتكرار، تعزز هذه التقنية موثوقية نماذج الزرع الثانوية وتدعم الدراسات الميكانيكية لتحمل المتبرع المعين في أنظمة الفوار. يستخدم هذا البروتوكول عمليات التشريح من طرف إلى طرف عن طريق ربط الشريان السباتي المتلقي بالشريان الأورطي الصاعد للمتبرع والوريد الوداجي الخارجي للمتلقي بجذع الرئة المتبرع، مما يوفر تروية تاجية قوية للطعم (الشكل 1B). تخلق الأنابيب المدمجة من الطرف إلى الطرف نمط تدفق داخلي وخارج مباشر يدعم بشكل موثوق تدفق التاجي في هذا النموذج.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم شراء الفئران من مختبر جاكسون. تم تضمين الفئران الذكور والإناث، الذين تتراوح أعمارهم بين 6 إلى 10 أسابيع ووزنهم 20 - 30 جرام وقت أول زراعة قلب بطنية، في هذه الدراسة. تم إسكان المتبرعين والمتلقين تحت ظروف خالية من مسببات الأمراض (SPF) في منشأة القوارض بمستشفى ماساتشوستس العام. تم تنفيذ جميع الإجراءات بشكل إنساني وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. تمت الموافقة على جميع تجارب الحيوانات وأجريت تحت إشراف لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في مستشفى ماساتشوستس العام (رقم البروتوكول 2020N000125). جدول المواد يسرد جميع المواد والمواد والمعدات المستخدمة في هذا البروتوكول. يتطلب الأمر موافقة IACUC قبل بدء التجارب. يضع ويحافظ على جميع الفئران وفقا للإرشادات المؤسسية والمعايير التنظيمية المعمول بها.
1. تحضير الحيوانات والآلات
- قبل الجراحة، قم بتعقيم جميع الأجهزة بتعريضها لبخار مشبع عند 250 درجة فهرنهايت (121 درجة مئوية) تحت ضغط لمدة 20 دقيقة. الأدوات الجراحية المجهرية المطلوبة موضحة في الشكل 2. احم أطراف أدوات الجراحة المجهرية لتجنب التلف. استبدل الأدوات المكسورة أو المشوهة فورا للحفاظ على معدلات نجاح جراحية مثالية.
- الرعاية قبل العملية من قبل الجراحة
- يستخدم هذا البروتوكول فئران متلقية تم زرعها سابقا بطعم قلب بطني غير متجانس 10,11,12. تأكد من صحة المتلقين، وأن الشق الأولي قد شفى تماما وخال من العدوى، وأن طعم البطن لا يزال ينبض بالخفق. قم بإجراء هذه الزراعة الثانوية في عنق الرحم بين اليوم بعد العملية (POD) من 50 إلى 100 بعد الطعم البطني. استخدم فقط المتلقين الذين لديهم طعم بطني فعال، حيث أن هذا بروتوكول تحمل 8,17.
- الفئران المتلقية بسرعة لمدة ساعة إلى ساعتين قبل الإجراء لتقليل خطر الشفط. أعط إيثيكا XR (بوبرينورفين ممتد المفعول، 3.25 ملغ/كغ) وميلوكسيكام (5 ملغ/كغ) تحت الجلد لعلاج تخفيف الألم. يوفر إثيكا XR تسكينا مستمرا لمدة تصل إلى 72 ساعةو30 دقيقة.
- تحضير المتبرعين
- اختر فئران متبرعة متطابقة جنسيا وعمريا من السلالة المناسبة وفقا لتصميم الدراسة. في دراسات تحمل المناعة الحلقية القلبية، قد تشمل مجموعات المتبرعين التركيبية (نفس السلالة التي يشبه المتلقي)، والمتبرع التهجيني (نفس السلالة التي يمتلكها المتلقي الأساسي)، والطرف الثالث التهجيني (السلالة المختلفة بين المتبرع الأساسي والمتلقي).
- تأكد من الحالة الصحية وفترة التأقلم المناسبة لجميع فئران المتبرع والمتلقي قبل التخدير.
2. التخدير
- تحفيز التخدير والدعم
- تحفيز التخدير باستخدام 1٪ - 2.5٪ إيزوفلوران في الأكسجين (تدفق 1 - 2 لتر/دقيقة) باستخدام جهاز تبخير دقيق في غرفة الحث. حافظ على التخدير عبر مخروط الأنف أو أنبوب القصبة الهوائية. ضع مزلق العيون البيطري على كلتا عيني الفأر لمنع جفاف القرنية أثناء التخدير.
