يعمل لاكتون السسكويتيربين XTT على تخفيف الاستجابات الالتهابية الناتجة عن عدادات السكريات الدهنية (LPS) في البلعميات. يستهدف XTT IKKα/β لتثبيط إشارات NF-κB دون التأثير على تنشيط MAPK، مما يمارس تأثيرات مضادة للالتهاب قوية في المختبر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
يعمل لاكتون السسكويتيربين XTT على تخفيف الاستجابات الالتهابية الناتجة عن عدادات السكريات الدهنية (LPS) في البلعميات. يستهدف XTT IKKα/β لتثبيط إشارات NF-κB دون التأثير على تنشيط MAPK، مما يمارس تأثيرات مضادة للالتهاب قوية في المختبر.
يرتبط اختلال تنظيم سلسلة العامل النووي κB (NF-κB) ارتباطا وثيقا بتطور الاضطرابات الالتهابية. تعتبر كينازات IκB (IKKs) معروفة جيدا كعوامل مركزية لنشاط NF-κB، مما يجعلها مرشحة علاجية جذابة لعلاج الأمراض الالتهابية. تم توثيق تأثير لاكتون السيسكويتيربين 1β-هيدروكسيل-5α-كلورو-8-إبي-زانثاتين (XTT) لتأثيره القوي ضد السرطان. ومع ذلك، لا تزال فعاليتها المضادة للالتهابات والآليات الجزيئية الأساسية غير واضحة. في هذا العمل، كبح XTT بشكل ملحوظ تخليق أكسيد النيتريك (NO) والبروستاجلاندين E2 (PGE2) في البلاعم المنشطة بواسطة عروسات RAW264.7 المنشطة بواسطة عروسات RAW264.7 المنشطة بالدهون البوليسكاريدية (LPS). كما خفض XTT بشكل كبير مستويات mRNA المحفز بواسطة LPS من إنزيم أكسيد النيتريك المحفز (iNOS)، وإزيم السيكلوكسجيناز-2 (COX2)، وعامل نخر الورم-α (TNF-α)، والإنترلوكين-1β (IL-1β)، والإنترلوكين-6 (IL-6). علاوة على ذلك، خفض XTT مستويات البروتين في iNOS وCOX2 التي استخرجتها معالجة LPS. على المستوى الميكانيكي، لم يغير XTT بشكل ملحوظ نشاط سلسلة كيناز البروتين المنشط بالميتوجين (MAPK). وعلى العكس، كان XTT يمنع بقوة الفسفرة التي تثيرها LPS وتفكيك κBα المثبط (IκBα) عن طريق التفاعل مع IKKα/β، مما يعيق انتقال النواة NF-κB. وعند جمع هذه البيانات مجتمعة، تظهر أن XTT يثير تأثيرات مضادة للالتهابات قوية في المختبر من خلال استهداف IKKα/β وحجب إشارات NF-κB. تشير هذه النتائج إلى أن XTT قد يكون مركبا واعدا رئيسيا لتطوير العوامل المضادة للالتهابات. تتطلب الدراسات الكيميائية الحيوية وداخل الجسم الحية المزيد من الدراسات للتحقق من التثبيط المباشر لIKKα/β والإمكانات العلاجية.
الالتهاب هو عملية بيولوجية منظمة بدقة تمكن الكائنات الحية من الاستجابة للعدوى وإصابات الأنسجة والتحديات البيئية الأخرى1. على الرغم من أن الاستجابات الالتهابية الحادة عادة ما تكون وقائية، إلا أن التنشيط المستمر لمسارات الالتهاب يمكن أن يعطل توازن الأنسجة ويساهم في ظهور وتطور الاضطرابات المزمنة، بما في ذلك مرض الأمعاء الالتهابي (IBD) والتهاب المفاصل الروماتويدي (RA). تشارك العديد من شبكات الإشارات داخل الخلايا في تنظيم الالتهابات، ومن بينها مسار العامل النووي κB (NF-κB) من أكثر المسارات التي تم دراستها بشكل أوسع3.
