يقوم هذا البروتوكول بتوحيد تقييم الاستجابة المبكرة لدى مرضى NSCLC الذين يتلقون مثبطات PD-1/PD-L1 من خلال دمج NLR الأساسي، ونسبة تدفق الخلايا CD4/CD8، وتقييم الكيمياء المناعية Ki-67 للورم، وتقييم RECIST 1.1 بعد دورتين، مع نقاط تحقق جودة تركز على التكرار طوال الوقت.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
Ki-67 مع نسب العدلات إلى الخلايا اللمفاوية ونسب إيجابية CD4/CD8 الإيجابية يتنبأ بالاستجابة المبكرة في سرطان الرئة غير صغير الخلايا
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
قيمت هذه الدراسة القيمة التنبؤية المجمعة لحالة تعبير Ki-67 في الورم، ونسبة العدلات إلى الخلايا اللمفاوية في الدم الطرفي (NLR)، ونسبة الخلايا التائية الإيجابية CD4 إلى إيجابية CD8 لتقييم الاستجابة قصيرة الأمد لدى مرضى سرطان الرئة غير صغير الخلايا الذين يتلقون علاج مثبط PD-1/PD-L1. قمنا بتحليل أثري ل 102 مريض متتالي عولجوا في مستشفى بينهايوان المركزي بين يناير 2021 وأكتوبر 2023 وأكملوا دورتين علاجيتين. تم تقييم الاستجابات باستخدام معايير تقييم الاستجابة للأورم الصلبة (RECIST)، الإصدار 1.1: حقق 13 مريضا استجابة كاملة، و26 استجابة جزئية، و54 حالة مرض مستقرة، و9 أمراض تقدمية. للتحليل، عرفنا الاستجابة بأنها استجابة كاملة بالإضافة إلى استجابة جزئية وعدم الاستجابة كمرض مستقر بالإضافة إلى مرض تقدمي. حدد الفحص أحادي المتغيرات مؤشرات مرشحة مرتبطة بحالة الاستجابة، والتي أدخلت في انحدار لوجستي متعدد المتغيرات مع تعديل حسب العمر، وحالة أداء مجموعة الأورام التعاونية الشرقية، وتاريخ التدخين، مع تحديد حالة Ki-67، وNLR، ونسبة CD4-إيجابي/إيجابية CD8 كمؤشرات مستقلة لتصنيف الاستجابة قصيرة المدى. دعم تحليل خصائص تشغيل المستقبل تحسنا في التمييز لنموذج المؤشر البيولوجي المدمج مقارنة بالمؤشرات الفردية، مما يبرز نهجا عمليا وأقل توغلا لتدرج الاستجابة المبكرة في هذا السياق السريري.
المقدمة
يمثل سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) ما يقرب من 85٪ من أورام الرئة، وهو النوع الفرعي النسيجي الأكثر انتشارا ويؤثر بشكل رئيسي على البالغين في منتصف العمر وكبار السنفي الصين. أسبابه متعددة العوامل ويشمل التعرض للتبغ، والاتصال طويل الأمد بالغبار أو الملوثات الصناعية، والقابلية الوراثية، والتعرض المزمن للمسرطنات البيئية2˒3. غالبا ما يظهر التهاب التهاب الجلد النفسي المبكر بأعراض تنفسية غير محددة ويمكن أن يساء إلى حالات مجرى الهواء الشائعة في الرعاية الأولية، مما يساهم في تأخر التعرف ونسبة عالية من المرضى الذين تم تشخيصهم في المراحل المتقدمة4˒5.
في السنوات الأخيرة، أصبح انسداد نقاط التفتيش المناعية عنصرا أساسيا في العلاج الجهازي لسرطان الخلايا المزمنة المتقدمة في مركز الحساسية المزمنة (NSCLC). أثبتت مثبطات الموت المبرمج 1 (PD-1) والرابطة المبرمجة للموت 1 (PD-L1) فائدة سريرية دائمة وتحسنت في البقاء على قيد الحياة لدى مرضى مختارين6. ومع ذلك، لا تزال التباين في الاستجابة كبيرا، والعبء المالي والسمية المحتملة للعلاج المطولليست تافهة. توفر المؤشرات السريرية المستخدمة مثل الكيمياء المناعية لمرض PD-L1 للورم وحمل الطفرات (TMB) معلومات قيمة، ومع ذلك فإن كلاهما له قيود عملية تحد من انتشاره الموحد. يمكن أن يتأثر تقييم PD-L1 بالتباين داخل الورم وتنوع الاختبار/المنصة، بينما يتطلب TMB عادة موارد تسلسل، وفترة استجابة أطول، وتكاليف أعلى9. تجعل هذه القيود من المفيد سريريا تطوير سير عمل يستخدم مواد متوفرة بشكل روتيني ويمكن تنفيذها مع مراقبة جودة موحدة في مراكز ذات قدرة مختبرية متغيرة.