- تأكد من عمق التخدير بغياب رد فعل انسحاب الدواسات. ضع الحيوان على وسادة تسخين للحفاظ على درجة حرارة الجسم طوال العملية.
3. حصاد القلب المتبرع
- التعرض للمتبرعين
- ضع فأر المتبرع في وضعية الاستلقاء على الظهر وثبت الأطراف بشريط لاصق. أزل الشعر وقم بتعقيم الجلد ثلاث مرات باستخدام مسحات كحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪.
- قم بإجراء فتح البطن في منتصف الخط يليه بعمل فتحة عظمة القص باستخدام مقص دقيق لكشف تجويف البطن والصدر. حرك الأمعاء بلطف إلى الجانب الأيسر باستخدام الشاش المبلل. ضع شاشا مبلليا بمحلول ملحي تحت الأمعاء للحفاظ على الترطيب.
- التروية وحصاد القلب المتبرع
- جهز محلول ملحي بارد معطر بالهيبارين (125 وحدة دولية/مل) وحمل 0.2 - 0.3 مل في حقنة بسعة 0.5 مل.
- قم بإبرة أو قسطرة بوزن 26 - 30 جرام في الوريد الأجوف السفلية. قم بببؤن 2 إلى 3 مل من محلول ملحي بارد وهيبارين ببطء خلال 30 ثانية. انتظر على الأقل دقيقة إلى دقيقتين لتحسين الهيبارينية.
- إجراء عملية فتح الصدر الثنائية لكشف القلب بأقصى قدر من الرؤية. افصل القفص الصدري الأمامي عن الجانب الظهري وعكسه للأعلى، مثبتا إياه بإبرة أو مشبك.
- قم بتشريح النسيج الضام بشكل غير مباشر بين الشريان الأبهر الصاعد (AA) وجذع الرئة (PT؛ الشكل 3A).
- ربط الأوردة السفلية والعليا بغرز نايلون 8 - 0 بالقرب من القلب وقطع الأوعية المربوطة بعيدا عن الأربطة. قم بتشريح أخصائي العلاج الطبيعي بأقصى قدر ممكن من المسافة الممكنة.
- قم بربط الأوردة الرئوية اليسرى واليمنى باستخدام خياطة نايلون 6 - 0 واقطع الأوعية المربوطة بعيدا عن الربط.
- قم باستئصال القلب، مع الحفاظ على طول كاف من العضلة الحامية عن طريق القطع عند نقطة أصل الشريان العضدي والعضلة العضلية. الحفاظ على الجدار الأمامي للشريان الجزئي لأطول فترة ممكنة. قم بقص العضلات المضادة والعلاج الطبيعي لضمان وجود تشريح آمن (الشكل 3B).
- ضع القلب في طبق زراعة خلايا بحجم 60 مم مملوء بمحلول ملحي طبيعي مبرد وأعد تدخيم القلب المتبرع بلطف بكمية إضافية من 1 مل من محلول ملحي بارد (125 وحدة دولية/مل) عبر المدمنين أو العلاج الطبيعي لغسل أي دم متبقي. تجنب الحقن بالضغط العالي لمنع وذمة عضلة القلب أو إصابة الأوعية الدموية. قم بتقليم الأوعية على الطبق المبرد حسب الحاجة.
- ضع القلب في محلول لاكتات رينجر البارد على الثلج حتى الانغراس. من الأفضل زرع قلب المتبرع خلال 90 دقيقة من نقص التروية الباردة ولا يجب الحفاظ عليه لأكثر من 120 دقيقة.
4. تعرض منطقة عنق الرحم من قبل المتلقي
- الشق وعزل الأوعية الدموية
- تحفيز التخدير باستخدام 1٪ - 2.5٪ إيزوفلوران في الأكسجين (تدفق 1 - 2 لتر/دقيقة) باستخدام جهاز تبخير دقيق في غرفة الحث. حافظ على التخدير باستخدام مخروط أنف أو أنبوب القصبة الهوائية. تأكيد عمق التخدير الكافي من خلال غياب رد فعل الانسحاب بالدواسة. حقن 0.5 مل من المحلول الملحي الدافئ الطبيعي تحت الجلد في المنطقة الظهرية للمستلم لتجديد السوائل.