أعضاء عائلة NF-κB، بما في ذلك p50، p52، p65 (RelA)، RelB، وc-Rel، يعملون كعوامل نسخ ثنائية تنظم التعبير عن الجينات المشاركة في المناعة والالتهاب 4,5. في الظروف الأساسية، تبقى دايمرات NF-κB غير نشطة في السيتوبلازم بسبب ارتباطها بمثبط بروتينات κB (IκB). بعد التحفيز بواسطة وسطاء التهابيين مثل الليبوبوليسكاريد (LPS) أو عامل نخر الورم α (TNF-α)، ينشط مركب كيناز IκB (IKK) ويفسفر IκBα، مما يؤدي إلى انتشاره وتدهوره. تسمح هذه العملية لتجمع مركبات NF-κB في النواة وبدء نسخ الوسطاء الالتهابيين والسيتوكينات6. نظرا لأن التنشيط المفرط أو المستمر ل NF-κB مرتبط ارتباطا وثيقا بمجموعة متنوعة من الأمراض الالتهابية وأمراض المناعة الذاتية، فقد جذب التدخل الدوائي على مستوى إشارات IKK اهتماما كبيرا 7,8,9.
لطالما كانت المنتجات الطبيعية مصادر حيوية لتطوير الأدوية، بما في ذلك العلاجات المضادة للالتهابات10. 1β-هيدروكسيل-5α-كلورو-8-إبي-زانثاثين (XTT) هو لاكتون سيسكويتيربين معزول من زانثيوم سيبيريكوم 11,12. أظهرت أبحاث سابقة أن XTT يثبط تكاثر الخلايا ويحفز الموت المبرمج في خلايا سرطان الخلايا الكبدية البشرية من خلال تنشيط MAPK التابع ل ROS وتنشيط JAK2/STAT3 الناتج عن استنزاف الجلوتاثيون13. ومع ذلك، لا تزال الإمكانات المضادة للالتهابات ل XTT وآلياته الجزيئية المرتبطة بها غير مفهومة جيدا.
تشير النتائج الحالية إلى أن XTT يظهر تأثيرات مضادة للالتهابات بشكل كبير في المختبر. تشير التحقيقات الميكانيكية إلى أن XTT يتفاعل مع IKKα/β ويثبط إشارات NF-κB، مما يثبط الاستجابات الالتهابية في البلعم المنشطة. تشير هذه النتائج إلى أن XTT قد يمثل مركبا واعدا رئيسيا لتطوير العوامل المضادة للالتهابات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شملت هذه الدراسة فقط خطوط خلايا تجارية قائمة ولم تشمل المشاركين البشريين أو العينات السريرية أو التجارب الحيوانية. لذلك، لم تكن الموافقة على أخلاقيات المؤسسات والموافقة المستنيرة مطلوبة. أجريت جميع التجارب وفقا لإرشادات السلامة المختبرية المؤسسية. تم التعامل مع الكواشف الخطرة في أغطية أبخرة مخصصة، مع استخدام معدات الحماية الشخصية (PPE) المناسبة. تم التخلص من النفايات الكيميائية والبيولوجية وفقا للوائح المؤسسات. المواد الكيميائية والمجموعات والكواشف المستخدمة في البروتوكول مدرجة في جدول المواد.
1. زراعة الخلايا
تم شراء بلاعم الفئران RAW264.7، وخلايا سرطان عنق الرحم البشرية من HeLa وخلايا الكلى الجنينية البشرية HEK293T من بنك الخلايا التابع للأكاديمية الصينية للعلوم (شنغهاي، الصين). تم الحفاظ على جميع الخلايا في وسط النسر المعدل (DMEM) من دولبيكو الذي يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و1٪ بنسلين-ستربتومايسين. تم ضبط بيئة الزراعة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون ورطوبة مشبعة.