من الناحية العملية، قد يدعم النهج القائم على البروتوكول الذي يدمج عددا قليلا من العلامات الحيوية المتاحة التخطيط المبكر للمتابعة بعد بدء العلاج. على سبيل المثال، يمكن أن يساعد أخذ العينات الأساسية الموحدة قبل أول تسريب ونافذة تقييم محددة من دورتين الأطباء في تحديد المرضى الذين يستحقون مراقبة أقرب أو إعادة تقييم مبكرة، مع الحفاظ على الشفافية بشأن الخطوات المطلوبة لإعادة إنتاج القياسات عبر المواقع. هذا التركيز على الجدوى وقابلية التكرار ذو صلة خاصة بمقالات بروتوكول JoVE، حيث تكون الخطوات المنهجية ونقاط التحقق من الجودة مركزية للمساهمة.
Ki-67 هو مؤشر تكاثر نووي يعكس ديناميكيات نمو الأورام وقد نوقش فيما يتعلق بالنسيج المناعي. تم الإبلاغ عن ارتباط ارتفاع Ki-67 بتعبير PD-L1 وقد يرتبط بأنماط الهروب المناعي التي تشكل الحساسية لمثبطات نقاط التحقق المناعية (ICIs)10. بالتوازي، تعد نسبة العدلات إلى الخلايا اللمفاوية (NLR) مؤشرا متاحا بسهولة لحالة الالتهاب الجهازي، وقد تم التحقيق على نطاق واسع كعامل تنبؤي أو تنبؤي لدى المرضى الذين يتلقون علاج مثبط PD-1/PD-L11. يفسر المعدل الأعلى للمقاومة العصبية على أنه يعكس بيئة مثبطة للمناعة—من خلال العدلات النسبية و/أو اللمفوكونية—وقد ارتبط باستجابة أضعف وانخفاض البقاء في عدة مجموعات12. توفر نسبة الخلايا التائية الإيجابية ل CD4 الطرفية إلى إيجابية CD8 نافذة إضافية إلى التوازن المناعي التكيفي، والتوازن الوظيفي بين أقسام الخلايا التائية المساعدة والخلايا التائية السامة له صلة ميكانيكية بالمناعة المضادة للأورام الفعالة تحت حجب PD-1/PD-L113.
على الرغم من أن Ki-67 وNLR ونسبة CD4 الإيجابي/الموجبة CD8 أظهرت كل منها قيمة محتملة كمؤشرات فردية، إلا أن استخدامها المتكامل كسير عمل تشغيلي طفيف التوغل لتقييم الاستجابة المبكرة في NSCLC لا يزال غير موصوف بشكل كاف. لذلك، فحصت هذه الدراسة ما إذا كان الجمع بين حالة تعبير الورم Ki-67 مع NLR في الدم المحيطي ونسبة CD4-إيجابي/إيجابية CD8 يحسن تصنيف الاستجابة قصيرة المدى بعد دورتين من علاج مثبط PD-1/PD-L1، بهدف إبلاغ تصنيف المخاطر المبكر ودعم إعادة التقييم السريري في الوقت المناسب في الممارسة الروتينية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الأخلاقيات والامتثال التنظيمي
- الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات في مستشفى بينهايوان المركزي في دونغقوان (رقم الموافقة: 2021045).
- التأكد من التزام جميع الإجراءات بإعلان هلسنكي.
- تأكد من الحصول على موافقة مكتوبة مستنيرة قبل العلاج وسجل حالة الموافقة في ملف الدراسة.
2. تحديد هوية المرضى وفحص الأهلية
- حدد المرضى المتتاليين الذين تم تشخيصهم بسرطان الرئة غير صغير الخلايا الذين بدأوا علاج مثبط بروتين موت الخلايا المبرمج 1/مثبط الموت المبرمج 1 بين يناير 2021 وأكتوبر 2023 في مركز الدراسة.
