تمت الموافقة على تجارب الحيوانات في هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في مستشفى فواي، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية (رقم الموافقة 0110-1-10-ZX(X)-07). تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للامتثال الصارم للوائح رفاهية الحيوان والإرشادات الأخلاقية لضمان الالتزام بالمعايير ذات الصلة. المواد المستخدمة والمواد المستخدمة مدرجة في جدول المواد. كان الهدف من إنشاء هذا النموذج هو توفير منصة محتملة للتحقيق في تأثير التدفق التنافسي على VGF. لذلك، بعد الانتهاء من ترقيع تحويل مسار الشريان التاجي، لم تكن الشرايين التاجية الأصلية مرتبطة بالقرب من مواقع الأنستوموتيك.
أداء جميع الإجراءات وفقا للوائح السلامة البيولوجية المؤسسية ورفاهية الحيوان. التعامل مع المواد الحادة، والأجهزة الكهربائية، والدم المضاد للتخثر، ودوائر CPB، والمواد البيولوجية باستخدام معدات الحماية الشخصية المناسبة. تأكد من التأريض المناسب قبل استخدام وحدة الجراحة الكهربائية. راقب ACT بعناية بعد الهيبارين الجهازي وقبل بدء CPB. تأكد من إزالة الهواء الكامل لجميع القنيولات والخطوط خارج الجسم قبل بدء CPB لتقليل خطر الانصمام الهوائي.
1. تحضير الحيوانات لبرنامج CABG
- استخدم خنازير باما الصغيرة الذكور الأصحاء، عادة ما يزن 35–40 كجم ويبلغ عمره 10–12 شهرا، ودعهم يتأقلمون مع بيئة السكن لمدة أسبوع قبل الجراحة.
- إجراء الفحص الأساسي، بما في ذلك تسجيل وزن الجسم، وعدد الدم الكامل، والكيمياء الحيوية في المصل، وتخطيط صدى القلب، وتحليل الصدى القلبي (CTA).
2. التخدير والمراقبة
- أوقف التغذية لمدة 8–12 ساعة والماء لمدة 2–4 ساعات قبل التخدير.
- تحفز التخدير عن طريق الحقن العضلي للكيتامين (10 ملغ/كغ) والميدازولام (1 ملغ/كغ) (وفقا للبروتوكول المعتمد مؤسسيا).
- الحفاظ على التخدير باستخدام الإيزوفلوران المستنشق (2٪–3٪) مع تسريب ديكسميديتوميدين (1 ميكروغرام/كجم/ساعة) وبروبوفول (1–2 ملغ/كغ/ساعة).
- تأكد من وجود تخدير كاف من خلال التحقق من استرخاء الفك وعدم وجود استجابة ألم لقرص إصبع القدم.
- قم بعمل شق بطول 4–6 سم في الرقبة لكشف الوريد الوداجي والشريان السباتي.
- تأسيس الوصول الوريدي عبر الوريد الوداجي باستخدام قسطرة وريدية مركزية ثلاثية الأجواء 5 F لمراقبة الضغط الوريدي المركزي (CVP) وإعطاء الدواء.
- حدد الوصول إلى الشريان السباتي باستخدام قسطرة شريانية بوزن 20 جرام لمراقبة ضغط الدم والمعايير الديناميكية الدموية في الوقت الحقيقي.
- إنشاء وصول إلى الشريان الفخذي باستخدام قسطرة شريانية بوزن 20 جرام لمراقبة ضغط الدم في الأطراف السفلية وتشبع الأكسجين.
- إجراء التنبيب الفموي باستخدام أنبوب داخلي بقطر 6.5–8 مم. تأكد من أن تدفق الهواء غير معوق وقدم 100٪ أكسجين.
- قم بعمل شق بطول 2–3 سم في أسفل البطن لكشف جدار المثانة. ثبت المثانة على حواف الشق باستخدام غرز دقيقة، ثم اصنع ناسور المثانة. أدخل قسطرة فولي بقوة 10 فهرنهايت في المثانة، ثم نفخ البالون ب5 مل من الماء المعقم، واسحب القسطرة بلطف حتى يستقر البالون على جدار المثانة. وصل القسطرة البولية بكيس جمع لتصريف البول ومراقبته.
ملاحظة: نظرا لأن الإحليل في الذكور طويلة ومنحنية، يصعب إدخال القسطرة البولية. لذلك، يجب إنشاء ناسور في المثانة لتصريف البول لمراقبة إخراج البول المبكر بعد العملية. يجب إزالة القسطرة في أقرب وقت ممكن، ويفضل خلال 24–48 ساعة بعد الجراحة، بمجرد استيقاظ الخنزير واستقرار ديناميكيا الدموي، وعدم الحاجة إلى مراقبة بول مستمرة.
