تقيم هذه الدراسة تعبير miR-21-5p، وارتباطه بجزيء التصاق الخلايا 1، وعلاقاته بالهجرة، والتكاثر، وتعبير مؤشرات الالتهاب، والبقاء على قيد الحياة في أنسجة وسلالات خلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
130 مشاهدة
⸱
سبتمبر 11, 2026
* These authors contributed equally
تقيم هذه الدراسة تعبير miR-21-5p، وارتباطه بجزيء التصاق الخلايا 1، وعلاقاته بالهجرة، والتكاثر، وتعبير مؤشرات الالتهاب، والبقاء على قيد الحياة في أنسجة وسلالات خلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا.
تشير الأدلة إلى أن miR-21-5p يعد منظماً جزيئياً هاماً في سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC). جزيء التصاق الخلايا 1 (CADM1) هو كابت محتمل للأورام، ولكن العلاقة التنظيمية بين miR-21-5p و CADM1 لا تزال غير واضحة في تطور سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC). وقد استُخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي بالنسخ العكسي (qRT-PCR) للكشف عن تعبير miR-21-5p و CADM1 في أنسجة وخلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC)؛ وارتباط miR-21-5p بالهدف و CADM1 تم التحقق من ذلك بواسطة مقايسة الجين المراسل لـ luciferase المزدوج؛ وكُشف عن قدرة الخلايا على الهجرة بواسطة مقايسة Transwell؛ كما جُمعت البيانات السريرية المرضية وتحليل البقاء على قيد الحياة لاستكشاف الأهمية السريرية لـ miR-21-5p؛ وحُلل الإثراء الوظيفي للجينات المستهدفة لـ miR-21-5p عن طريق المعلوماتية الحيوية. كان تعبير miR-21-5p في أنسجة سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) أعلى بكثير منه في الأنسجة الطبيعية المجاورة، وكان المرضى الذين يعانون من تعبير مرتفع لـ miR-21-5p لديهم فترة بقاء إجمالية أقصر. يعد التعبير المرتفع لـ miR-21-5p عامل خطر مستقل للبقاء على قيد الحياة لمرضى سرطان الرئة غير صغير الخلايا؛ وقد أدى الإفراط في تعبير miR-21-5p إلى تعزيز هجرة الخلايا في خلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا وزيادة تعبير العوامل الالتهابية؛ وأكدت مقايسة الجين المراسل لـ luciferase المزدوج أن miR-21-5p استهدف بشكل مباشر CADM1الإفراط في تعبير CADM1 ثبّط هجرة الخلايا في خلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) وخفّض من تعبير العوامل الالتهابية؛ وأظهر تحليل المعلوماتية الحيوية أن الجينات المستهدفة لـ miR-21-5p كانت غنية في مسارات تأشير متعددة مرتبطة بحدوث الورم وتطوره. يعز miR-21-5p تطور سرطان الرئة غير صغير الخلايا عن طريق استهداف وتثبيط CADM1 وقد يكون بمثابة مؤشر حيوي إنذاري وهدف علاجي.
يصنف سرطان الرئة عالمياً كأحد الأسباب الرئيسية للوفيات المرتبطة بالسرطان في جميع أنحاء العالم، مع ارتفاع معدلات الإصابة به بشكل مستمر1,2. ومن بين سكان شرق آسيا، تصل معدلات الإصابة والوفيات بسبب سرطان الرئة إلى 22.1 و 15.5 لكل 10,0 رجل، مقابل 158.1 و 87.3 لكل 10,0 امرأة، على التوالي. ويمثل سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) حوالي 80% من جميع أورام الرئة الخبيثة ويشمل ثلاثة أنواع نسيجية فرعية رئيسية3. وبالمقارنة مع سرطان الرئة صغير الخلايا (SCLC) شديد العدوانية، فإن سرطان الرئة غير صغير الخلايا يتطور وينتشر بشكل أبطأ؛ ومع ذلك، تؤدي الأعراض السريرية المبكرة غير الواضحة إلى تشخيص أكثر من ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت مراجعة هذه الدراسة الاستعادية والموافقة عليها من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى Quzhou للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة 20240208). وقد تم الحصول على موافقة مستنيرة مكتوبة من كل مريض مسجل أو من ولي أمره القانوني قبل جمع العينات.