- تأكيد التشخيص المرضي من خلال مراجعة تقرير علم الأمراض.
- أكد إكمال دورتين علاجيتين وعرف دورة واحدة بأنها 3 أسابيع.
- تطبيق معايير الشمول.
- تأكيد العمر بين 35–80 سنة عند بدء العلاج.
- أكد غياب انتشار الكبد بناء على التصوير الأساسي.
- تأكيد غياب أي أورام خبيثة أولية أخرى.
- أكد مدة البقاء المتوقعة الموثقة > 12 شهرا في السجل الطبي.
- تأكيد توفر السجلات الطبية الأساسية الكاملة وبيانات التصوير الأساسية.
- تطبيق معايير الاستبعاد.
- استبعد المرضى الذين خضعوا لجراحة القلب والصدر خلال 6 أشهر قبل بدء العلاج.
- استبعد المرضى الذين تم توثيق عدم الامتثال مما يؤثر على المتابعة.
- استبعد المرضى الذين يعانون من اضطرابات نفسية شديدة تؤثر على الامتثال للبروتوكول.
- استبعد المرضى الذين لديهم اضطرابات دموية أو تخثرية عند التقييم الأساسي.
- استبعد المرضى الذين لديهم عدوى نشطة شديدة في الوضع الأولي.
- استبعد المرضى الذين تلقوا العلاج المناعي أو العلاج الموجه خلال 30 يوما قبل التسجيل.
- استبعد المرضى الذين يتوقفون عن العلاج خلال فترة التقييم ذات الدورتين بسبب النقل، أو القيود المالية، أو الوفاة.
- خصص معرف دراسة فريد لكل مريض مؤهل وإلغاء هوية جميع السجلات قبل التحليل.
- تحقق من الأهلية بشكل مستقل من قبل محققين وحل التناقضات بالإجماع.
- سجل الفصل في سجل فحص يحتوي على معرف الدراسة، العنصر المراقب، وصف التناقض، المحكمين، والتاريخ.
ملاحظة: سجل الحالات الأساسية التي من المحتمل أن تغير مؤشرات الالتهاب (مثل الحمى، العدوى المشتبه بها سريريا، أو التعرض الجهازي للكورتيكوستيرويدات) في سجل الفحص لدعم قرارات الاستبعاد والتفسير14.
3. استخراج البيانات السريرية الأساسية
- استرجاع المتغيرات الأساسية من نظام السجلات الطبية الإلكتروني.
- سجل الجنس، العمر، مؤشر كتلة الجسم، مستوى التعليم، موقع الورم، أقصى قطر للورم، مرحلة الورم–العقدة–النقائل، طريقة العلاج، تاريخ التدخين، وحالة أداء مجموعة الأورام التعاونية الشرقية.
- تصدير جميع المتغيرات الأساسية إلى جدول بيانات غير محدد.
- قم بتثبيت مجموعة البيانات للتحليل عن طريق حفظ نسخة للقراءة فقط مع طابع زمني.
- تحقق من دقة البيانات عن طريق التحقق المتبادل بين ما لا يقل عن 10٪ من الإدخالات مع سجلات المصدر.
- تصحيحات السجل في سجل تصحيحات يحتوي على اسم الحقل، القيمة الأصلية، القيمة المصححة، الأحرف الأولى من المراجع، والتاريخ.
- تلخيص الخصائص الأساسية حسب حالة الاستجابة وجمع جدول الخصائص الأساسية للإبلاغ كجدول 1.
4. جمع الدم المحيطي الأساسي ونسبة العدلات إلى الخلايا اللمفاوية المشتقة من أمراض الدم
- اجمع الدم الوريدي الصائم من وريد في الطرف العلوي خلال ساعتين قبل أول إعطاء مثبط باستخدام أنابيب مضادات تخثر EDTA (انظر جدول المواد).
- اقلب كل أنبوب من 8 إلى 10 مرات مباشرة بعد الجمع.
- قم بإجراء اختبار عد دم كامل خلال ساعتين من الجمع باستخدام محلل أمراض الدم الآلي (النموذج المدرج في جدول المواد).
- تحقق من حالة مراقبة الجودة الداخلية اليومية للمحلل قبل اختبار العينة وسجل حالة نجاح/فشل مراقبة الجودة، ومستوى التحكم، والمشغل ونموذج المحلل في سجل الدراسة.
- سجل عدد العدلات المطلق وعدد الخلايا اللمفاوية المطلقة من مخرج المحلل.
