$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
كفاءة الطلاءات السطحية المضادة للفيروسات
أكدت اختبارات قابلية السطح أن جميع مواد الطلاء التي تم اختبارها لها خصائص مضادة للفيروسات، حيث أظهر طلاء VS أبطأ معدل تعطيل للفيروس (الشكل 2A). أكد التحليل الإحصائي انخفاضا ملحوظا في تركيزات الفيروسات المعدية عند دقيقة و5 دقائق مقارنة بالتركيز الابتدائي لكل طبقة ونظام تحكم (p < 0.001، الشكل 2B، الجدول التكميلي 5). حقق الطلاء السطحي التجريبي القائم على النحاس B4 أسرع انخفاض، حيث خفض عدد الفيروسات المعدية بما يصل إلى ثلاثة مرتبة خلال 5 دقائق، وأصبحت الفيروسات غير قابلة للكشف بعد 15 دقيقة (حد الكشف: 100 PFU/mL). كما حققت الطلاءات الأخرى، A6 وVS-B، تعطيل Phi6 بالكامل خلال 25 و60 دقيقة على التوالي (الشكل 2A).

الشكل 2: التأثير المضاد للفيروسات للطلاءات السطحية على عدوى الفيروس. (أ) فقدان الجسيمات المعدية كدالة للزمن. (ب) نسبة فقدان جسيمات الفيروس المعدي مقارنة بنقطة الدقيقة 0. مواصفات الطلاء مدرجة في الجدول 1 وفي الجدول التكميلي 3. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
مقارنة بالضابطة، خلال أول 5 دقائق، كان تعطيل الفيروس الأقل كفاءة مع الطلاء A6 (p = 0.006 عند دقيقة واحدة و p = 0.012 عند 5 دقائق، الجدول التكميلي 6)، تلاها مباشرة طبقة VS (p = 0.001 عند دقيقة واحدة و p = 0.017 عند 5 دقائق، الجدول التكميلي 6). كان الطلاء B4 أقل من التعطيل مقارنة بالمجموعة عند نقطة الدقيقة الواحدة (p = 0.001، الجدول التكميلي 6) لكنه لم يختلف بشكل ملحوظ عن الضابط عند نقطة الخمس دقائق (p > 0.05، الجدول التكميلي 6). على مدى فترة زمنية أطول، أظهر VS-B زيادة في تعطيل الفيروس مشابها ل B4 و A6. تقدم نتائج مفصلة للتحليل الإحصائي في الجدول التكميلي 6.
تأثير الطلاء المضاد للفيروسات VS-B على فعالية المرشح/ما قبل المرشح
أظهرت التجارب أن جميع المرشحات الثلاثة المسبقة التي تمت دراستها، BP-6 وS-11 وFMR-5، كانت فعالة بنفس القدر في تقليل عدد الفيروسات المعدية التي تمر عبرها بمقدار 1.5–2.0 مرتبة من الدرجة مقارنة بنظام عدم وجود مرشح (الشكل 3A، الجدول التكميلي 7). خفضت مرشحات GF-2 الحمل الفيروسي بمقدار لا يقل عن ستة مرتبة حجم، ولم يتم اكتشاف أي لويحات عدوى لفيروس Phi6 ضمن حد الكشف (المشار إليها كبيانات غير مكتشفة (*) في الشكل 3A).
لم يؤثر طلاء VS-B بشكل كبير على فعالية ترشيح الفيروسات المعدية (الشكل 3B). بالنسبة للمرشحات المسبقة S-11 و FMR-5، كان الفرق في عدد الفيروسات المعدية التي تمر عبر المرشحات المسبقة المطلية وغير المطلية ضمن الانحراف المعياري (SD)، مما يشير إلى عدم أهمية الفرق (الجدول التكميلي 8). ومن المدهش أن المرشح المسبق غير المطلي BP-6 كان أفضل من المرشح المسبق المطلي خلال أول 90 دقيقة. ومع ذلك، ثبت أن الفروق بين المرشحات المسبقة المطلية وغير المطلية غير ذات دلالة إحصائية ضئيلة (p > 0.05، الجدول التكميلي 8).

