مقالة منهجية

طريقة فعالة وسريعة من نوع HPLC-QQQ-MS لقياس كمية قلويدات التروبان في النباتات الطبية

DOI:

10.3791/70510

⸱

يونيو 12, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

طورت هذه الدراسة طريقة عالية الأداء في الكروماتوغرافيا السائلة مع مطيافية الكتلة الرباعية الأقطاب الثلاثية (HPLC-QQQ-MS) لتحديد وقياس قلويدات التروبان (هيوسيامين، أنيسودامين، سكوبولامين) في Anisodus tanguticus. أثبتت الطريقة أنها سريعة ودقيقة وموثوقة في التحليل عالي الإنتاجية للنباتات الطبية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أنيسودوس تانغوتيكوس هو نبات طبي تبتي مهم. تظهر قلويدات التروبان (TAs)، مثل الهيوسيامين، والأنيسودامين، والسكوبولامين، أنشطة دوائية مسكنة ومهدئة كبيرة، مما يجعل هذا النوع مصدرا طبيعيا قيما لاستخراج هذه المركبات النشطة بيولوجيا. ومع ذلك، فإن التركيب الكيميائي لأنديكوس تانغوتيكوس معقد للغاية. يشمل عددا كبيرا من المركبات بدون هياكل واضحة، مما يجعل التعرف المنهجي وتوصيف المكونات النشطة عليه أمرا خاصا الأهمية. على الرغم من أن الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) قد استخدمت على نطاق واسع لفصل المستخلصات من هذا النبات، إلا أن العديد من المكونات غير المعروفة لا تزال صعبة التعرف بدقة، حتى مع مطابقة قواعد البيانات الطيفية.

أسست هذه الدراسة طريقة تحليلية تعتمد على الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء مع مطيافية الكتلة الرباعية الأقطاب الثلاثية (HPLC-QQQ-MS) لتحديد قلويدات التروبان في A. tanguticus. تشمل الطريقة سلسلة من الإجراءات المنهجية، بما في ذلك تحضير العينات الموحد، وتكوين معلمات الطيف الكتلي، وتوازن التحليل المسبق للكتلة، وإنشاء الطريقة، وجمع بيانات الميكروفون، والمسح المتعدد المراحل (MSⁿ)، وتفسير البيانات يدويا. باستخدام هذه الاستراتيجية، نجحنا في تحديد ثلاثة قلويدات تروبان ممثلة في A. tanguticus: هيوسيامين، أنيسودامين، وسكوبولامين. بالإضافة إلى ذلك، تؤكد دقة طريقة HPLC-QQQ-MS المعتمدة، مؤكدة أن الطريقة سريعة وحساسة وقابلة للتنفيذ ودقيقة للتحديد الكمي لقلويات التروبان (TAs) في A. tanguticus. يظهر النهج المعتمد مرونة وموثوقية جيدة، وهو مناسب لتحديد وقياس قلويدات التروبان عالية الإنتاجية في A. tanguticus والنباتات الطبية الأخرى.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتمد الفعالية العلاجية للطب الصيني التقليدي (TCM) بشكل كبير على مستقلباته الثانوية، مثل القلويات، والفلافونويدات، والتربينويدات، ومكونات نشطة أخرى 1,2,3. وبالتالي، فإن التحليل النوعي والكمي الدقيق والحساس لمستقلبات الهدف المحددة في هذه الخلطات المعقدة هو خطوة أساسية لضمان جودة الطب الصيني التقليدي، وتوضيح الأساس المادي لفعاليته، ودفع الأبحاث الحديثة3. ومع ذلك، فإن تنوع وتعقيد مكونات الطب الصيني التقليدي، إلى جانب التركيزات المنخفضة جدا للعديد من المكونات الفعالة الرئيسية، يشكل تحديات كبيرة لتحقيق كشف فعال ودقة.