- حساب نسبة العدلات إلى الخلايا اللمفاوية باستخدام الصيغة NLR = عدد العدلات المطلق / عدد الخلايا اللمفاوية المطلقة.
- علم العينات المتجلطة أو المتخثرة بأنها غير صالحة في سجل الدراسة.
- كرر سحب الدم خلال نفس فترة العلاج قبل العلاج عندما يكون ذلك ممكنا سريريا وسجل سبب أي نتيجة مفقودة أو غير صالحة.
- سجل وقت جمع الدم ومدة تشغيل CBC لتوثيق نافذة ما قبل التحليل لمدة ساعتين ≤.
5. قياس التدفق الخلوي لنسبة الخلايا التائية إيجابية CD4 إلى موجبة CD8
- أليكوت 50 ميكرولتر EDTA - الدم الكامل المضاد للتخثر في أنبوب تدفق بقطر 12 × 75 مم (انظر جدول المواد).
- أضف 20 ميكرولتر من مادة كاشف فرعية لخلايا T ذات أربعة ألوان تحدد CD3 وCD4 وCD8 وCD45 باستخدام أربعة فلوروكروم (انظر جدول المواد).
- الدوامة لمدة 1–2 ثانية والاحتضان لمدة 15 دقيقة عند 20–25 درجة مئوية محمية من الضوء.
- أضف 450 ميكرولتر من محلول تحلل خلايا الدم الحمراء 1× المحضر من مركز 10× (انظر جدول المواد).
- اخلط بعكس لطيف وحضن لمدة 10 دقائق عند حرارة 20–25 درجة مئوية محميا من الضوء.
- أضف 2 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (انظر جدول المواد) وامزجه بالعكس 3–5 مرات.
- الطرد المركزي عند 350 × جرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- تخلص من الفائق دون إزعاج الحبيبة.
- أعد تعليق الحبيبة في محلول ملحي مخزن فوسفات بسعة 300–500 ميكرولتر للاستحواذ.
- قم بإجراء فحوصات أداء يومية لجهاز قياس الخلايا وفقا لسير عمل الجهاز وتسجيل حالة النجاح/الفشل في ورقة التشغيل.
- اضبط جهود المضاعف الضوئي باستخدام أنبوب غير مصبوغ.
- شغل عناصر تحكم بلون واحد (خلايا أو خرز) لكل فلوروكروم.
- احسب التعويض داخل برنامج الاستحواذ باستخدام أدوات التحكم ذات اللون الواحد.
- حافظ على نفس إعدادات الجهد ومصفوفة التعويض لجميع العينات ضمن نفس الدفعة وتاريخ السجل، والمشغل ولقطة الجهد واسم ملف التعويض.
- احصل على كل عينة بمعدل تدفق منخفض إلى متوسط وجمع ما لا يقل عن 10,000 حدث لخلايا اللمفاوية لكل عينة.
- الخلايا اللمفاوية البوابية باستخدام CD45 مقابل التشتت الجانبي.
- شرائح البوابة المنفردة باستخدام مساحة التشتت الأمامي مقابل ارتفاع التشتت الأمامي.
- خلايا T إيجابية CD3 في البوابة.
- قم بقياس المجموعات الفرعية الإيجابية لليوم الرابع والموجبة لليوم 8 ضمن الأحداث الإيجابية لليوم الثالث.
- احسب نسبة إيجابية CD4 إلى إيجابية CD8 باستخدام الصيغة نسبة إيجابية CD4 / إيجابية CD8 = (٪ إيجابية CD4 بين إيجابيات CD3) / (٪ إيجابية CD8 بين إيجابية CD3).
- تحقق من فصل المجموعات الإيجابية ل CD4 وإيجابية CD8 على القطع ثنائية المتغير.
- أعد حساب التعويضات وإعادة تشغيل الضوابط عند ملاحظة تداخل غير متوافق مع الفصل المتوقع للسكان.
- احفظ مخططات تمثيلية لكل دفعة (CD45/SSC، المجموعات المنفردة، بوابة CD3، CD4 مقابل CD8) وأرشفها مع معرف الدفعة وتاريخها.
ملاحظة: سجل أرقام دفعات المواد وتواريخ التشغيل في أوراق التشغيل الداخلية لدعم تتبع الدفعات15.