2. اختبار بقاء الخلايا
تم تقييم فعالية الخلايا من خلال اختبار مجموعة عد الخلايا-8 (CCK-8). تم طلاء خلايا RAW264.7 (2.5 × 104 خلايا/بئر) في صفائح بسعة 96 بئر وزرعت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. ثم عولجت الخلايا بتركيزات متفاوتة من XTT لمدة 24 ساعة مع أو بدون LPS (0.5 ميكروغرام/مل). تم تحسين تركيز LPS ومدة العلاج في التجارب الأولية لتحفيز استجابات التهابية معتدلة دون التسبب في سمية خلوية كبيرة. بعد ذلك، أضيف 10 ميكرولتر من كاشف CCK-8 إلى كل بئر، وتم الحفاظ على اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. تم قياس الامتصاص عند 540 نانومتر باستخدام قارئ الألواح الدقيقة.
3. تحديد مستويات NO و PGE₂ في وسط زراعة الخلايا
تم طلاء خلايا RAW264.7 في ألواح بئر 24 بكثافة 2.5 × 105 خلايا/بئر وزرعت طوال الليل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. تمت معالجة الخلايا مسبقا ب XTT لمدة ساعتين قبل تحفيز LPS أو TNF-α (15 نانوغرام/مل) لمدة 24 ساعة إضافية. تم اختيار فترة ما قبل العلاج لمدة ساعتين لتمكين التفاعل الكافي بين XTT والأهداف الخلوية قبل التحدي الالتهابي. تم قياس مستويات أكسيد النيتريك (NO) والبروستاجلاندين E₂ (PGE₂) في وسط الزراعة وفقا لبروتوكولات الشركة المصنعة.
4. تفاعل بوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)
تم طلاء خلايا RAW264.7 (2 × 106 خلايا) في صفائح ذات 6 آبار طوال الليل وعالجت مسبقا بجرعات مختلفة من XTT لمدة ساعتين قبل تحدي LPS (0.5 ميكروغرام/مل) لمدة 24 ساعة. تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي باستخدام مادة ترايزول وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم تقييم تركيز ونقاء الحمض النووي الريبي باستخدام مقياس طيفي، واستخدمت عينات بنسب A260/A280 >1.8 للتحليلات اللاحقة.
تم نسخ الحمض النووي الريبي الكلي (2 ميكروغرام) عكسيا إلى cDNA في حجم تفاعل نهائي قدره 20 ميكرولتر باستخدام مجموعة تخليق cDNA. تم إجراء PCR الكمي في الوقت الحقيقي باستخدام كيمياء SYBR Green على نظام كشف PCR في الوقت الحقيقي. كانت تسلسلات التمهيد كما يلي:
خط الهجوم من INOS: 5′-GGA TCT TCC CAG GCA ACC A-3′
عكس iNOS: 5′-AAT CCA CAA CTC GCT CCA AGA TT-3′
COX2 للأمام: 5′-CAA CAC CTG AGC GGT TAC-3′
عكس COX2: 5′-GTT CCA GGA GGA TGG AGT-3′
IL-1β للأمام: 5′-GCC TTG GGC CTC AAA GGA AAG AAT C-3′
العكس IL-1β: 5′-GGA AGA CAC AGA TTC CAT GGT GAA G-3′
IL-6 فوروارد: 5′-TGG AGT CAC AGA AGGT AGT GGC TAA G-3′
العكس IL-6: 5′-TCT GAC CAC AGT GAA TGT CCA C-3′
TNF-α للأمام: 5′-CAC GCT GCT CTT CTG TCT-3′
عكس TNF-α: 5′-GGC TAC AGG CTT GTC ACT C-3′
GAPDH مهاجم: 5′-TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC-3′
عكس GAPDH: 5′-GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG-3′
تم إجراء عملية تضخيم PCR على النحو التالي: إزالة الطبيعة الأولية عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، تلتها 39 دورة من 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية و60 دورة لمدة 30 ثانية. تم حساب مستويات التعبير الجيني النسبية باستخدام طريقة 2−ΔΔCt مع GAPDH كضابط داخلي.