الشكل 3: متوسط تركيزات فيروس العدوى لفيروس Phi6 المنبوخ على صفائح الانسداد. (أ) لمرشح GF-2، إعداد بدون فلتر، ومرشحات ما قبل الفلتر. (ب) للمرشحات المسبقة فقط. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري (SD)، وأنواع المرشحات مدرجة في الجدول 1. VS-B يشير إلى مرشحات مطلية. نتائج بيانات مرشح GF-2 كانت أقل من حد الكشف ويتم تمييزها بخط منقط. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
أظهرت نتائج تجربة qRT-PCR أن المرشحات المسبقة قللت من أعداد نسخ الجينوم للفيروسات التي تمر عبر المرشحات المسبقة بما يصل إلى مرتبة حجم، بينما أظهر مرشح GF-2 انخفاضا يصل إلى أربعة مرتبة من الحجم مقارنة بنظام عدم وجود مرشح (الشكل 4A، الجدول التكميلي 9). خلال أول 30 دقيقة، ظلت الفروقات بين المرشحات المسبقة وإعداد عدم المرشح صغيرة، بينما من نقطة ال 60 دقيقة، أظهرت المرشحات المسبقة كفاءة ترشيح ميكانيكية متزايدة (الشكل 4A، الجدول التكميلي 10). لم يؤثر طلاء VS-B على رقم نسخ جينوم الفيروس الذي يمر عبر المرشح (الشكل 4B). كانت الفروقات في أعداد نسخ الجينوم تقع ضمن الانحراف المعياري (p > 0.05، الجدول التكميلي 10).

الشكل 4: متوسط تركيزات نسخ جينوم الفيروس لفيروس Phi6 المنبوخ على ألواح الانسجام. (أ) لمرشح GF-2، إعداد بدون فلتر، والمرشحات المسبقة. (ب) للمرشحات المسبقة فقط. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري (SD)، وأنواع المرشحات مدرجة في الجدول 1. VS-B يشير إلى مرشحات مطلية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
يوضح الشكل 3 والشكل 4 أن عدد الفيروسات المعدية (PFU/mL) مقارنة بإجمالي نسخ جينوم الفيروس التي تمر عبر المرشح أصغر بحوالي مرتبة بمقدار 2 للمرشحات المسبقة ومرشح GF-2، وأصغر برتبة واحدة فقط بدون مرشح. يشير هذا إلى أن تأثير الترشيح، حتى مع تدفق الهواء اللطيف، يمكن أن يكون مدمرا ميكانيكيا لجزيئات الفيروس، مما يؤدي إلى فقدان العدوى.
استنادا إلى تدفق الهواء التجريبي (2 لتر/دقيقة) ومساحة سطح المرشح المقدرة (~20 سممربع)، كانت سرعة الوجه تقريبا 0.01–0.02 م/ث. تتراوح قيم المسامية النموذجية للمرشحات الليفية من حوالي 0.7 إلى 0.98، حسب المادة وكثافة التعبئة، بينما تظهر مرشحات الألياف الزجاجية من نوع HEPA مسامية أقل (~0.7–0.9) مقارنة بالمرشحات الاصطناعية المفتوحة (~0.85–0.98)47,48. بالنظر إلى مسامية المرشح وظروف التدفق الداخلية، قدرت السرعة التداخلية داخل مصفوفة المرشح بأنها أعلى قليلا من سرعة الوجه (0.02–0.03 م/ث). باستخدام سماكات المرشح ودمج عوامل الالتواء (1.2–2.0)، قدر زمن الإقامة الفعال لجزيئات الهباء الجوي داخل هيكل المرشح بحوالي 0.03 إلى 0.4 ثانية49. تشير أوقات التفاعل دون الثانية إلى أن الاتصال بين الفيروس والسطح مؤقت للغاية، مما يحد من مساهمة الطلاءات المضادة للفيروسات أثناء الترشيح أحادي المرور.