أنيسودوس تانغوتيكوس (ماكسيم.) يمثل باشر مصدرا نباتيا رئيسيا لقلويات التروبان (TAs)4، ويشتهر بمحتواه الغني من المركبات التروبانية النشطة دوائيا. تشمل القلويدات المميزة الرئيسية أنيسودامين، سكوبولامين، والهيوسيامين، التي تشترك في نواة تروبان مشتركة لكنها تظهر استبدالات في مجموعات وظيفية مميزة (الشكل 1)، مما يؤدي إلى ملفات دوائية متباينة6،7،8. بينما تعقد أوجه التشابه الهيكلي هذه الجوانب الدقة الكروماتوغرافية، إلا أنها تقدم أيضا نموذجا قيما للتحقيقات الكيميائية النباتية والاستقلابية المقارنة. بحثت الدراسات الحديثة في التركيب الكيميائي والاختلافات الجغرافية ل A. tanguticus باستخدام طرق الأيض وعلم الأدوية الشبكي 9,10. تعتمد الأساليب التحليلية الحالية لمستقلبات A. tanguticus بشكل رئيسي على الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)11. ومع ذلك، يمكن أن تصل مستويات قلويدات التروبان في A. tanguticus في مرحلة الشتلة إلى 0.01٪ (جزء واحد لكل عشرة آلاف)، وغالبا ما تكون طرق HPLC التقليدية مقيدة بدقة محدودة وحساسية وإنتاجية تحليلية. تعيق هذه القيود الفصل الكامل للقلويدات المتشابهة هيكليا وتعيق اكتشاف المكونات الأثرية، مما يضر بدقة التحليل ويحد من دعم التطبيقات البحثية المتقدمة. في السنوات الأخيرة، قدمت التطورات في HPLC إلى جانب مطيافية الكتلة المتتالية أدوات قوية لمعالجة هذه الاختناقات التحليلية. الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء - مطيافية الكتلة الرباعية الأقطاب الثلاثية (HPLC-QQQ-MS)، على وجه الخصوص، تقدم دقة كروماتوغرافية محسنة بشكل ملحوظ، وكفاءة في الفصل، وحساسية استثنائية 12,13,14. برزت هذه التقنية كمنصة متطورة لدراسة المستقلبات الثانوية في طب الطب الصيني التقليدي، مما يتيح تأهيل وقياس دقيق وفعال لمحللات الأهداف الأثرة ضمن مصفوفات بيولوجية معقدة11، 15، 16، 17. وبالتالي، يوفر أساسا تقنيا قويا للتحليل الكيميائي الشامل وتقييم جودة النباتات الطبية مثل A. tanguticus. في هذه الدراسة، نتناول التحديات المستمرة في اكتشاف قلويدات التروبان في A. tanguticus، مع التركيز على التحديد الدقيق وقياس المكونات على مستوى الأثر. من خلال تحسين الظروف الكروماتوغرافية ومطيافية الكتلة بشكل منهجي، طورنا وأكدنا طريقة جديدة HPLC-QQQ-MS لتحديد عدة قلويدات تروبانية رئيسية في الوقت نفسه. يعزز النهج الأمثل بشكل كبير الحساسية والانتقائية والمتانة المنهجية، مما يتغلب على القيود الشائعة المرتبطة باختبارات الطيف الكتلي التقليدية - مثل الحساسية غير الكافية، وتأثيرات المصفوفة، وتداخل التداخل في التداخل - التي غالبا ما تواجهها أثناء تحليل المركبات القلوية النادرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحضير العينة