جمع العينات
تم استئصال أنسجة أورام سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) الأولية جراحياً من المرضى المشاركين، بينما جُمعت أنسجة الرئة الطبيعية المجاورة المطابقة لهم بأثر رجعي من المركز الوطني للهندسة البحثية للخزعات السريرية (مدينة Quzhou، مقاطعة Zhejiang، الصين). شملت هذه الدراسة الحشدية ما مجموعه 157 عينة من مرضى NSCLC تم تسجيلهم بالتتابع بين يناير 2019 وديسمبر 2024. تم تبرير حجم العينة ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الارتباط بين تعبير miR-21-5p والخصائص المرضية السريرية لمرضى سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC)
تم تقسيم إجمالي 157 عينة من أورام NSCLC إلى مجموعتين: مجموعة ذات تعبير منخفض لـ miR-21-5p (العدد = 61) ومجموعة ذات تعبير مرتفع (العدد = 96) بناءً على متوسط مستويات miR-21-5p. وكشفت تحليلات مربع كاي (chi-square) عن عدم وجود ارتباطات ذات دلالة إحصائية بين تعبير miR-21-5p وعمر المريض (χ2 = 1.36, P = 0.2435)، أو الجنس (χ2 = 1.06, P = 0.3032)، أو النوع النسيجي (χ2 = 1.09, P = .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أكدت هذه الدراسة بشكل منهجي ارتفاع تعبير miR-21-5p في الأنسجة السريرية لسرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC)، وهو ما ارتبط بتعزيز نسخ العوامل الالتهابية، وزيادة القدرة على هجرة الخلايا وتكاثرها، بينما حددت تجارب لوسيفيراز المزدوج و qRT-PCR وتجارب الإنقاذ جين CADM1 كهدف وظيفي مباشر له. وأشار التنبؤ المعلوماتي الحيوي بشكل أكبر إلى أن الأهداف النهائية لـ miR-21-5p كانت غنية في شلالات MAPK و Ras المسرطنة، مما يوفر دليلاً أولياً على أن محور miR-21-5p/CADM1 قد يكون مشاركاً في مسارات الإشارات المرتبطة بالتطور .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين أي مصالح مالية أو غير مالية ذات صلة للإفصاح عنها.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| فورمالين منظم متعادل بتركيز 10% | Fisher Scientific (Fisherbrand™) | SF10-4 (نموذجي) | مثبت أنسجة؛ تقطيع الأنسجة إلى &سُمك أقل من 5 مم، تُثبَّت في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح بين 14 و26 ساعة |
| طبق زراعة خلايا بـ 24 بئراً | Corning | 3526 | طبق لاستزراع الخلايا المنقولة جينياً وإجراء مقايسة التئام الجروح (الخدش) |
| الخط الخلوي A549 | ATCC (أو مركز شنغهاي للموارد) | CCL-185 | خط خلوي لسرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) لدى البشر (سرطان غدي) |
| طقم فحص CCK-8 | Dojindo | CK04 | الكشف عن التكاثر الخلوي |
| وسط زراعة الخلايا (غير محدد) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | متنوعة (على سبيل المثال، RPMI-1640: 1875093، وF-12K: 212702) | وسط أساسي لخطوط خلايا سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC)؛ وتعتمد التركيبة الدقيقة على خط الخلايا المستخدم |
| cel-miR-39 (عنصر تحكم خارجي مضاف) | GenePharma (شنغهاي، الصين) | مخصص (على سبيل المثال، B010302) | مرجع خارجي لمعايرة تعبير الـ miRNA، يُضاف أثناء عزل الـ RNA |
| أول أكسيد الكربون2 حضّانة (مرطبة) | Thermo Fisher Scientific (Heracell) | Heracell 150i (5016047) | يوفر 37°C، 5% CO22، ورطوبة مشبعة لاستنبات الخلايا |