تأثير الطلاء المضاد للفيروسات مقابل الطلاء على الفلاتر المستخدمة
تمت دراسة مرشحات GF-2 المطلية وغير المطلية المستخدمة في أجهزة تنقية الهواء لمدة 3 أشهر في المطعمين المختارين (الشكل التكميلي 3 والشكل التكميلي 4) لقدرتها على الترشيح. تحت نفس الظروف التجريبية، مرت مرشحات غير مستخدمة وغير مغلفة (ضابطة) عبر 1.23 × 102 PFU/مل من الفيروسات المعدية. الفلاتر المستخدمة غير المطلية من مطعم الطعام الراقي وكافتيريا الموظفين مررت ~3 PFU/ml و2.3 ×1 PFU/mL من الفيروسات المعدية على التوالي. على النقيض من ذلك، تجاوزت الفلاتر المستخدمة والمغطاة ب VS من مطعم فاخر وكافتيريا الموظفين 5.3 × 10PFU/مل و4.6 × 101 PFU/mL من الفيروسات المعدية على التوالي (الشكل 5). لوحظت فروق ذات دلالة إحصائية في أعداد الفيروسات المعدية بين المرشحات، حيث أظهرت مرشحات GF-2 غير المطلية المستخدمة لمدة 3 أشهر الانخفاض الأكثر وضوحا (الشكل 5؛ χ2(2) = 11.432، p = 0.022، الجدول التكميلي 11). النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام مرشحات GF-2 المطلية التي عمرها 3 أشهر قدمت نتائج مشابهة لمرشحات GF-2 غير المطلية غير المستخدمة عند p > 0.05 (الجدول التكميلي 12).

الشكل 5: تركيزات الفيروسات المعدية بعد اختبار فلاتر مستخدمة منذ ثلاثة أشهر. كل نقطة بيانات تمثل متوسط ثلاث تجارب والانحراف المعياري المحسوب عبر ثلاث تكرارات. VS = عامل سطح النحاس والفضة آمن للفيروسات؛ GF-2 = مرشح ألياف زجاجية مزدوج الطبقات GF-2، غير مطلي (فلتر من نوع HEPA)؛ تظهر المربعات فترة ثقة 95٪ للمتوسط، وهو الخط الأسود بين فترة الثقة الأدنى والعلوي. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري (SD) لكل نوع من المرشحات. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
تعرض نتائج qRT-PCR للمرشحات المستخدمة وغير المستخدمة والمطلية وغير المطلية في الشكل 6. أظهرت بيانات qRT-PCR لمرشحات الضابط غير المستخدمة وغير المطلية 2.7 × 103 نسخ/مل من نسخ الجينوم الفيروسية. أظهرت بيانات الفلاتر المستخدمة غير المطلية من مطعم الطعام الراقي وكافتيريا الموظفين 3.6 × 102 نسخ/مل و2.4 × 103 نسخ/مل من النسخ الفيروسية على التوالي، بينما أظهرت الفلاتر المستخدمة المطلية ب VS من مطعم الطعام الراقي وكافتيريا الموظفين 2.8 × 103 نسخ/مل و4.6 × 103 نسخ/مل من النسخ الفيروسية على التوالي (الشكل 6). كان فلتر GF-2 المستخدم غير المطلي من مطعم الطعام الفاخر أكثر كفاءة بشكل ملحوظ في تقليل أعداد نسخ الجينوم الفيروسي مقارنة بالفلتر المستخدم غير المطلي من كافتيريا الموظفين (p = 0.012)، أو الفلتر المستخدم المطلي من مطعم فاخر (p < 0.001)، أو الفلتر المستخدم المطلي VS من كافتيريا الموظفين (p = 0.005) (الجدول التكميلي 13 والجدول التكميلي 14). ومع ذلك، مقارنة بفلتر GF-2 غير المستخدم وغير المطلي، لم يحقق فلتر GF-2 غير المطلي المستخدم من المطعم الراقي فرقا ذا دلالة إحصائية (p>0.05). تعرض نتائج التحليل الإحصائي التفصيلي في الجدول التكميلي 14.