6. تعيين الكيمياء المناعية النسية للورم Ki-67 والحالة الثنائية
- قطع أقسام نسيج الورم المدمجة بالبارافين المثبتة بالفورمالين عند 4 ميكرومتر وتركيب مقاطع على شرائح مشحونة (انظر جدول المواد).
- قم بإزالة البارافينات من الزيلين وإعادة ترطيب الأقسام عبر الإيثانول المتدرج إلى الماء.
- قم باسترجاع الحواتم المحفزة بالحرارة باستخدام حاجز استرجاع السترات، pH 6 (انظر جدول المواد).
- قم بتسخين حاجز الاسترجاع إلى درجة حرارة قريبة من الغليان قبل التوقيت.
- تنزلق الحرارة في مخزن الاسترجاع لمدة 20 دقيقة.
- أبرد السلايدات في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.
- استخدم شرائح الشطف باستخدام محلول الغسيل لإزالة محلول السحب المتبقي.
- حضن أجزاء تحتوي على 3٪ بيروكسيد الهيدروجين لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- اغسل ثلاث مرات باستخدام مخزن الغسيل لمدة 1–2 دقيقة لكل غسلة.
- حضن مقاطع بالجسم المضاد الأولي Ki-67 (نسخة MIB-1؛ تركيبة جاهزة للاستخدام؛ انظر جدول المواد) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
- اغسل ثلاث مرات باستخدام مخزن الغسيل لمدة 1–2 دقيقة لكل غسلة.
- تطبيق نظام كشف قائم على HRP وتطوير الكروموجين باستخدام DAB وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد).
- أوقف تطور الكروموجين عن طريق الشطف بالماء بمجرد أن يكون التلوين النووي واضحا ويبقى الخلفية منخفضة.
- قم بصبغ القطع بالهيماتوكسيلين، ثم شطفها، ثم أزرق، ثم جففها عبر الإيثانول المدرج، ونظفها في الزيلين، وركبتها بوسط تثبيت دائم (انظر جدول المواد).
- افحص الأقسام تحت مجهر الحقل السلاعي عند 400×.
- اختر خمسة مجالات أورام غير متداخلة وتجنب النخر، وآثار السحق، وتأثيرات الحواف.
- عد ما لا يقل عن 100 نواة ورم في كل حقل وسجل عدد النوى ذات التلوين النووي البني الواضح.
- عد ما لا يقل عن 500 نواة ورم في كل حالة عبر المجالات الخمسة.
- احسب مؤشر تصنيف Ki-67 على مستوى الحالة باستخدام مؤشر تصنيف الصيغة (٪) = (إجمالي نوى الورم الإيجابية / إجمالي نوى الورم التي تم عدها) × 100٪.
- درجة شدة التلوين لكل حالة على أنها 0 (لا شيء)، 1 (أصفر فاتح)، 2 (بني-أصفر)، أو 3 (بني داكن) باستخدام الشدة السائدة عبر نوى الورم المحسوبة.
- احسب نسبة الخلايا الإيجابية لكل حالة كالتالي: 0 (0–5٪)، 1 (6–25٪)، 2 (26–50٪)، 3 (51–75٪)، أو 4 (>75٪) باستخدام مؤشر تصنيف مستوى الحالة.
- احسب الدرجة المناعية الفعالة باستخدام IRS = درجة الشدة × النسبة المئوية.
- تعيين حالة تعبير Ki-67 للتحليل ك Ki-67 سالب لIRS 0–4 وKi-67 إيجابي ل IRS 5–12، واستخدم هذه الحالة الثنائية بشكل متسق عبر الجداول 1–4 ومخرجات النمذجة.
- قم بتقييم أعمى من قبل طبيبين للأراضي.
- يعمى كلا الأطباء الشرعيين عن النتائج السريرية وقيم مؤشرات الدم الحيوية.
- حل خلافات التقييم من خلال المراجعة المشتركة وتسجيل التصنيف النهائي والتاريخ بالإجماع.
- أرشفة الصور الممثلة لكل حالة مع معرف الدراسة والتكبير.
- أضف نسيج تحكم إيجابي معروف وضابط سلبي (باستثناء الجسم المضاد الأولي) في كل عملية صبغ.
- تكرار التلوين عند فشل التحكم أو عند التلوين في الخلفية مما يمنع التفسير.
ملاحظة: أرشف ورقة عمل التقييم التي تحتوي على أعداد الحقول الخمسة، مؤشر التصنيف، درجة الشدة، درجة النسبة المئوية، مصلحة الضرائب، والحالة النهائية السلبية/الإيجابية لاختبار التدقيق16.