| البروتين التفاعلي-C/عامل نخر الورم-ألفا (CRP/TNF-α)αأزواج بادئات IL-6 | Sangon Biotech | التخليق المخصص | التسلسلات الكاملة في الملف التكميلي 1 |
| محلول صبغة البنفسج البلوري | Solarbio | G1062 | صباغة الخلايا المهاجرة |
| وسط DMEM | Gibco | 11965092 | لاستنبات خلايا H129/293T |
| طقم مقايسة المراسل لإنزيم اللوسيفيراز المزدوج | Promega | E1910 | الكشف عن المنطقة غير المترجمة '3 لجين CADM1 بنمطيه البري والطافر |
| cel-miR-39 خارجي المنشأ | Qiagen | إضافة معيار داخلي مخصص | أُضيفت خطوة ما بعد عزل الحمض النووي الريبي (RNA) لغرض التنميط (normalization) |
| مصل جنين البقر (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 10437028 | مكمل يُضاف إلى وسط المزرعة بتركيز نهائي 10% لدعم نمو الخلايا |
| طرف ماصة دقيق (على سبيل المثال، 10 µL نصيحة) | Axygen (Corning) | T-300 | تُستخدم لكشط طبقة أحادية من الخلايا يدويًا لإنشاء "جرح" فجوة |
| GAPDH (ضابط داخلي) | موردون متعددون (على سبيل المثال، Sangon Biotech وRiboBio؛ وبادئات مخصصة) | مخصص | الجين المرجعي لمعايرة الـ mRNA المستخدم في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR) |
| GO/KEGG (توصيف clusterProfiler) | Bioconductor | إصدار 2026 | |
| GraphPad Prism | برمجيات GraphPad | v9.5.1 | التمثيل البياني & الإحصاءات المختبرية |
| خط خلايا H129 | ATCC (أو مركز شنغهاي للموارد) | CRL-5803 | خط خلوي لسرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC) بشري مشتق من نقيلة في العقد اللمفاوية |
| مصل جنين البقر المعطل حرارياً | Gibco | 10099141 | تركيز تشغيلي 10% |
| سلالة خلايا HEK-293T | ATCC | CRL-3216 | RRID:CVCL_063؛ تم اختبار تحليل STR شهرياً، وكانت نتيجة الكشف عن الميكوبلازما سلبية |
| مزيج تعبئة الفيروس البطيء | Genecopoeia (أو Takara Bio) | HPK-LvT-10 (Genecopoeia) | توفير بلازميدات التغليف (gag/pol, rev, vsv-g) لإنتاج الفيروسات البطيئة (lentivirus) |
| ناقل الفيروس البطيء-21 (LV-21) | GeneChem (شنغهاي، الصين) أو Genecopoeia | مخصص | ناقل فيروسي بطيء يحتوي على miR-21-5p لإنشاء خطوط خلوية ذات تعبير مستقر |
| ناقل الفيروس البطيء السلبي (LV-NC) | GeneChem (شنغهاي، الصين) أو Genecopoeia | مخصص | ناقل فيروسي لينتي (lentiviral vector) ضابط سلبي بدون إدراج miR-21-5p |
| كاشف ترانسفكشن ليبيدي | Thermo Fisher | L30015 | للتعداء العابر |
| كاشف ترانسفكشن Lipofectamine 30 | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | L30015 أو L3008 | كاشف ترانسفكشن قائم على الدهون؛ بعد 50 ساعة من عملية الترانسفكشن لإجراء التجارب اللاحقة |
| ميثانول | Sinopharm | 67-56-1 | تثبيت الخلايا |
| ميثانول (مثبت/مخف للتصبيغ) | Sigma-Aldrich | 34860 | يُستخدم كمثبِّت أو مخفِّف لصبغة البنفسج البلوري (crystal violet) |
| مثبط miR-21-5p/المثبط السلبي miR-21-5p | GenePharma | التصنيع المخصص | التسلسلات الواردة في الملف التكميلي 1 |
| محاكي miR-21-5p/محاكي ضابط سلبي (mimic-NC) | GenePharma | تخليق مخصص | التسلسلات الواردة في الملف التكميلي 1 |
| miRDB | جامعة واشنطن | الإصدار 6.0 | |
| miRWalk | جامعة هايدلبرغ | الإصدار 3.0 | |