الشكل 6: تركيز أعداد نسخ الجينوم الفيروسي بعد اختبار مرشحات مستخدمة منذ ثلاثة أشهر. تمثل كل نقطة بيانات متوسط ثلاث تجارب والانحراف المعياري المحسوب. VS = عامل سطح النحاس والفضة آمن للفيروسات؛ GF-2 = مرشح ألياف زجاجية مزدوج الطبقات GF-2، غير مطلي (فلتر من نوع HEPA)؛ تظهر المربعات فترة ثقة 95٪ للمتوسط، وهو الخط الأسود بين فترة الثقة الأدنى والعلوي. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري (SD) لكل نوع من المرشحات. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
لتوضيح الفروقات الملحوظة في أداء المرشحات، أجريت اختبارات الكراهية للماء وحساسية الدهون. جميع الفلاتر المستخدمة في مطعم الطعام الفاخر وكافتيريا الموظفين أظهرت مقاومة عالية للماء على كلا السطحين (الجانب الداخلي—مواجه لتدفق الهواء الداخل؛ الجانب الخارجي—المواجه لتدفق الهواء الخارجي)، مع زاوية التلامس الأولية لقطرات الماء التي تجاوزت باستمرار 120 درجة، كما تم التقاطها في الصور (غير موضحة). أظهرت قياسات زمن اختراق قطرات المياه (WDPT) خاصية قوية لمقاومة المياه، حيث تجاوزت جميع القيم 7200 ثانية. كان التفاوت بين الاختبارات المتكررة أكبر من التفاوت بين أنواع المرشحات، ربما بسبب الاضطرابات الميكانيكية في المرشحات المستخدمة. وبالتالي، لم يتم اكتشاف فروق ذات دلالة إحصائية بين المرشحات التي استخدمت هذه الطرق.
تم تقييم حساسية الدهون بتطبيق قطرات زيت اللفت على أسطح المرشح. أظهرت المرشحات غير المطلية بشكل ثابت حساسية دهنية منخفضة، مع بقاء زاوية تلامس القطرات فوق 120 درجة طوال الاختبار. على النقيض من ذلك، أظهرت مرشحات Viral Safe-Safe انتشارا سريعا للقطرات، مع زاوية تقريبية أقل من 30 درجة بعد 60 ثانية من التطبيق (الشكل التكميلي 5). لا يزال من غير الواضح ما إذا كان هذا الارتفاع في حساسية الدهون ناتج عن الطلاء نفسه أم عن عملية التطبيق.
توفر البيانات
البيانات الخام التي تدعم نتائج هذه الدراسة متاحة في الملف التكميلي 1.
الشكل الإضافي 1: غرفة الرذاذ المخصصة ومكوناتها.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل الإضافي 2: صور للمرشحات، والمرشحات المسبقة، والطلاءات. (أ) فلتر بوليستر FMR-5 المسبق، (ب) فلتر بوليستر BP-6 المسبق، (ج) فلتر بوليستر S-11 المسبق، (د) فلتر GF-2 من ألياف زجاجية مزدوجة الطبقات. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل الإضافي 3: تصميم غرفة المطعم الفاخر حيث استخدمت أجهزة تنقية الهواء (انظر جدول المواد)، مع تمييز مستطيلات زرقاء. مستطيلات صفراء تحدد الطاولات، ومستطيل رمادي داكن يحدد الباب. مربع واحد في الشبكة يمثل 1 متر2. حجم الغرفة ~60 مترمربع. يزور حوالي 30 ضيفا يوميا. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل الإضافي 4: مخطط مصنع الحلويات، كافتيريا الموظفين، حيث استخدمت أجهزة تنقية الهواء (انظر جدول المواد)، مع تمييز مستطيلات زرقاء. المستطيلات الصفراء تحدد الطاولات، والمستطيلات الرمادية الداكنة تحدد الأبواب، والمستطيلات الرمادية تحدد طاولات الخدمة الذاتية، والمستطيلات السوداء تحدد أعمدة الدعم. مربع واحد في الشبكة يمثل 1 متر2. حجم الغرفة ~160 متر2. يزور حوالي 20-50 ضيفا يوميا. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الشكل الإضافي 5: قطرات زيت اللفت (50 ميكرولتر) على أسطح مرشح GF-2 التي تم استخدامها في اختبارات المطاعم. كانت المرشحات التي غطيت بطبقة Viral Safe (VS) (1–5) أقل مقاومة للدهون بشكل ملحوظ مقارنة بالمرشحات غير المطلية (1، 6–7). تم التقاط الصور من خلال عين مجهر التحضير بتكبير 40 ضعف بعد 60 ثانية من تطبيق قطرة. "In" تشير إلى جانب الفلتر الذي يدخل إليه تيار الهواء؛ "خارج" تشير إلى الجانب الخارج من الهواء. طلاء VS-B موجود على الخارج. 1 يشير إلى فلتر قديم مستخدم من مطعم فاخر؛ كان المرشحان 2 و3 من نوع VS-B من الفلاتر المطلية المستخدمة في مطعم الفاخرة؛ كان الفلاتر 4 و5 مطلية ب VS-B مستخدمة في كافتيريا الموظفين؛ و6 و7 كانتا مرشحات غير مطلية تستخدم في كافتيريا الموظفين. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 1: معلومات دورة qRT-PCR. درجة حرارة الغطاء 105 درجة مئوية، 45 دورة، جمع البيانات خلال خطوة 62 درجة مئوية. مقتبس من جريجوروفا وآخرون. 43. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 2: معلومات تمهيدية qRT-PCR. مقتبس من جريجوروفا وآخرون. 43. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 3: وصف مفصل لمواد الطلاء المستخدمة في هذه الدراسة. التركيبات الكيميائية الدقيقة للطلاءات مملوكة للشركة المصنعة (شركة كلين تاتش الطبية المحدودة). تعتمد الأوصاف على التصنيف الوظيفي والمكونات النشطة المعروفة (النحاس و/أو الفضة). يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 4: وصف مفصل لمواد المرشح المستخدمة في هذه الدراسة. لا يتم الكشف بالكامل عن تركيبات المواد الدقيقة للمرشحات المسبقة التجارية من قبل المصنعين؛ تعتمد الأوصاف على المواد النموذجية المستخدمة في أنظمة الترشيح والتكييف والتهوية وتكييف الهواء والخصائص الهيكلية الملحوظة. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 5: إحصائيات الاختبار: تحليل كروسكال-واليس للعدوى الفيروسية عبر الطلاءات السطحية المضادة للفيروسات. متغير التجميع هو نوع الطلاء. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 6: فروق ذات دلالة إحصائية في العدوى الفيروسية بين الطلاءات عند نقاط زمنية دقيقة و5 دقائق وفقا لنتائج اختبارات Games-Howell المتعددة بعد الاختبار.الدلالة الإحصائية محددة بنعم في أول لوحتين من الجدول، عند نقاط زمنية دقيقة وخمس دقائق. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 7: إحصائيات الاختبار: تحليل كروسكال-واليس للعدوى الفيروسية عبر أنواع المرشحات وحالة عدم وجود مرشح. متغير التجميع هو نوع المرشح. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 8: نتائج اختبارات المقارنات المتعددة لعدوى الفيروسات بين المرشحات المسبقة وإعداد بدون مرشح عند نقاط زمنية 30 دقيقة، 60 دقيقة، 90 دقيقة، 120 دقيقة، 150 دقيقة، و180 دقيقة وفقا لاختبار Games-Howell متعدد المقارنات بعد الاختبار.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 9: إحصائيات الاختبار: نتائج اختبار كروسكال-واليس التي تقيم الفروقات في عدد نسخ الفيروس بين أنواع المرشحات المسبقة، ومرشح GF-2، وإعداد عدم المرشح. متغير التجميع هو نوع المرشح. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 10: نتائج اختبارات المقارنة المتعددة لعدد نسخ الفيروس بين المرشحات المسبقة، ومرشح GF-2، وإعداد بدون مرشح عند 30 دقيقة، 60 دقيقة، 90 دقيقة، 120 دقيقة، 150 دقيقة، و180 دقيقة وفقا لاختبار Games-Howell متعدد للمقارنات بعد الاختبار.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 11: إحصائيات الاختبار: نتائج اختبار كروسكال–واليس التي تقارن بين العدوى الفيروسية بين مرشحات GF-2 غير المستخدمة والمرشحات المستخدمة في المطاعم. متغير التجميع هو نوع المرشح. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 12: نتائج اختبار المقارنات المتعددة للعدوى الفيروسية بين المرشحات المسبق وإعداد الفلاتر بدون مرشح وفقا لاختبار Games-Howell متعدد المقارنات بعد التصويب.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 13: نتائج اختبار كروسكال–واليس التي تقارن بين أعداد نسخ الفيروس بين أنواع المرشح المسبق، ومرشح GF-2، وإعداد عدم المرشح. متغير التجميع هو نوع المرشح. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الجدول التكميلي 14: نتائج اختبار المقارنات المتعددة لأعداد نسخ الفيروس بين المرشحات المسبقة، ومرشح GF-2، وإعداد بدون مرشح وفقا لاختبار Games-Howell متعدد للمقارنات بعد الاختبار.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.
الملف التكميلي 1: البيانات الخام لهذه الدراسة.يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.