7. تقييم الاستجابة بعد دورتين
- قم بإجراء تصوير أساسي قبل الدورة الأولى ضمن سير العمل السريري الروتيني.
- كرر التصوير بعد دورتين علاجيتين وعرف كل دورة بأنها 3 أسابيع.
- تقييم استجابة العلاج باستخدام معايير تقييم الاستجابة في الأورام الصلبة، الإصدار 1.1. 14
- إجراء تقييم مستقل أعمى من قبل اثنين من أخصائيي الأشعة.
- أعمى كلا الأطباء في الأشعة عن قيم المؤشرات الحيوية ونمذجة المتغيرات المشتركة.
- حل الخلافات بالتوافق وسجل تفاصيل الفصل (الأحرف الأولى للقارئ، التاريخ، القرار النهائي).
- صنف فئة الاستجابة كاستجابة كاملة، استجابة جزئية، مرض مستقر، أو مرض تقدمي وفقا ل RECIST 1.1.
- تعيين الاستجابة الكاملة + الاستجابة الجزئية لمجموعة الاستجابة.
- تعيين مرض مستقر + مرض تقدمي لمجموعة عدم الاستجابة.
- قم بتخزين تواريخ الأساس والتصوير التابع وتحقق من أن نافذة التقييم تتوافق مع دورتين.
- أرشف أوراق قياس RECIST مع رقم الدراسة، القارئ، وتاريخ التدقيق.
8. التحليل الإحصائي
- قم بإجراء تحليلات إحصائية باستخدام برامج إحصائية (انظر جدول المواد).
- تقديم المتغيرات المستمرة الموزعة بشكل طبيعي كمتوسط ± انحراف معياري وقارن المجموعات باستخدام اختبار t لعينة مستقلة.
- قدم المتغيرات التصنيفية كعداد ونسب مئوية وقارن المجموعات باستخدام اختبار كاي-تربيع أو اختبار فيشر الدقيق، حسب الحاجة.
- المتغيرات المستقلة بالبرمجة وفقا لنظام الترميز المحدد مسبقا وترجم جدول الترميز كجدول 2.
- تستخدم المتنبئات التحليلية أحادية المتغيرات وتختار المتغيرات التي تلبي المعايير المحددة مسبقا لنمذجة المتغيرات المتعددة.
- ملاءمة نموذج الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات باستخدام الاستجابة = 0 وعدم الاستجابة = 1 كمتغير تابع.
- عدل نموذج متعدد المتغيرات حسب العمر، وحالة أداء مجموعة الأورام التعاونية الشرقية، وتاريخ التدخين.
- أبلغ عن تقديرات النموذج المعدل النهائي كجدول 3.
- توليد منحنيات خصائص تشغيل المستقبل للمتنبعات الفردية والنموذج المدمج.
- حدد العتبات القائمة على ROC باستخدام مؤشر يودن للنسبة الإيجابية للرأي ونسبة الإيجابية إلى CD4 إلى CD8 الإيجابية، وتطبيق العتبات المشتقة بشكل متسق في التحليلات الثنائية المبلغ عنها في الجدول 4.
- تلخيص التمييز وأداء التصنيف للمتنبعات الفردية والنموذج المدمج كجدول 4.
- إجراء تحليلات حساسية مع معالجة نسبة العدلات إلى الخلايا اللمفاوية ونسبة CD4 الإيجابي/الإيجابية CD8 كمتنبئات مستمرة تحت نفس مجموعة ترميز وضبط النتائج.
- أبلغ عن نتائج تحليل الحساسية كجدول تكميلي S1.