- ضع المتلقي على وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. احلق كامل منطقة عنق الرحم. ضع الفأرة في وضعية الاستلقاء على الظهر مع ذيل العامل مواجها للمشغل. ثبت رأس وأطراف وذيل بشريط لاصق، لضمان تثبيت أمان دون إفراط في التمدد. ضع قطرة واحدة من زيت العيون على كل عين لمنع الجفاف. عقم الجلد العنقي ثلاث مرات باستخدام مسحات كحول الأيزوبروبيل بنسبة 70٪.
- قم بعمل شق جلدي طولي مع شكل T معكوس فوق الرقبة من عظمة القص إلى زاوية الفك السفلي الأيمن (الشكل الإضافي 1A).
- قم بتحريك الوريد الوداجي الخارجي الأيمن (EJV) بشكل غير مباشر من الترقوة الإنسية اليمنى إلى التقائه الرئيسي. قم بكي وقطع الفروع الصغيرة من ال EJV (الشكل 4B).
- عزل الفص الأيمن للغدة الدرقية وقطعها عن طريق الكي. اقطع عضلة الsternomastoid عن طريق الكي لكشف الشريان السباتي الأيمن (CA).
- حرك الحزام الأيمن بشكل مباشر أبعد قدر الإمكان فوق انقسام السباتي السباتي (الشكل 4C).
- ضع مشبك وعائي صغير على الجزء القريب من الكابوس الكادروتيد. ضع رباط نايلون 10 - 0 حول الجزء البعيد عند مستوى انقسام السباتي لمنع تدفق الدم.
- ضع رباط نايلون بنسبة 10 - 0 على الجزء القريب من EJV على مستوى مشبك CA. بمجرد انتفاخ ال EJV، توقف عن النزيف من مواقع فروع صغيرة تم تحميلها سابقا وقطعتها. حدد التقاء الأوردة الخلفية الوهلية والخلفية الأذنية أثناء انتفاخ ال EJV وتطبيق مشبك وعائي صغير عند هذا الالتقاء لإغلاق التدفق.
- تحضير التشريح الوعائي
- اقطع ال EJV وCA بين الربط والمشابك باستخدام مقص دقيق.
- غسل فتحات الأوعية بمحلول ملحي عادي لإزالة الدم والجلطات. حافظ على رطوبة مجال العمليات طوال عملية زرع الطعم.
5. زرع الطعم
- وضع الطعوم
- ضع طعم القلب المتبرع مقلوبا في منطقة عنق الرحم المتلقي، بحيث يكون العلاج الطبيعي موجها جانبيا والشريان الأبهر الصاعد (AA) موجه إلى الوسط.
- غط الطعم بشاش مبلل، مع ترك العلاج الطبيعي وAA مكشوفين. الشاش يحمي ويثبت الطعم مع تحسين التصور.
- تشريح الأوعية الدموية
- قم بعمل أناستوموز للمتبرع من الطرف إلى الطرف إلى الطرف إلى المتلقي باستخدام غرز نايلون 11 - 0 باستخدام تقنية الكم مع عضات AA السطحية للمتبرع إلى ال CA الخاص بالمتلقي. تجنب الشد المفرط (الشكل 4D).
- قم بعمل أناستوموز للعلاج الطبيعي من طرف إلى طرف لمعدل EJV المتلقي باستخدام غرز نايلون 11 - 0 باستخدام تقنية الأكمام، مع عضات العلاج الطبيعي السطحية للمتبرع إلى EJV الخاص بالمتلقي. تجنب التوتر الزائد (الشكل 4E).
- أزل مشبك EJV البعيد. قم بإزالة مشبك الحمض الكيميائي القريب لاستعادة تدفق الدم (الشكل 4F). يجب أن يمتلئ الطعم فورا بالدم، ويصبح أحمر، وينقبض خلال دقيقة إلى دقيقتين (الفيديو الإضافي 1). ضع بضع قطرات من محلول ملحي دافئ عادي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية على الطعم للمساعدة في استعادة الانقباض.
- اضغط المناطق الأنستوموتيكية بلطف بأصوات قطنية لتحقيق التوماز.
- إغلاق الجيب
- ضع الطعم بإحكام داخل الجيب العنقي دون التواء أو ضغط الأوعية أو القصبة الهوائية.
- أغلق الشق العنقي بغرزة قابلة للامتصاص 6 - 0 باستخدام غرزة بسيطة متقطعة (الشكل الإضافي 1B). لا تغطي موقع الجراحة بضمادة؛ اترك المنطقة مفتوحة للهواء.