  1. إعداد الحلول القياسية
    1. قم بوزن 10.0 ملغ بدقة كل من معايير مرجعية للهيدروبروميد من الهيوسيامين، وأنيسودامين هيدروبرومايد، والسكوبولامين هيدروبروميد باستخدام توازن تحليلي يعادل عشرة آلاف، ووضعها في قوارير حجمية منفصلة بحجم 10 مل على التوالي.
    2. أضف ميثانول كروماتوغرافي إلى الخط المميز، وذيب المعايير تماما باستخدام المعالجة بالموجات فوق الصوتية لتحضير محاليل قياسية واحدة بتركيز 1.0 ملغ/مل.
    3. انقل المحاليل الأصلية إلى زجاجات الكواشف البنية، وخزنها عند 4 درجات مئوية في الظلام.
      ملاحظة: القلويدات المستخدمة شديدة السمية. اتخذ احتياطات السلامة عند التعامل مع العينات القياسية. تم تجهيز جميع المحاليل حديثا قبل التحليل وتخزينها عند 4 درجات مئوية في الظلام لتجنب التحلل.
  2. تحضير المحاليل المختلطة للعمل
    1. قم بتحويل 100 ميكرولتر من كل محلول مخزن مذكور إلى قارورة حجمية بسعة 10 مل، وتخفيفها إلى الخط المحدد باستخدام ميثانول كروماتوغرافي لتحضير محلول وسيط قياسي مختلط بقوة 10 ميكروغرام/مل.
    2. وفقا لمتطلبات النطاق الخطي، يتم تخفيف المحلول الوسيط خطوة بخطوة باستخدام الميثانول للحصول على سلسلة من المحاليل المختلطة العاملة.
    3. خذ 50 ميكرولتر، 200 ميكرولتر، و500 ميكرولتر على التوالي. الحصول على تركيزات 0.5 ميكروغرام/مل، 2 ميكروغرام/مل، 5 ميكروغرام/مل، و10 ميكروغرام/مل. حضر طازجا قبل الاستخدام.
    4. نقل 100 ميكرولتر من محلول وسيط بقوة 10 ميكروغرام/مل إلى قارورة حجمية بسعة 1 مل لتحضير محلول مخفف بقوة 1 ميكروغرام/مل.
    5. ثم نقل 100 ميكرولتر من محلول 1 ميكروغرام/مل إلى قارورة حجمية أخرى بسعة 1 مل وتخفيفها إلى الحجم بالميثانول.
  3. معالجة العينة المبدئية
    1. قم بتجفيف المواد الطازجة من Sophora flavescens بالتجميد ثم سحنها إلى مسحوق متجانس باستخدام مطحنة عالية السرعة.
    2. قم بغربلة المسحوق عبر منخل اختبار قياسي بقطر 0.25 مم. وزن بدقة 20 ملغ من هذا البودرة، انقله إلى قارورة حجمية بحجم 100 مل، وأضف ميثانول كروماتوغرافي إلى الخط المحدد تقريبا.
    3. قم بإجراء استخراج بالموجات فوق الصوتية في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد الاستخراج، أخرج القارورة الحجمية، ودعها تبرد إلى 25 درجة مئوية عند درجة حرارة الغرفة، ثم أعد تعبئة الميثانول الكروماتوغرافي إلى خط 100 مل المميز، ثم خلط الدوامة لمدة دقيقتين.
    4. يتم تحويل 1 مل من المستخلص أعلاه إلى قارورة حجمية بحجم 100 مل، وتخفف إلى الخط المحدد بالميثانول (تخفيف 100 طن). بعد الرج جيدا، يعمل كحل أم لحقن HPLC (الشكل 2).
      ملاحظة: عند تشغيل آلة الطحن عالية السرعة، من الضروري ارتداء نظارات واقية وقناع غبار؛ تحكم في كمية ومدة الطحن لمنع ارتفاع درجة الحرارة.
  4. ترشيح وتخزين العينات
    1. جهز حقنة خالية من الإبر بسعة 1 مل (متخصصة في الكروماتوغرافيا، غير ماصة) وغشاء ميكرومسامي بطور عضوي بحجم 0.22 ميكرومتر.
    2. استنشق 1.2 مل من المحلول الأم للحقن، وادفع ببطء للترشيح.
    3. اجمع الفلترة التالية في قارورة عينة بحجم 2 مل مع إدخال داخلي، وأغلق بإحكام بغطاء.
      ملاحظة: تردد منظف الموجات فوق الصوتية ثابت عند 40 كيلوهرتز. تجنب ارتخاء غطاء القارورة الحجمي أثناء الاستخراج لمنع تطاير المذيب. اضبط عامل التخفيف وفقا لاستجابة ذروة العينة في التجربة التمهيدية لضمان أن مساحة الذروة المستهدفة تقع ضمن النطاق الخطي للمنحنى القياسي. يجب تخزين جميع العينات فورا في الثلاجة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