5. البلوتينغ الغربي
بعد العلاج، تم توحيد خلايا RAW264.7 في مخزن RIPA يحتوي على مثبطات بروتياز وفوسفاتاز. تم تحضير هذه المثبطات طازجة مباشرة قبل الاستخدام لمنع تحلل البروتين وإزالة الفسفرة. تم قياس مستويات البروتين الكلية باستخدام مجموعة اختبار BCA. تم فصل كميات متساوية من البروتين بواسطة الرحلان الكهربائي الهلام الدوديسيل كبريت-بولي أكريلاميد 10٪ الصوديوم ونقلها إلى أغشية النيتروسيلولوز. بعد النقل، تم حضن الأغشية بحليب خالي الدسم 5٪ محضر في TBST يحتوي على Tween-20 (TBST) للحجب، ثم تم فحصها بأجسام مضادة أولية (تخفيف بنسبة 1:1,000) طوال الليل عند 4 درجات مئوية. بعد ذلك، تم فحص الأغشية بأجسام مضادة ثانوية متقاربة ببيروكسيداز الفجل الحار (تخفيف بنسبة 1:5,000) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم اكتشاف نطاقات البروتين باستخدام نظام كشف التوألؤ الكيميائي، وتم تحليل شدة الشريط عبر قياس الكثافة.
6. اختبار التألق المناعي
تم زرع خلايا HeLa في صفائح ذات 6 آبار ومعالجتها مسبقا ب XTT (8 ميكرومتر) لمدة 4 ساعات قبل تحفيز TNF-α (15 نانوغرام/مل) لمدة 30 دقيقة. تم اختيار فترة ما قبل الحضانة التي استمرت 4 ساعات لتعظيم تفاعل الأهداف قبل تفعيل NF-κB. تم تثبيت الخلايا ب 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 15 دقيقة ونفرت بنسبة 0.25٪ ترايتون X-100 لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد الحجب باستخدام ألبومين مصل البقري 2٪ (BSA) و10٪ مصل ماعز مخفف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)، تم حضن الخلايا بجسم مضاد أولي مضاد p65 (تخفيف 1:250) طوال الليل عند 4 درجات مئوية، تلاها فحص الجسم المضاد الثانوي المرافق-TRITC (تخفيف 1:1,000) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم صبغ النوى بمادة DAPI (0.5 ميكروغرام/مل) لمدة 5 دقائق في الظلام. تم التقاط صور الفلورة باستخدام مجهر الفلورة. تم اختيار خلايا HeLa لأن نسبة السيتوبلازم إلى النواة الكبيرة لديها تسهل تصور انتقال نووي p65.
7. التجزئة السيتوبلازمية والنووية
تم حضان خلايا HeLa مسبقا باستخدام XTT لمدة 4 ساعات ثم تحفيزها ب TNF-α (15 نانوغرام/مل) لمدة 30 دقيقة. تم جمع الخلايا، وشطفها ب PBS البارد، ومعالجتها لاستخلاص البروتينات السيتوبلازمية والنووية باستخدام مجموعة استخلاص بروتينات نووية وبيتوبلازمية تجارية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء جميع الإجراءات على الثلج للحفاظ على سلامة البروتين.
8. اختبار التحول الحراري الخلوي (CETSA)
تم إجراء CETSA كما تم وصفهسابقا 14. تم جمع حوالي 1 ×10 7 خلايا HeLa وتعليقها في 500 ميكرولتر من مثبطات PBS الباردة التي تحتوي على مثبطات بروتيز، ثم تم تحللها عبر ثلاث دورات تجميد وإذابة في النيتروجين السائل. تم طرد محلل الخلايا عند 20,000 جرام × لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم تقسيم الفائقات الناتجة بالتساوي إلى مجموعتين وعالجت إما ب XTT (100 ميكرومتر) أو DMSO لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم تطبيق XTT (100 ميكرومول) لتعزيز حساسية الكشف في تجارب CETSA. ثم تم جمع العينات في سبعة أنابيب وتسخينها عند درجات الحرارة المحددة لمدة 3 دقائق، تليها الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق أخرى. تم جمع كسور بروتينية قابلة للذوبان لتحليل الضربات المناعية.