6. الرعاية والمراقبة بعد العملية
- المراقبة الفورية
- ضع الحيوان في غرفة تعافي دافئة لمدة ساعة على الأقل. راقب السلوكيات غير الطبيعية مثل الارتباك، الرعشة، أو عدم القدرة على المشي بالسيارة.
- حقن 0.3 مل من محلول ملحي دافئ طبيعي تحت الجلد لاستبدال السوائل. انقل المتلقي إلى قفص جديد معقم مزود بجل غذائي. الحيوانات التي تزرع في المنزل بشكل فردي ولا تعيدها إلى السكن الجماعي حتى الشفاء الكامل، كما يتضح من الحركة والسلوك الطبيعيين.
- أعط الميلوكسيكام (5 ملغ/كغ، تحت الجلد) كل 12 ساعة لمدة 72 ساعة بعد العملية. يقوم الجراح والطبيب البيطري بفحص الحيوانات بانتظام خلال فترة التعافي.
- قم بالقتل الرحيم بطريقة إنسانية إذا أظهر الحيوان > فقدان وزن بنسبة 20٪، أو تورم شديد في موقع الجراحة، أو علامات عدوى، أو خمول، أو علامات أخرى على الضيق، باستخدام استنشاق ثاني أكسيد الكربون وفقا للإرشادات المؤسسية.
7. نقاط النهاية التجريبية
- جمع الأنسجة
- حصاد الطعوم في نقاط زمنية محددة مسبقا لعلم الأمراض النسيجي أو التحليل المناعي. لقياس تدفق الخلايا وعلم الأمراض النسيجية، اجمع الأنسجة قبل 2 - 3 أيام من التوقف المتوقع لنبض الطعم، بناء على تجارب أولية.
- اجمع عينات الطعم، والطحال، والعقد اللمفاوية، وعينات الدم حسب ما يتطلبه تصميم الدراسة.
- تحليل البقاء
- سجل وقت البقاء على قيد الحياة في الطعم، يعرف بأنه اليوم الذي يتوقف فيه النبض الملموس. تعريف البقاء طويل الأمد (التحمل) في زراعة القلب العنقي الثانوية على أنه نبض مستمر بطعم متبرع بعد 50 يوما من الزراعة، مع تأكيد علم الأمراض النسيجي غياب مناطق واسعة من النخر.
- رسم منحنيات بقاء الطعم باستخدام تحليل كابلان-ماير.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تظهر نظرة عامة تخطيطية لإجراء زراعة القلب غير المتجانس في عنق الرحم بدون كفة في الشكل 1. يظهر الشكل 1A، حيث يتم تجسم الشريان الأورطي الصاعد من المانح من الطرف إلى الطرف إلى الطرف إلى الشريان السباتي المتلقي، ويتم تثبيط الجذع الرئوي المتبرع من طرف إلى طرف إلى طرف الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي. يوضح الشكل 1B نمط تدفق الدم عبر الطعم. يدخل الدم إلى الشريان الأورطي الصاعد من الشريان السباتي المتلقي، ويد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لعبت نماذج زراعة القلب في الفأر دورا حاسما في تطوير فهمنا لمناعة الزراعة. منذ تطوير النموذج البطني غير المتجانس الأصلي، تم استخدام هذه الأنظمة لتوصيف آليات الرفض الخلوية والجزيئية، واختبار أنظمة مثبطة للمناعة الجديدة، وتقييم التعديلات الجينية في كل من السلالة المتبرعة والمتلقية 8,17,31. توفر القدرة على استخدام الفئران المتزاوجة والمتغيرة وراثيا فرصا فريدة لتحليل المسارات المناعية في بيئة محكمة. ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
وقد دعم هذا العمل منحة الجمعية الأمريكية للقلب رقم 23CDA1049388 ل T.J.B. ومنحة المعاهد الوطنية للصحة R01AI143887 إلى L.V.R.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5 مل من حقن الإنسولين | كوفيديين | 8881600350 | الحقن تحت الجلد |
| حقن كلوريد الصوديوم بنسبة 0.9٪ | BD | 1727170103 | الحقن الوريدي |
| غرزة نايلون 10-0 | أجهزة AROSurgical | T04A10N07-13 | للفئران في الجراحة المجهرية |
| خياطة نايلون 11-0 | إثيكون | 9016G | للفئران في الجراحة المجهرية |
| حقنة 1 مل | BD | 309659 | الحقن الوريدي |
| إبرة 30G × 1/2 | BD | 305106 | الحقن الوريدي |
| حقنة 3 مل | BD | 309657 | الحقن الوريدي |
| غرزة نايلون 6-0 | إثيكون | J212H | للفئران في الجراحة المجهرية |