2. التحضير المسبق ل HPLC، تأسيس الطريقة، واستحواذ MS

  1. تحضير المراحل المتحركة
    1. تحضير المرحلة المتحركة A: قس 1000 مل من الماء فائق النقي، أضف 1.0 مل من حمض الفورميك الكروماتوغرافي (نسبة الحجم: 0.1٪ v/v)، وامزجه بشكل منتظم باستخدام محرك مغناطيسي لمدة 10 دقائق.
    2. تحضير المرحلة القابلة للنقل B: استخدم الميثانول الكروماتوغرافي مباشرة دون معالجة إضافية.
    3. صب الطورين المتنقلين A و B في أجهزة إزالة الغازات بالموجات فوق الصوتية على التوالي، ونفذ إزالة الغازات بالموجات فوق الصوتية عند 40 كيلوهرتز لمدة 15 دقيقة.
    4. نقل المراحل المتنقلة المنزوعة الغازات فورا إلى زجاجات المذيب بعد إزالة الغازات، وأغلقها، وربطها بخطوط المذيبات A وB المقابلة في نظام HPLC.
      ملاحظة: جميع المذيبات من درجة كروماتوغرافية ويجب ترشيحها عبر غشاء ميكرومسامي بزاوية 0.45 ميكرومتر من الطور العضوي قبل الاستخدام. راقب ضغط النظام بانتظام. إذا تجاوز تقلب الضغط ±±5٪، تحقق من احتمال انسداد الأعمدة أو فقاعات الهواء في خط الأنابيب.
  2. إعداد شروط HPLC
    1. استخدم عمودا بحجم C₁₈ (2.1 مم × 100 مم، 2.7 ميكرومتر) للفصل الكروماتوغرافي. توازن العمود مع الميثانول:الماء = 80:20 (v/v) لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام، مع معدل تدفق 0.3 مل/دقيقة أثناء التوازن. اضبط درجة حرارة فرن العمود على 30 درجة مئوية، وابدأ بالتسخين المسبق قبل 10 دقائق.
    2. تحسين برنامج الترشيد التدرج كما يلي: 0–10.0 دقيقة، 5٪ إلى 10٪ B؛ 10.0–15.0 دقيقة، 10٪ إلى 35٪ B; 15.0–20.0 دقيقة، 35٪ إلى 60٪ ب؛ 20.0–25.0 دقيقة، 60٪ إلى 95٪ B. اضبط معدل التدفق إلى 0.60 مل/دقيقة، حجم الحقن إلى 2 ميكرولتر، وطول موجة الكشف إلى 210 نانومتر.
  3. شروط الطيف الكتلي
    1. إجراء الكشف الطيفي الكتلي (MS) باستخدام مطياف كتلة ثلاثي رباعي الأقطاب (QQQ) مزود بمصدر تأين بالرش الكهربائي (ESI) يعمل في وضع التأين الموجب (ESI+).
    2. اضبط معايير التشغيل كما يلي: ضغط جهاز التنشيط: 15 رطل لكل بوصة مربعة؛ جهد الشعيرات الدموية: 4000 فولت؛ درجة حرارة الغاز: 300 درجة مئوية؛ وتدفق الغاز: 11 لتر/دقيقة.
    3. تحسين معلمات MS/MS بشكل منهجي لكل محلل.
      1. أولا، تحديد الأيونات السابقة عن طريق حقن الحلول القياسية الفردية مباشرة في وضع MS2 SSCAN .
      2. قم بتحسين جهد التجزئة لكل أيون أولي إلى أقصى كثافة إشارة باستخدام وضع شريحة MS2.