- راقب باستمرار تخطيط كهربائي القلب، وضغط الشريان الغازي، وSpO2، وثاني أكسيد الكربون 2 في نهاية المد، ودرجة الحرارة، وخروج البول.
3. التعرض الجراحي
- ضع الخنزير في وضعية الاستلقاء على الظهر.
- احلق وتعقيم كامل الصدر الأمامي والجزء العلوي من البطن باستخدام البوفيدون-يود. ثم، غط منطقة الجراحة.
- قم بعمل شق في منتصف المنتصف من منطقة منتصف عنق الرحم إلى أسفل عملية التدرج بوحدة الجراحة الكهربائية (ESU).
- قم بإجراء شق عظم القص الوسيط على طول الخط الأوسط من عملية التكسيفويد إلى الأعلى باستخدام منشار القص. قم بكي حواف القص المقطوعة باستخدام وحدة ESU ووضع شمع العظم على تجويف النخاع لتحقيق التومۇر.
- حافظ على فتح الصدر باستخدام مضخم القص.
4. حصاد قناتين ذاتي التأثير من نوع IMV
- أعط 300 وحدة وحدة لكل كيلوغرام من الهيبارين لعلاج مضادات التخثر الجهازية لمنع الجلطة أثناء الإجراء.
- قم بتشريح الأنسجة المحيطة ب IMV باستخدام وحدة ESU. اقطع الفروع الجانبية بالمقص وحقق الهيموستازية باستخدام وحدة ESU.
- قم بتثبيت الطرف البعيد من IMV الأيسر باستخدام مشبك دموي. قم بعمل شق بمشرط قريب جدا من المشبك. أدخل إبرة غسيل غير حادة عبر الشق وثبته بخياطة بولي بروبيلين غير ممتصة 5-0. بعد الربط، اقطع تماما الطرف البعيد لحركة IMV اليسرى.
- تأكد من أن قناة الوريد المحصودة بطول مناسب (حوالي 7–8 سم). ثبت الطرف القريب من IMV الأيسر باستخدام مشبك دموي. اقطع الطرف البعيد من IMV إلى موقع التثبيت، واربط الطرف القريب بخياطة بولي بروبيلين غير قابلة للامتصاص 5-0. يجب أن يكون طول الميكروفون الصناعي الذي تم حصاده بنجاح من 7 إلى 8 سم، خاليا من التشنجات أو التواء واضح، وبدون نزيف جانبي ظاهر.
ملاحظة: جدار IMV رقيق وعرضة للتشنجات. يجب تجنب الإمساك المباشر، والجر المفرط، والتمدد عالي الضغط. يجب أن تتعامل الأنسجة المحيطة مع القناة كلما أمكن، وتخزن فورا في محلول ملحي بارد جدا للهيبارين-بافارين بعد الحصاد.
- ضع الميكروفون الأيسر في محلول ملحي طبيعي بارد جدا للهيبارين-بابافيرين (30 ملغ بابافيرين و2500 وحدة هيبارين مذابة في محلول ملحي طبيعي بسعة 500 مل).
- احصد القيمة الصحيحة باستخدام نفس الإجراء.
5. إنشاء وبدء عملية تحويل مسار القلب والرئة (CPB)
- افتح التامور طوليا وعلقها بخياطات الشد.
- تأكد من تفعيل وقت التجلط (ACT) > 480 ثانية.
- ضع غرزتين متمحورتين من الخيط باستخدام غرز بولي بروبيلين غير ممتصة 5-0. قم بإنشاء قناة شريانية مركزية باستخدام قناة شريانية بدرجة حرارة 18 فهرنهايت. بعد إزالة الهواء بشكل كامل، قم بتوصيل القنية الشريانية بالخط الشرياني لدائرة تحويل مسار القلب والرئة.
- قم بتثبيت قنية وريدي بقطر 24 فهرنهايت في الأذين الأيمن وربطها بالخط الوريدي.
- ابدأ CPB. قم بتأسيس تدفق شريان تدريجي، يليه تصريف وريدي. زيادة تدفق المضخة خلال الدقائق القادمة وفقا لضغط الشريان النظامي، والعودة الوريدية، ومستوى الخزان، ومعايير التروية العالمية.
ملاحظة: نظرا لأن خنازير باما المصغرة لديها حجم دم صغير نسبيا، يجب أن تكون دائرة CPB جاهزة بشكل كاف ب 2 لتر من محلول رينجر الحلي و500 ملغ من ميثيل بريدنيزولون. إذا حدث تخفيف دموي مفرط، قد ينظر في نقل الدم عند الحاجة.
6. تثبيت الأبهر العرضي وتوقف الشلل القلبي
- ضع قنية القلب السابقة في جذر الشريان الأبهر عبر خياطة على شكل حقيبة يسيب. اربط قناة القلبي العضلي بخط القلب.