| لوحة زراعة الخلايا بحجم 60 مم | فالكون | 353002 | للحفاظ على الطعم |
| علب الألمنيوم الملونة | أدوات العلوم الدقيقة | 20330-04 | للفئران، أدوات التعقيم الجراحية المجهرية |
| أطراف القطن | فيشربراند | 14-960-3M | توقف عن النزيف |
| دومونت #5 ملقط | أدوات العلوم الدقيقة | 11251-20 | للفئران في الجراحة المجهرية |
| إثيقا XR بوبروفينور (CIII) VI | RX جنيس | 86084010030 | المسكن |
| أبناء طيبون | أدوات العلوم الدقيقة | 15400-12 | للفئران في الجراحة المجهرية |
| إسفنجيات الشاش | ميدلاين | NON25334 | احم الطعم والبينستين |
| مصباح حراري مع قاعدة | قصة برينتري العلمية | HL-1B | الرعاية بعد الجراحة |
| هيبارين الصوديوم | نورثستار Rxllc. | 72603-412-01 | الحقن الوريدي |
| إيزوفلوران | باكستر للتخدير والتخدير رعاية النقد | 1001936060 | للتخدير |
| مسحات كحول الأيزوبروبيل | BD | 326895 | تعقيم الجلد قبل الجراحة |
| المجهر | كارل زايس | 303294-9903 | للفئران في الجراحة المجهرية |
| ميني كتيمر | قصة برينتري العلمية | CLP-88 | لإزالة شعر الفئران |
| Optixcare Eye Lube Plus | أفينتيكس | OPX-4252 | مزلق العيون لحماية العين أثناء الجراحة |
| بيفيتال ألوكسيت (ميلوكسيكام) | بيفيتال | 21294589 | المسكن |
| مجموعة أدوات الكي المحمولة | ماكيسون أرجنت | 42295143 | للفئران في الجراحة المجهرية |
| رنجر محلول اللاكتات المخزن | ثيرمو ساينتفيك | AAJ67572AP | للحفاظ على الطعم |
| وسادة تدفئة الحيوانات الصغيرة | ك & H | HM10 | لجراحة الفئران |
| شريط الجراحة الأبيض الترانسبوري | 3M | 7100115870 | ثبت الطرف والرأس والذيل للفئران أثناء العملية |
| مشبك وعاء | أدوات العلوم الدقيقة | 00398-02 | للفئران في الجراحة المجهرية |
المراجع
- Johnson, M., et al. Heart transplantation in the United States, 1999-2008. Am J Transplantat. 10 (4), 1035-1046 (2010).
- Nelson, J., et al. Consensus recommendations for use of maintenance immunosuppression in solid organ transplantation: Endorsed by the American College of Clinical Pharmacy, American Society of Transplantation, and the International Society for Heart and Lung Transplantation. Pharmacother J Human Pharmacol Drug Ther. 42 (8), 599-633 (2022).
- Colvin, M. M., et al. Antibody-mediated rejection in cardiac transplantation: Emerging knowledge in diagnosis and management: A scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 131 (18), 1608-1639 (2015).
- Neuberger, J. M., et al. Practical recommendations for long-term management of modifiable risks in kidney and liver transplant recipients: A guidance report and clinical checklist by the consensus on managing modifiable risk in transplantation (commit) group. Transplantation. 101 (4S), S1-S56 (2017).
- Ezekian, B., et al. Contemporary strategies and barriers to transplantation tolerance. Transplantation. 102 (8), 1213-1222 (2018).
- Lee, K. M., et al. Tgf-β-producing regulatory b cells induce regulatory t cells and promote transplantation tolerance. Eur J Immunol. 44 (6), 1728-1736 (2014).
- Kawai, T., et al. Cd154 blockade for induction of mixed chimerism and prolonged renal allograft survival in nonhuman primates. Am J Transplantat. 4 (9), 1391-1398 (2004).
- Borges, T. J., et al. Overexpression of pd-1 on t cells promotes tolerance in cardiac transplantation via icos-dependent mechanisms. JCI Insight. 6 (24), e142909(2021).