      3. بعد ذلك، استخدم وضع مسح أيونات المنتج لتحديد الأيونات الناتجية المميزة. تحسين طاقة التصادم (CE) للأيون السلف بشكل منهجي لتعظيم شدة إشارة الأيونات الناتجية.
      4. اختر أيون المنتج الأكثر كثافة للكمية، واستخدم ثاني أيون أكثر كثافة للتأكيد النوعي.
        ملاحظة: حدد الأيونات الأولية عبر التسريب المباشر لمحاليل القياسية الفردية في وضع المسح MS2. تأكد من أن تركيز المحلول القياسي مناسب لتجنب تشبع الإشارة. قم بمعايرة الجهاز بانتظام لتجنب انحراف المعاملات.
  4. التحقق من صحة الطريقة
    1. الخصوصية
      1. حقن مذيب فارغ (ميثانول)، وخلط محلول العمل القياسي، واستخلاص العينة بشكل منفصل، وقارن الكروماتوغرامات.
      2. التأكد من استيفاء المتطلبات التالية: عدم وجود قمم متداخلة في المذيب الفارغ؛ زمن الاحتفاظ بالمكونات المستهدفة في العينة يتوافق مع المعيار (انحراف ≤ ±±0.1 دقيقة)؛ نسبة المساحة القصوى لأيون القياس إلى الأيون المؤهل تتوافق مع نسبة المعيار (انحراف ≤ ±±10٪).
    2. الخطية
      1. حقن سلسلة المحاليل المختلطة المعدة في الخطوة 1.1 (0.1، 0.5، 2، 5، 10 ميكروغرام/مل) بشكل متسلسل تحت ظروف HPLC-MS المذكورة سابقا، مع 3 حقن لكل تركيز.
      2. رسم المنحنى القياسي بحيث يكون تركيز كل مكون (x, μg/mL) هو ال abscissa ومتوسط مساحة الذروة (y) لأيون القياس كإحداثي. إجراء تحليل الانحدار الخطي، مما يتطلب معامل ارتباط (R2) ≥ 0.995.
    3. الدقة والدقة
      1. الدقة خلال اليوم (قابلية التكرار): تحليل 6 نسخ من عينات مراقبة الجودة عند ثلاثة مستويات تركيز (2 ميكروغرام/مل، 5 ميكروغرام/مل، و10 ميكروغرام/مل) خلال يوم واحد، وحساب الانحراف المعياري النسبي (RSD٪).
      2. الدقة بين الأيام (دقة متوسطة): يتم تجهيز عينات مراقبة الجودة بشكل مستقل من نفس دفعة المواد الخام المجففة للمصنع وتحليلها بواسطة مشغلين مختلفين في ثلاثة أيام متتالية. وحساب نسبة RSD٪. تأكد من أن نسبة RSD ≤ 10٪ لكليهما.
      3. قيم الدقة باستخدام اختبار استعادة الشوكة، وعبر عنه كمعدل استرداد (٪). تأكد من أن متوسط معدل الاسترداد للتركيزات المنخفضة والمتوسطة والعالية يتراوح بين 85٪ إلى 115٪، مع نسبة RSD ≤ 5٪.
        ملاحظة: يجب أن يغطي النطاق الخطي نطاق التركيز المتوقع لمكونات الهدف في العينات الفعلية (بما في ذلك المستويات المنخفضة والمتوسطة والعالية) ليعكس التطبيق العملي. أجريت جميع تجارب التحقق على شكل ثلاث نسخ، وتم التعبير عن النتائج كقيمة متوسطة.