- قم بتثبيت الشريان الأبهر الصاعد في موقع بين القنية الشريانية وموقع الوصول إلى النضل القلبي.
- تحفز توقف القلب باستخدام محلول سانت توماس معدل بارد بدرجة 4 درجات مئوية (10–15 مل/كغ). ضع طبقة الثلج على سطح القلب لتبريد سريع وحماية عضلة القلب.
ملاحظة: تم تحضير محلول سانت توماس وفقا لما ذكرته شركة فايزر مستشفى فايزر US Plegisol، NDC 00409-7969-05: كل 100 مل يحتوي على كلوريد الصوديوم 643 ملغ، وكلوريد البوتاسيوم 119.3 ملغ، وكلوريد المغنيسيوم سداسي هيدرات، وديهيدرات كلوريد الكالسيوم 17.6 ملغ في الماء للحقن، مع إضافة 10 مل من بيكربونات الصوديوم 8.4٪ إلى كل 1000 مل مباشرة قبل الاستخدام.
7. التشريح البعيد لطعوم IMV
- حقن محلول ملحي عادي بحرارة 4 °C من هيبارين-بابافيرين (معد كما هو موضح في الخطوة 4.5) في الطعم عبر إبرة غسيل غير حادة لفحص التسرب، قص الطرف الحر، وضع 8-0 خياطة البولي بروبيلين غير القابلة للامتصاص.
- افتح LCX بمقص جراحي دقيق. أدخل تحويلة داخل المضيء.
- استخدام 8-0 خياطة البولي بروبيلين غير القابلة للامتصاص، وإجراء تشريح من طرف إلى جانب بين أحد طرفي طعم IMV وLX باستخدام تقنية خياطة المظلة.
- أزل التحويلة. حقن دم ذاتي الهيبارين في طعم IMV لتوسيع الوعاء وطرد أي هواء محبوس وفحص أي تسرب في مواقع التشريح والفروع الجانبية. بعد حقن الدم الذاتي الموجه للهيبارين، يجب أن تنتفخ الطعمة بسلاسة دون تضيق بؤري أو التواء أو تسرب من الفروع الجانبية أو التشريح البعيد. أكمل عملية التشريح بين الرقعة IMV وLCX.
ملاحظة: يتم الحصول على الدم الذاتي الهيباريني مباشرة من دائرة CPB. يجب أن يكون الحجم الكلي للدم الذاتي الهيبارين على الأقل 50 مل، ويجب ضبط الحجم الدقيق لكل حقنة حسب انتفاخ الطعم وتسرب الطعوم من الطعوم أو مواقع التخدير.
- استخدم نفس الطريقة لتخدير أحد طرفي الطعم الآخر من IMV إلى جانب ال LAD.
8. التشريح القريب لطعوم IMV
- أزل قناة القلب البلجي. أنشئ فتحة في ذلك الموقع باستخدام ثقب 3.5 مم.
- حقن محلول ملحي طبيعي للهيبارين-بابافيرين بدرجة حرارة الغرفة (مع نسب الهيبارين، بابافيرين، والمحلول الملحي الطبيعي كما هو موضح في الخطوة 4.5) في طعم IMV منحن إلى LAD عبر إبرة غبيض غير حادة. بعد أن يتم توسيع الطعم الصناعي الصناعي، قم بتثبيته جزئيا واقطع الطرف المتصل بإبرة التدفق غير الحادة. قم بتقليم الطرف الحر بمقص الأنسجة.
ملاحظة: تجنب استخدام محلول ملحي عادي هيبارين-بافارين بدرجة 4 °C في هذه الخطوة لتقليل تشنج الطعم. يجب تحديد حجم الحقن المحدد للمحلول الملحي الطبيعي للهيبارين-بافارين بناء على الكمية المطلوبة للحفاظ على انتفاخ طعم IMV.
- قم بقص جزء من القسطرة الشريانية وربطها بفتحة البطين اليسرى. بعد الاتصال، أدخل القسطرة الشريانية في الشريان الأبهر من خلال الفتحة المثقوبة.
- معالجة الطعم IMV المبشرة إلى LCX بنفس الطريقة الموضحة في الخطوة 8.2.
- اصنع فتحة على الجانب الأيسر من جذر الأبهر باستخدام ثقب 3.5 مم.
- قم بإجراء تشريح من طرف إلى جانب للطرف الحر من طعم IMV، ثم تم تبريده إلى LCX إلى الفتحة في الجانب الأيسر من جذر الأبهر، وترك التشريح غير مكتمل.
- أدخل قسطرة فتحة القلب اليسرى في جذر الشريان الأبهر من خلال هذه الفتحة المجهزة.
- قم بإجراء تشريح من طرف إلى جانب للطرف الحر من تطعيم IMV، مغطى بجانبي إلى الفتحة الأخرى في جذر الأبهر.