- تحقق من الاتساق بين القيم في نص المخطوطة والجداول والأشكال المقابلة، وأرشفت ملفات الإخراج النهائية وإصدار البرنامج المستخدم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الخصائص الأساسية
تلخص الخصائص السريرية الأساسية ل 102 مريضا مصابين بسرطان الرئة غير صغير الخلايا في الجدول 1. شملت مجموعة الاستجابة (الاستجابة الكاملة + الاستجابة الجزئية) 30 ذكرا و9 إناث، بينما شملت مجموعة عدم الاستجابة (مرض مستقر + مرض تقدمي) 50 ذكرا و13 أنثى (p = 0.771). في مجموعة الاستجابة، كان 79.49٪ من المرضى أقل من 65 عاما، مقارنة ب 66.67٪ في المجموعة غير الاستجابة. لم تلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات في مؤشر كتلة الجسم، أو مستوى التع...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أصبح تثبيط نقاط التفتيش المناعية عنصرا أساسيا في العلاج الجهازي لسرطان الرئة غير صغير الخلايا المتقدم (NSCLC)، ومع ذلك لا تزال الفائدة السريرية ذات المعنى مركزة في مجموعة فرعية من المرضى15˒16. هذا التباين في الاستجابة، إلى جانب تكلفة وسمية العلاج المطول، يجعل التصنيف المبكر للاستجابة ذات صلة سريرية للتخطيط للمتابعة وإعادة التقييم في الوقت المناسب17. في هذا البروتوكول JoVE، نصف سير عمل عملي يدمج قراءة تكاثرية قائمة عل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يصرح المؤلفون بعدم وجود مصالح مالية متنافسة أو علاقات شخصية قد تكون أثرت على العمل المذكور في هذه الورقة.
شكر وتقدير
نشكر قسم علم الأمراض والمختبر المركزي في مستشفى بينهايوان المركزي في دونغقوان على المساعدة الفنية في الكيمياء المناعية النسيجية وقياس تدفق الخلية. وقد دعم هذا العمل مشروع صندوق أبحاث العلوم والتكنولوجيا الطبية في قوانغدونغ (المنحة رقم B2022247).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلل أمراض الدم الآلي | شركة سيسميكس | XN-1000 | حساب كامل لعدد الدم وNLR |
| مجهر برايتفيلد | أوليمبوس | BX53 | التقييم الأنسجي |
| حاجز استرجاع مستضدات السيترات (pH 6.0) | أبكام | ab93678 | استرجاع المستضدات الناتج عن الحرارة |
| مجموعة ركيزة DAB | مختبرات فيكتور | SK-4100 | التطور الكروموجيني |
| أنبوب جمع الدم من مضادات التخثر EDTA | بكالوريوس العلوم الحيوية | 367525 | جمع الدم المحيطي |
| مقياس التدفق الخلوي | بكالوريوس العلوم الحيوية | FACSCanto II | تحليل المجموعات الفرعية لخلايا T |
أنابيب قياس التدفق الخلوي (12  75 مم) | بي دي فالكون | 352058 | أنابيب جمع العينات |
| كتل أنسجة الورم المدمجة بالبارافين المثبتة بالفورمالين | أرشيف علم الأمراض السريرية | لا يوجد | عينات أورام NSCLC |
| كاشف مجموعة فرعية لخلايا T بأربعة ألوان (CD3/CD4/CD8/CD45) | بكالوريوس العلوم الحيوية | 340499 | للكشف عن المجموعات الجزئية للخلايا اللمفاوية |
| صبغة الهيماتوكسيلين | سيغما-ألدرتش | H3136 | التلوين النووي المضاد |
| مجموعة كشف HRP | داكو (أجيلينت) | K5007 | نظام الكشف الثانوي عن الأجسام المضادة |
| الجسم المضاد الأولي Ki-67 (نسخة MIB-1) | أبكام | ab16667 | الكشف عن المواد المناعية الكيميائية |
| ميكروتوم | لايكا مايكروسيستمز | RM2235 | القطع 4  م أقسام FFPE |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | ثيرمو فيشر العلمي | 10010023 | غسل الخلايا وإعادة التعليق |
| شرائح المجهر الموجبة الشحنة | ثيرمو فيشر العلمي | J1800AMNZ | تركيب قسم الأنسجة |
| محلول تحلل خلايا الدم الحمراء | بكالوريوس العلوم الحيوية | 349202 | تحلل كريات الدم الحمراء قبل قياس تدفق الخلايا |
| برنامج التحليل الإحصائي | آي بي إم | SPSS v26.0 | تحليل البيانات |
المراجع
- Chen, Z., et al. Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases. Nat. Rev. Cancer. 14 (8), 535-546 (2014).
- Kotecha, J., et al. Evaluating the delay prior to primary care presentation in patients with lung cancer: a cohort study. BJGPO Open. 5 (2), (2021).
- Cheng, E. S., Weber, M., Steinberg, J., Yu, X. Q. Lung cancer risk in never-smokers: An overview of environmental and genetic factors. Chin J Cancer Res. 33 (5), 548-562 (2021).