9. الالتحام الجزيئي
تم إجراء تحليل الالتحام الجزيئي كما هو موصوف سابقا14. تم استرجاع البنى البلورية ل IKKβ (معرفات PDB: 3BRT و4KIK) من بنك بيانات البروتين (PDB). تمت معالجة هياكل البروتين مسبقا باستخدام PyMOL (الإصدار 2.3.4) لإزالة جزيئات الماء والروابط الأصلية والشوائب السائدة، تلاها إضافة ذرات الهيدروجين. تم حساب شحنات Gastaiger، وتم تحديد الجيوب النشطة باستخدام أدوات AutoDock (الإصدار 1.5.6). ثم تم تخزين هياكل البروتين بصيغة PDBQT.
تم توليد هيكل XTT في Chem3D (الإصدار 15.1) وتم تحسينه عبر تقليل الطاقة. تم تنفيذ الالتحام شبه المرن باستخدام أوتودوك فينا (الإصدار 1.1.2). تم بناء صناديق الشبكة لتغطية الجيوب النشطة بالكامل، بينما بقيت جميع المعايير الأخرى في الإعدادات الافتراضية. تم اختيار أوضاع الالتحام ذات أقل طاقات ارتباط وأكثر التشكيلات استقرارا للتحليل. اعتبرت طاقات الارتباط التي تقل عن −5 كيلو كالوري/مول دلالة على ألفة ارتباط قوية وفقا للمعايير المنشورة. تم استخدام PyMOL أيضا لتصور أنماط الارتباط وتقييم الروابط الهيدروجينية، والتفاعلات الكارهة للماء، وتفاعلات فان دير فال، ومواقع الارتباط المحتملة.
10. التحليل الإحصائي
تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج GraphPad Prism 5.0. تعرض البيانات كمتوسط ± الخطأ المعياري للمتوسط (SEM) من ثلاث تجارب مستقلة. تم تقييم الدلالة الإحصائية باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) تلاه اختبار دنيت بعد الاختبار. تم اعتبار قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
قام XTT بتثبيط إنتاج NO و PGE₂ في البلاعم التحفيزية LPS أو TNF-α RAW264.7
لتحديد ما إذا كانت التأثيرات المضادة للالتهابات ل XTT مستقلة عن السمية الخلوية، تم تقييم بقاء خلايا RAW264.7 بعد علاج XTT في وجود أو غياب LPS. لم يلاحظ أي انخفاض ملحوظ في فعالية الخلايا بتركيزات تتراوح بين 0.5 إلى 8 ميكرومول، مما يشير إلى أن المركب كان مقبولا جيدا تحت ظروف التجارب (الشكل 1). استنادا إلى هذه النتائج، تم اختيار تركيزات تتراوح بين 2–8 ميكرومولار للتحلي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
اللاكتونات السيسكويتربين هي فئة من المنتجات الطبيعية ذات الأنشطة الدوائية المتنوعة، بما في ذلك المطهر، ومضاد الالتهابات، ومزيد الحرارة، وتأثيرات تطهير السموم.15. أظهرت دراسات سابقة أن XTT، وهو لاكتون سيسكويتيربين من نوع الزانثانولايد معزول من Xanthium sibiricum، يظهر تأثيرات قوية مضادة للتكاثر ومؤيدة للاستماتة في خلايا سرطان الخلايا الكبدية البشرية13. قيم هذا العمل الخصائص المضادة للالتهابات ل XTT في بلاعم RAW264.7 المحفزة ب LPS، و...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.