- Liao, M., et al. Pd-l1 on ex-vivo expanded toll-like-receptor-bregs prevents allograft rejection by breg viability promotion, cd4(+)t effector cell suppression, and tregs induction. Am J Transplant. , (2025).
- Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic heart transplantation in mice. J Vis Exp. (6), e238(2007).
- Plenter, R. J., Grazia, T. J. Murine Heterotop Heart Transplant Tech. J Vis Exp. (89), e51511(2014).
- Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. A., Sharland, A. F. A modified method for heterotopic mouse heart transplantion. J Vis Exp. (88), e51423(2014).
- Yang, C., et al. Kidney-induced systemic tolerance of heart allografts in mice. JCI Insight. 5 (18), e139331(2020).
- Yin, D., et al. A half-century of heterotopic heart transplantation in mice: The spearhead of immunology research. Transplantology. 5 (4), 298-311 (2024).
- Lee, K. M., et al. Suppression of allograft rejection by regulatory B cells induced via TLR signaling. JCI Insight. 7 (17), e152213(2022).
- Liao, M., et al. Marchf1 deficiency attenuates antibody-mediated rejection by modulating b cell responses. Am J Transplantat. 25 (8), S312(2025).
- Borges, T. J., et al. The inhibitory receptor siglec-e controls antigen-presenting cell activation and t cell-mediated transplant rejection. Sci Translat Med. 17 (797), eads2694(2025).
- Efe, O., et al. A humanized il-2 mutein expands tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Investigat. 134 (5), e173107(2024).
- Mendiola Pla, M., Milano, C. A., Glass, C., Bowles, D. E., Wendell, D. C. Cardiac magnetic resonance imaging characterization of acute rejection in a porcine heterotopic heart transplantation model. Plos one. 19 (6), e0304588(2024).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).
- Fang, J., et al. A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice. Am J Translat Res. 5 (5), 521(2013).
- Dun, H., et al. Cervical heterotopic heart transplantation in mice using a novel suture technique. JHLT open. 7, 100164(2025).
- Ratschiller, T., et al. Heterotopic cervical heart transplantation in mice. J Vis Exp. (102), e52907(2015).
- Mao, X., Xian, P., You, H., Huang, G., Li, J. A modified cuff technique for mouse cervical heterotopic heart transplantation model. J Vis Exp. (180), e63504(2022).
- Li, W., et al. Mouse heterotopic cervical cardiac transplantation utilizing vascular cuffs. J Vis Exp. (184), e64089(2022).
- Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51 (4), 896-897 (1991).
- Rosendorf, J., et al. Experimental fortification of intestinal anastomoses with nanofibrous materials in a large animal model. Sci Rep. 10 (1), 1134(2020).
- Lazar, K. M., Shetty, S., Chilkoti, A., Collier, J. H. Immune-active polymeric materials for the treatment of inflammatory diseases. Curr Opin Colloid Interf Sci. 67, 101726(2023).
- Elezaby, A., Dexheimer, R., Sallam, K. Cardiovascular effects of immunosuppression agents. Front Cardiovasc Med. 9, 981838(2022).
- Chan, G., Si, C., Nichols, M. R., Kennedy, L. Assessment of the safety and efficacy of pre-emptive use of extended-release buprenorphine for mouse laparotomy. J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (4), 381-387 (2022).
- Mendes, D. M., Borges, T., Riella, L. Oral tributyrate promotes treg-mediated immune modulation and prolongs allograft survival in murine transplant models. Am J Transplantat. 25 (8), S243-S244 (2025).
- Miller, C. L., Madsen, J. C. Targeting il-6 to prevent cardiac allograft rejection. Am J Transplantat. 22, 12-17 (2022).
- Schmitz, R., et al. B cells in transplant tolerance and rejection: Friends or foes. Transpl Int. 33 (1), 30-40 (2020).
- Fillinger, M. F., Kerns, D. B., Bruch, D., Reinitz, E. R., Schwartz, R. A. Does the end-to-end venous anastomosis offer a functional advantage over the end-to-side venous anastomosis in high-output arteriovenous grafts. J Vasc Surg. 12 (6), 676-690 (1990).
- Ribaudo, J. G., et al. Sutureless vascular anastomotic approaches and their potential impacts. Bioact Mater. 38, 73-94 (2024).
- Alghoul, M. S., et al. From simple interrupted to complex spiral: A systematic review of various suture techniques for microvascular anastomoses. Microsurgery. 31 (1), 72-80 (2011).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