- Hamilton, W., Peters, T. J., Round, A., Sharp, D. What are the clinical features of lung cancer before the diagnosis is made. A population based case-control study. 60 (12), 1059-1065 (2005).
- Caswell, G., Seymour, J., Crosby, V. Lung cancer diagnosed following an emergency admission: Exploring patient and carer perspectives on delay in seeking help. Support Care Cancer. 25 (7), 2259-2266 (2017).
- Li, F., Liao, B., Wang, T., Qi, T., Wang, Y. Programmed cell death protein 1/programmed cell death protein ligand 1 immunosuppressants in advanced non-small cell lung cancer: Research progress in treatment. Front Pharmacol. 13, 918709(2022).
- Liao, W., Huang, J., Hutton, D., Li, Q. Cost-effectiveness analysis of first-line pembrolizumab treatment for PD-L1 positive, non-small cell lung cancer in China. J Med Econ. 22 (4), 344-349 (2019).
- Schneider, B. J., et al. Management of immune-related adverse events in patients treated with immune checkpoint inhibitor therapy: ASCO guideline update. J Clin Oncol. 39 (36), 4073-4126 (2021).
- Dong, A., Zhao, Y., Li, Z., Hu, H. PD-L1 versus tumor mutation burden: Which is the better immunotherapy biomarker in advanced non-small cell lung cancer. J Gene Med. 23 (2), e3294(2021).
- Mitchell, K. G., et al. Tumor cellular proliferation is associated with enhanced immune checkpoint expression in stage I non-small cell lung cancer. J Thorac Cardiovasc Surg. 158 (3), 911-919.e6 (2019).
- Jiang, T., et al. Clinical value of neutrophil-to-lymphocyte ratio in patients with non-small-cell lung cancer treated with PD-1/PD-L1 inhibitors. Lung Cancer. 130, 76-83 (2019).
- Yang, T., et al. Prognostic value of derived neutrophil-to-lymphocyte ratio (dNLR) in patients with non-small cell lung cancer receiving immune checkpoint inhibitors: a meta-analysis. BMJ Open. 11 (9), e049123(2021).
- Su, S., et al. Predictive value of peripheral blood biomarkers in patients with non-small-cell lung cancer responding to anti-PD-1-based treatment. Cancer Immunol Immunother. 73 (1), 12(2024).
- Riley, L. K., Rupert, J. Evaluation of patients with leukocytosis. Fam Physician. 92 (11), 1004-1011 (2015).
- Cossarizza, A., et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. J Immunol. 51 (12), 2708-3145 (2021).
- Leung, S. C. Y., et al. Analytical validation of a standardized scoring protocol for Ki67: phase 3 of an international multicenter collaboration. NPJ Breast Cancer. 2, 16014(2016).
- Wang, J., Fan, X., Zhang, J. Clinical value of peripheral blood circulating tumor DNA in predicting the efficacy of immunotherapy for non-small cell lung cancer. Thorac Dis. 15 (5), 2659-2667 (2023).
- Li, H., van der Merwe, P. A., Sivakumar, S. Biomarkers of response to PD-1 pathway blockade. BR J Cancer. 126, 1663-1675 (2022).
- Sholl, L. M. Biomarkers of response to checkpoint inhibitors beyond PD-L1 in lung cancer. Mod Pathol. 35, 66-74 (2022).
- Narayanan, S., Guder, W. G. Preanalytical Variables and Their Influence on the Quality of Laboratory Results. EJIFCC. 13 (1), 9-12 (2001).
- Maecker, H. T., McCoy, J. P., Nussenblatt, R. Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol. 12 (3), 191-200 (2012).
- Dowsett, M., et al. Assessment of Ki67 in breast cancer: recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer working group. Natl Cancer Inst. 103 (22), 1656-1664 (2011).
- Eisenhauer, E. A., et al. New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1). Eur J Cancer. 45 (2), 228-247 (2009).
- Fenizia, F., et al. Measuring tumor mutation burden in non-small cell lung cancer: tissue versus liquid biopsy. Transl Lung Cancer Res. 7 (6), 668(2018).
- Royston, P., Altman, D. G., Sauerbrei, W. Dichotomizing continuous predictors in multiple regression: a bad idea. Stat Med. 25 (1), 127-141 (2006).
- Moons, K. G. M., et al. Transparent Reporting of a multivariable prediction model for Individual Prognosis or Diagnosis (TRIPOD): explanation and elaboration. Ann Intern Med. 162 (1), W1-W73 (2015).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.