| المركز الوطني لهندسة الخزعات | المركز الوطني لهندسة الخزعات (الصين) | نظرًا لعدم وجود نص مصدر متاح للترجمة، يرجى تزويدي بالنص الذي ترغب في ترجمته إلى اللغة العربية وفقًا للمعايير العلمية والأكاديمية المحددة. | مزود مؤسسي لعينات أنسجة سرطان الرئة مع بيانات سريرية مسجلة وتشخيص نسيجي مرضي |
| أنسجة سرطان الرئة غير صغير الخلايا (من أجل المزرعة الأولية) | شركة Shanghai Rui Bao He Biotechnology Co. | طلب مخصص | مصدر النسيج؛ تمت زراعته في وسط يحتوي على 10% من مصل جنين البقر (FBS) عند 37°Cتُختار الخلايا ذات المورفولوجيا الجيدة والتي تمر بمرحلة النمو اللوغاريتمي لعملية عفن الخلية (Transfection) |
| جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 750 Fast (406984) | الحصول على نواتج التضخيم لتقنية qRT-PCR |
| بنسلين-ستربتومايسين | Solarbio | P1400 | ١٠ وحدة/مل من البنسلين، 100 μg/mL ستريبتومايسين |
| ماصات (أحادية القناة & متعدد القنوات) | Eppendorf | سلسلة ريسيرش بلس (Research Plus) | لضمان التعامل الدقيق مع السوائل في جميع التجارب |
| بوليبرين | Sigma-Aldrich | H9268 | النهائي 5 μg/mL لإصابة الفيروسات البطيئة |
| بيوروميسين | InvivoGen | نمل-بر-1 | 5 μg/mL لفحص الخلايا المستقرة |
| ثنائي هيدروكلوريد البيوروميسين | Thermo Fisher Scientific (InvivoGen) | ant-pr-1 (InvivoGen)؛ P725 (Sigma-Aldrich) | المضاد الحيوي الانتقائي، المستخدم بتركيز 5 μg/mL لإنشاء خطوط خلوية معدلة وراثياً بشكل مستقر |
| R | مؤسسة R | v4.2.1 | الحزمة: clusterProfiler, ggplot2 |
| طقم النسخ العكسي | Takara | RR047 | تفاعل النسخ العكسي بنظام الحلقة الجذعية لـ miRNA، وبنظام oligo(dT) لـ mRNA |
| أنابيب إبندورف (EP) خالية من RNase | Axygen (Corning) | MCT-150-C | أنابيب سعة 1.5 مل خالية من إنزيم RNase لتخزين الحمض النووي الريبي (RNA) ومعالجته |
| وسط RPMI-1640 | Gibco | 11875093 | لاستزراع خلايا A549 |
| si-CADM1 | GenePharma | تخليق مخصص | التسلسلات الواردة في الملف التكميلي 1 |
| si-NC | GenePharma | التخليق المخصص | التسلسلات في الملف التكميلي 1 |
| SPSS | IBM | v26.0 | تحليل انحدار كوكس السريري |
| مزيج SYBR Green qPCR الرئيسي | Roche | 4913914001 | تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR) |
| TargetScan | معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا (MIT) | v8.2 | |
| كاشف استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي (Total RNA) | Takara | 9109 | التحلل القائم على الفينول/الغوانيدين |
| غرفة ترانس-ويل (Trans-well) | Corning (Costar) | 342 (بـ 24 بئراً، 8.0 µm) | لإجراء ترانسفكشن (transfection) للخلايا في وسط زراعي في درجة حرارة الغرفة؛ تُضاف البادئات الكيميائية وتُحضن لمدة 48 ساعة. |
| غرف هجرة الخلايا من نوع Transwell | Corning | 3422 | 8 μm حجم المسام |
| كاشف TRIzol | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 15596026 | استخلاص الحمض الريبي النووي الكلي (Total RNA) من عينات الأنسجة؛ وتقييم جودة الحمض الريبي النووي عن طريق نسب الامتصاص الضوئي OD260/280 وOD260/230 |
| تربسين-إيديتات الكالسيوم ثنائية الصوديوم (0.25%) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 25200072 | لفصل الخلايا عن أوعية الزرع قبل استزراعها في أطباق ذات 24 بئراً |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.