3. جمع البيانات

  1. إجراء جمع البيانات في وضع مراقبة تفاعلات متعددة (MRM). راجع الجدول 1 لمعاملات MRM المحسنة - بما في ذلك الأيون السابق، انتقالات أيونات المنتج، جهد الشظايا، وطاقة التصادم (CE) - لكل محلل.
  2. حساب وقت التوقف لضمان وجود عدد كاف من نقاط البيانات عبر كل ذروة كروماتوغرافية لكل انتقال مع الحفاظ على زمن دورة مناسب.

4. تحليل البيانات

  1. شغل برنامج التحليل النوعي، انقر على ملف > استيراد البيانات، واستورد جميع ملفات البيانات المجمعة (بصيغة .d).
  2. استخراج كروماتوغرافات الأيونات المستخرجة (EICs): في وحدة الكم ، اختر انتقال MRM، وإدخال أزواج الأيونات الأولية بين الأيونات والناتج لكل مكون، واستخرج الكروماتوغرافيات الأيونية المقابلة.
  3. التحقق من الذروة والتكامل: تحقق من تناظر الذروة وثبات وقت الاحتفاظ (الانحراف ≤ ±±0.1 دقيقة مقارنة بالمعيار) للقمم المستهدفة في كل مركز إلكتروني للاتصالات.
  4. يقوم البرنامج بالتكامل التلقائي بشكل افتراضي؛ إذا وجدت انحراف أساسي أو قمم متداخلة، قم بتعديل معلمات التكامل يدويا (نقاط البداية والنهاية في التكامل) لضمان دقة التكامل.
  5. احسب تركيز كل مكون في عينات غير معروفة باستخدام المنحنى القياسي. انقر على تقرير > إنشاء تقرير، اختر تنسيق Excel لتصدير التقرير. يتضمن التقرير اسم المركب، ووقت الاحتفاظ، ومساحة الذروة، والتركيز، ونسبة RSD، وغيرها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفصل الكروماتوغرافي والتحديد بين ال TAs في HPLC-QQQ-MS
يتم عرض كروماتوجرام MRM نموذجي تم الحصول عليه من تحليل خليط قياسي ومستخلص جذر A.tanguticus في الشكل 3 والشكل 4. تحت ظروف HPLC المثلى، تم فصل جميع قلويدات التروبان المستهدفة الثلاثة: الهيوسيامين، وأنيسودامين، والسكوبولامين، بنجاح خلال 20 دقيقة، مما يدل على الكفاءة العالية للطريقة المطورة. تم تحديد الدقة (Rs) بين السكوبولامين وأنيسودامين بأنها 8....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع تزايد الاهتمام بالمستقلبات الثانوية النباتية، حظيت التقنيات التحليلية للكشف عن القلويات باهتمام كبير. بينما تم تأسيس نظام كروماتوغرافي أساسي لتحليل قلويدات التروبان (TAs)18، تشهد التطورات الحديثة، مثل اعتماد الرحلان الكهربائي الشعري (CE)، وتحسين الأداء الكهربائي في GC–MS وHPLC–MS، وتحديد المركبات الهيكلية الجديدة بما في ذلك السموم التفافية والشبيهة بالتروبينون، على الحاجة إلى مراجعة منهجية لمنهجيات الكروماتوغرافيا الحالية لهذه القلويات11...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا يوجد لدى المؤلفين تضارب مصالح للكشف عنها.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يدعم هذا العمل إدارة مقاطعة سيتشوان للطب الصيني التقليدي (رقم 2024MS562) وبرنامج المواهب شينغلين في جامعة تشنغدو في طب الصيني التقليدي (رقم MPRC2022035). لقد قدرنا حقا الدعم من معهد الابتكار للطب الصيني والصيدلة، جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Agilent MassHunter softwareAgilent Technologies
Agilent ZORBAX SB-C18 columnAgilent Technologies880975-902C18 reversed-phase column, 4.6 × 250 mm, 5 μm
Anisodamine hydrobromideChengdu glip Biotechnology Co., Ltd101-31-5HPLC>98%
Formic AcidSigma-Aldrich5.33002
freeze dryerEYELA, Tokyo, JapanFDU-2110
High-speed universal grinderTaisite Instrument Co., Ltd., Tianjin, China6010210100FW-100,24,000 rpm, 100 g capacity, 80 mesh
HyoscyamineChengdu glip Biotechnology Co., Ltd55449-49-5HPLC>98%
MethanolThermo Fisher Scientific022909.K2
Microporous Membrane 0.22μmMilliporeSLGV033RB
Milli-Q Direct 8 water systemMilliporeSigma, Burlington, MA, USAZRQSVP0JP
Scopolamine hydrobromideChengdu glip Biotechnology Co., Ltd114-49-8HPLC>98%