وقد دعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82004031)، ومشروع أبحاث إدارة سيتشوان الإقليمية للطب الصيني التقليدي (رقم 2024MS566)، والبرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين (رقم 2023YFC3504402).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Enhanced chemiluminescence reagent D20A2:D21A2:D22A2:D23A2: D24A2:D25A2:D26A2:D27A2:D28A2: D29A2:D30A2:D29 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P90720 | luminescent signal detection |
| Horseradish peroxidase (HRP)-conjugated secondary antibodies | Signalway Antibody (Nanjing) | L30118 | specifically binds to the primary antibody |
| p65 primary antibody | Bioworld | BS4139 | specifically recognizes NF-κB p65 subunit protein |
| Spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific | NanoDrop 2000 | SCR_018042 |
| 0.45 μM Ployvinylidence fluoride membrane | Millipore | PR05509 | adsorb protein molecules |
| 1β-hydroxyl-5α-chloro-8-epi-xanthatin | Chengdu Institute of Biology | natural monomeric compounds | |
| All-in-One cDNA Synthesis SuperMix | Bimake (Shanghai) | B24408 | reverse-transcribe |
| BAY11-7082 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | SF0011 | IκB/IKK inhibitor |
| Bcl2 antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 32012 | AB_3751037 |
| Bicinchoninic Acid (BCA) kit | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0010S | total protein quantification |
| CCK-8 agent | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | C0038 | cell viability measurement |
| Chemiluminescence detection system | Millipore, Bedford, USA | P90720 | acquire and process luminesence signals |
| COX-2 antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 33345 | AB_3676692 |
| DMSO | Sangon Biotech(Shanghai)Co.,Ltd. | A100231-0500 | solubilize compounds |
| GAPDH antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 41549 | AB_3751036 |
| Gel Imaging Instrument | E-BLOT | Touch Imager Pro | image acquisition and analysis |
| Gradient PCR instrument | Biometra TADVANCED | Biometra Tadvanced 96SG | gradient annealing temperature |
| Griess agent | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | S0021S | NO quantification |
| Human cervical carcinoma HeLa cells | The Cell Bank of Chinese Academy of Sciences | SCSP-504 | Human-derived cells |
| Human TNF-α | Novus Biologicals | 210-TA | pro-inflammatory cytokines |
| iNOS antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 48309 | AB_2943634 |
| Laser Confocal Inverted Microscope | Olympus | FV1000 | SCR_016840 |
| LPS ( E.coli 055:B5) | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd | L6529 | establish inflammatory models |
| Murine macrophage RAW264.7 cells | The Cell Bank of Chinese Academy of Sciences | SCSP-5036 | Mouse-derived cells |
| Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0027 | separate cytoplasmic and nuclear proteins |
| PD98059 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1177 | MEK inhibitor |
| P-ERK (Thr202/Thr185) antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 12548 | detect the phosphorylation level of ERK protein |
| p-IKKα/β (Ser176/Ser177) antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 11931 | AB_3751034 |
| p-IκBα (phospho-Ser32)antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 13776 | AB_3751033 |
| p-JNK (T183/T221) antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 13371 | AB_3718662 |
| p-p38 MAPK (Thr180) antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 11581 | AB_3751032 |
| Prostaglandin E2 Parameter Assay Kit | R&D Systems | KGE004B | AB_2894942 |
| PS1145 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S7691 | specific IKK inhibitor |
| Rapid SDS-PAGE Gel Preparation Kit | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0018S | protein separation |
| Real-Time PCR System | Bio-Rad | CFX96 | SCR_018064 |
| RIPA buffer | Bimake (Shanghai) | P0013C | cell lysis |
| SB203580 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1076 | p38 MAPK inhibitor |
| SP600125 | Selleck Chemicals (Shanghai) | S1460 | JNK inhibitor |
| SYBR Green | Bimake (Shanghai) | B21202 | For real-time quantitative |
| TRITC-conjugated goat anti-mouse IgG | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | A0568 | AB_2893016 |
| TRITC-conjugated second antibody | Beijing Baiao Leibo Technology Co., Ltd. | ZN1992 | AB_3751143 |
| TRIzol Reagent | Invitrogen | 15596026 | total RNA isolation |
| Vinculin antibody | Signalway Antibody (Nanjing) | 41534 | AB_3751035 |