- أزل قسطرة فتحة القلب اليسرى. ثبت كلا طعيمي IMV باستخدام مشابك دموية جراحية دقيقة. أكمل الورقات الحامية لكلا طعمتي IMV إلى الشريان الأبهر.
ملاحظة: قبل إعادة التروية، يجب أن تبقى كلتا الطعمتين من الورع الصناعي بدون توتر أو انحناءات، ويجب ألا تظهر الحامية القريبة والبعيدة أي تسرب واضح.
9. إعادة التروية، الفطام من CPB، وإزالة القنية
- حرر المشبك الأبهر العرضي وأعد تدخيله للقلب.
- ضع 8-0 إضافي غرز البولي بروبيلين غير الماصة في مواقع الأناستوتوموتيك أو على طول طعوم IMV حسب الحاجة لتحقيق الهيموساز.
- الفطام من CPB بمجرد أن يصبح الخنزير مستقرا ديناميكيا دمويا ويستعيد القلب وظيفته الكافية.
- قم بإزالة القنية من الشريان الأبهر والأذين الأيمن، وتأمين التواء الدموي في جميع مواقع الكانوليشن.
- بعد الفصل عن CPB، قيم كلا الطعمين باستخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية أثناء العمليات وفقا للبروتوكول المؤسسي القياسي. استخدم تصوير دوبلر الملون لتحديد إشارات تدفق الدم داخل طعوم الشريان الأبهر إلى LAD ومن الشريان الأبهر إلى LXX، وتسجيل موقع الطعم، واتجاه التدفق، والضربة النوعية. إذا كان ذلك متاحا، قم بإجراء قياس تدفق زمن العبور (TTFM) لتقييم تدفق الطعم الكمي.
10. التواء الدموي وإغلاق الصدر
- الحصول على تداخل دموي دقيق عند الفتحات النسبية الأبهرية القريبة، والانقراض التاجي البعيد، وأحواض حصاد الأوردة الثديية الداخلية، ومواقع التدخين الأبهر والأذيني، وحواف فتحة القص.
- أدخل أنبوبين تصريفين.
- أعد تقريب عظم القص وإغلاق العضلة، اللفافة، الأنسجة تحت الجلدية، والجلد في طبقات.
- انقل الخنزير إلى غرفة تعافي تحت المراقبة.
11. الرعاية والمتابعة بعد العملية
- حافظ على الدعم الحراري باستمرار باستخدام وسادات التدفئة أو بطانيات تدفئة الهواء القسري للحفاظ على درجة حرارة جسم الخنزير الأساسية بين 37.0–38.5 درجة مئوية.
- سجل كمية السوائل التي يتناولها نموذج الخنزير، ومستوى الوعي، ومعدل ضربات القلب، وضغط الدم الشرياني وضغط الأوردة المركزية، وعدد الدم الكامل، ونتائج الغازات اليومية.
- توفير دعم التهوية الميكانيكية باستخدام الأكسجين بنسبة 100٪ في المرحلة المبكرة بعد العملية لضمان تبادل غاز مستقر ومنع تضيق الأوعية الرئوية الناتج عن نقص الأكسجة. قم بفطام الحيوان من جهاز التنفس وإزالة أنبوب القصبة الهوائية بمجرد استئناف الخنزير التنفس التلقائي القوي والمنتظم، وإظهار رد فعل بلع وقائي، وتحقيق نتائج مرضية لغازات الدم الشريانية.
- الوقاية المضادة للميكروبات بعد العملية: أعط سيفوروكسيم الصوديوم (3–5 ملغ/كغ) كل 8–12 ساعة لمدة 48–72 ساعة بعد الجراحة. قيم الحيوانات يوميا بحثا عن علامات العدوى. افحص موقع شق القص وقنوات التصريف يوميا بحثا عن إفرازات أو خراجات غير طبيعية.
- قيم علامات الألم لدى الحيوان كل 2-4 ساعات باستخدام مقاييس ألم السلوك القياسي للخنزير. راقب العلامات الشائعة لألم ما بعد قطع القص، بما في ذلك النطق، أو الوضعية المنحنية، أو التردد في الحركة، أو طحن الأسنان، أو العزلة الاجتماعية. أعط الأفيونات أو الأدوية المضادة للالتهاب غير الستيرويدية (NSAIDs) بناء على سلوك الحيوان لضمان تخفيف الألم الكافي والتعافي السلس.
- قم بتعديل الأدوية الفعالة للأوعية الدموية (مثل الدوبامين، الإبينفرين) ودعم السوائل للحفاظ على ضغط دم شرياني مستقر (>70 ملم زئبق).
- تقييم فعالية الطعم بعد العملية بواسطة CTA في اليوم الأول واليوم 28 بعد العملية وفقا لبروتوكول التصوير المؤسسي القياسي.