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ji, P., Yang, X., Zhao, X. Application of metabolomics in quality control of traditional Chinese medicines: a review. Front Plant Sci. 15, 1463666(2024).
  2. Li, S. -S., et al. Phytochemical variation among the traditional Chinese medicine mu dan pi from Paeonia suffruticosa (tree peony). Phytochemistry. 146, 16-24 (2018).
  3. Wang, N., et al. Pinelliae rhizoma alleviated acute lung injury induced by lipopolysaccharide via suppressing endoplasmic reticulum stress-mediated NLRP3 inflammasome. Front Pharmacol. 13, 883865(2022).
  4. Pughaih, T., et al. Tropane Alkaloids: Sources, Chemistry, Pharmacology and Biotechnology. , Nature, Springer. Singapore. (2025).
  5. Chen, C., Wang, B., Xiao, Y., Xiong, F., Zhou, G. Geographical origin discrimination of Anisodus tanguticus (Maxim.): chemometrics methods applied to ICP-OES analysis. Arab J Chem. 17 (5), 105730(2024).
  6. Cardillo, R., et al. Scopolamine, anisodamine and hyoscyamine production by Brugmansia candida hairy root cultures in bioreactors. Process Biochem. 45 (9), 1577-1581 (2010).
  7. Yuan, B., Zheng, C., Teng, H., You, T. Simultaneous determination of atropine, anisodamine, and scopolamine in plant extract by nonaqueous capillary electrophoresis coupled with electrochemiluminescence and electrochemistry dual detection. J Chromatogr A. 1217 (1), 171-174 (2010).
  8. Zhang, P., et al. Simultaneous determination of atropine, scopolamine, and anisodamine from Hyoscyamus niger L. in rat plasma by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry and its application to a pharmacokinetics study: liquid chromatography. J Sep Sci. 37 (19), 2664-2674 (2014).
  9. Chen, C., Wang, B., Li, J., Xiong, F., Zhou, G. Multivariate statistical analysis of metabolites in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher to determine geographical origins and network pharmacology. Front Plant Sci. 13, 927336(2022).
  10. Chen, C., et al. Multivariate statistical analysis of tropane alkaloids in Anisodus tanguticus (Maxim.) Pascher from different regions to trace geographical origins. Acta Chromatogr. 34 (4), 422-429 (2022).
  11. Sawabe, Y., et al. Rapid determination of atropine and scopolamine content in Scopolia extract powder by HPLC. J Nat Med. 65 (2), 395-399 (2011).
  12. Baj, J., et al. Application of HPLC-QQQ-MS/MS and new RP-HPLC-DAD system utilizing the chaotropic effect for determination of nicotine and its major metabolites cotinine,and trans-3′-hydroxycotinine in human plasma samples. Molecules. 27 (3), 682(2022).
  13. Chen, D., et al. Qualitative and quantitative analysis of the major constituents in Shexiang tongxin dropping pill by HPLC-Q-TOF-MS/MS and UPLC-QqQ-MS/MS. Molecules. 20 (10), 18597-18619 (2015).
  14. Huang, Y. -F., et al. Simultaneous determination of twenty-nine active compounds in Fuzhengjiedu granules by HPLC-QQQ-MS/MS. Heliyon. 9 (2), e13675(2023).
  15. Zhang, K. -X., et al. Improved quality control method for prescriptions of Polygonum capitatum through simultaneous determination of nine major constituents by HPLC coupled with triple quadruple mass spectrometry. Molecules. 18 (10), 11824-11835 (2013).
  16. Ding, M., et al. Comprehensive chemical profiling and quantification of Shexiang xintongning tablets by integrating liquid chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-mass spectrometry. Arab J Chem. 16 (3), 104527(2023).
  17. Zhu, L., et al. The QuEChERS method coupled to HPLC-QQQ-MS/MS for the determination of 25 banned pesticide residues in ethnic medicines. Res Sq. , (2022).
  18. Cinelli, M. A., Cline, J., Watson, T. Applications of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in natural products research: Tropane alkaloids as a case study. J Vis Exp. (205), e66620(2024).
  19. Pang, Y., Huang, Y. -K., Li, F., Yang, F. -Q., Xia, Z. -N. Rapid screening and evaluation of antioxidants in alkaloid natural products by capillary electrophoresis with chemiluminescence detection. Anal Methods. 8 (35), 6545-6553 (2016).
  20. Voeten, R. L. C., Ventouri, I. K., Haselberg, R., Somsen, G. W. Capillary electrophoresis:trends and recent advances. Anal Chem. 90 (3), 1464-1481 (2018).
  21. Pellati, F., Benvenuti, S. Chromatographic and electrophoretic methods for the analysis of phenetylamine alkaloids in Citrus aurantium. J Chromatogr A. 1161 (1), 71-88 (2007).
  22. Cirlini, M., et al. A sensitive UHPLC-ESI-MS/MS method for the determination of tropane alkaloids in herbal teas and extracts. Food Control. 105, 285-291 (2019).
  23. Wojakowska, A., et al. Structural analysis and profiling of phenolic secondary metabolites of Mexican lupine species using LC-MS techniques. Phytochemistry. 92, 71-86 (2013).
  24. Shimizu, T., Watanabe, M., Fernie, A. R., Tohge, T. Targeted LC-MS analysis for plant secondary metabolites. Methods Mol Biol. 1778, 171-181 (2018).
  25. Mennickent, S., De Diego, M. Analytical Method Validation as the First Step in Drug Quality Control. Quality Management and Quality Control - New Trends and Developments. , IntechOpen. London, UK. (2019).
  26. Yang, S. H., Wang, J., Zhang, K. Validation of a two-dimensional liquid chromatography method for quality control testing of pharmaceutical materials. J Chromatogr A. 1492, 89-97 (2017).
  27. Zhang, X., et al. HPLC with chiral stationary phase for separation and kinetics study of aspartic acid epimerization in peroxiredoxin 2 active site peptide. J Pharm Biomed Anal. 247, 116247(2024).
  28. Lu, W., et al. Metabolite measurement: pittfalls to avoid and practices to follow. Annu Rev Biochem. 86, 277-304 (2017).
  29. Leopold, J., Popkova, Y., Engel, K. M., Schiller, J. Recent developments of useful MALDI matrices for the mass spectrometric characterization of lipids. Biomolecules. 8 (4), 173(2018).
  30. Parasuraman, S., et al. An overview of liquid chromatography-mass spectroscopy instrumentation. Pharm Methods. 5 (2), 47-55 (2014).
  31. Alanazi, S. Recent advances in liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS) applications in biological and applied sciences. Anal Sci Adv. 6 (1), e70024(2025).
  32. Cortese, M., et al. Compensate for or minimize matrix effects? Strategies for overcoming matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry technique: A tutorial review. Molecules. 25 (13), 30-47 (2020).
  33. Wang, L., et al. The interplay between herbal medicines and gut microbiota in metabolic diseases. Front Pharmacol. 14, 1105405(2023).
  34. Musharraf, S. G., et al. Screening of inhibitors of angiotensin-converting enzyme (ACE) employing high performance liquid chromatography-electrospray ionization triple quadrupole mass spectrometry (HPLC-ESI-QqQ-MS). Eur J Pharm Sci. 101, 182-188 (2017).
  35. Liu, H., et al. Integrating qualitative and quantitative assessments of Yougui pill, an effective traditional Chinese medicine, by HPLC-LTQ-orbitrap-MSn and UPLC-QqQ-MS/MS. Anal Methods. 9 (23), 3485-3496 (2017).
  36. Parks, H. M., et al. Redirecting tropane alkaloid metabolism reveals pyrrolidine alkaloid diversity in Atropa belladonna. New Phytol. 237 (5), 1810-1825 (2023).
  37. Yan, Z., et al. Triterpenoid saponins profiling by adducts-targeted neutral loss triggered enhanced resolution and product ion scanning using triple quadrupole linear ion trap mass spectrometry. Anal Chim Acta. 819, 56-64 (2014).
  38. Sosa-Ferrera, Z., Mahugo-Santana, C., Santana-Rodríguez, J. J. Analytical methodologies for the determination of endocrine disrupting compounds in biological and environmental samples. Biomed Res Int. 2013, 674838(2013).
  39. Heyde, B. J., Barthel, A., Siemens, J., Mulder, I. A fast and robust method for the extraction and analysis of quaternary alkyl ammonium compounds from soil and sewage sludge. PLoS One. 15 (8), e0237020(2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Anisodus Tanguticus

مقالات ذات صلة