سلطعون الأمريكية حدوة حصان ، الليمول polyphemus ، يمكن القول إن المصدر الأكثر ملاءمة لكميات كبيرة من الدم من أي اللافقارية. دم بسيط في التركيب ، مع نوع واحد فقط في خلية تداول العام ، وخلية أميبية الشكل المحبب ، وثلاثة فقط من البروتينات وفرة في البلازما ، هيموسيانين ، والبروتينات سي التفاعلي ، وα2 macroglobulin. ويتم جمع الدم من القلب ويتم فصل خلايا الدم والبلازما بواسطة الطرد المركزي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
كوكتيل من الدم والسرطان حدوة الحصان الأميركي ، الليمول Polyphemus
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سلطعون حدوة حصان لديها أفضل نظام المناعة ويتميز أي اللافقارية طويلة الأمد. وقد سهلت هذه الدراسة من الحصانة في سرطان حدوة حصان من سهولة في جمع كميات كبيرة من الدم والبساطة من الدم. سرطان حدوة حصان فقط إظهار نوع خلية واحدة في التداول العام ، وخلية أميبية الشكل المحبب. البلازما ومحتوى الملح من مياه البحر وثلاثة فقط من البروتينات وفيرة ، هيموسيانين وهو البروتين الجهاز التنفسي ، والبروتينات سي التفاعلي ، والتي تعمل في تدمير لحل الخلايا من الخلايا الخارجية ، بما في ذلك الخلايا البكتيرية ، وα2 macroglobulin ، مما يحول دون البروتياز غزو الجراثيم. ويتم جمع الدم من خلال ثقب في القلب مباشرة في ظل الظروف التي تقلل من التلوث lipopolysaccharide (الملقب ، الذيفان الداخلي ، LPS) ، وهو منتج من البكتيريا سالبة الجرام. ويمكن أن تسفر الحيوانات الكبيرة 200-400 مليلتر من الدم. لدراسة البلازما ، وعلى الفور إزالة خلايا الدم من البلازما بواسطة الطرد المركزي والبلازما ويمكن بعد ذلك مجزأة الى البروتينات المكونة لها. ودرس ملائم خلايا الدم مجهريا عن طريق جمع كميات صغيرة من الدم إلى LPS خالية متساوي التوتر المالحة (0.5 M كلوريد الصوديوم) في ظل الظروف التي تسمح الفحص المجهري المباشر من خلال وضع واحدة من أكثر LPS خالية coverglasses على الثقافة السطحية الطبق ، ثم تصاعد تلك coverglasses في غرف الملاحظة البسيطة التالية مرفق الخلية. والثانية لإعداد الملاحظة المباشرة هو جمع 3 -- في طبق الجنين LPS خالية 5 مل من الدم ومن ثم explanting شظايا amebocytes المجمعة إلى الدائرة التي السندويشات في النسيج الفاصل بين شريحة وساترة ملف. في هذا التحضير ، وترحيل amebocytes متحركة على سطح ساترة ، حيث يمكن بسهولة أن تكون الملاحظة. نظام تخثر الدم ينطوي على تجميع amebocytes وتشكيل لتجلط خارج الخلية من البروتين ، coagulin ، والتي يتم تحريرها من حبيبات إفرازية من خلايا الدم. التحليل الكيميائي الحيوي لخلايا الدم يتطلب أن تغسل التجميع وتحبب لا يحدث ، والذي يمكن أن يتحقق عن طريق جمع الدم إلى 0.1 وحدات التخزين من 2 ٪ توين - 20 ، 0.5 M LPS خالية من كلوريد الصوديوم ، M تليها الطرد المركزي من الخلايا والغسيل مع 0.5 كلوريد الصوديوم.
البروتوكول
التشريحية ملامح السلطعون حدوة حصان ذات الصلة إلى نزيف (الشكل 1)
الشكل 1
- الشعب الثلاث الرئيسية في الجسم ، من الأمامي إلى الخلفي ، هي prosoma (P) ، وopisthosoma (O) ، والدبير (T) 1.
- الهوام....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك أربعة أنواع من سرطان حدوة الحصان ، polyphemus الليمول من الساحل الشرقي لأمريكا الشمالية وثلاثة من الأنواع التي تتراوح من اليابان إلى خليج البنغال. يتم التعرف على الحيوانات باعتبارها "حفرية حية" لأنه تم العثور على نماذج مماثلة من حفريات وتشريحيا 445000000 27 عاما مضت. سلطعون حدوة حصان تمثل حيوان طويل الأمد ، وتتطلب 10-13 سنة لتصل إلى مرحلة النضج والمعيشية لا يقل عن 20 سنة 28. وإن كان قد تعرض لحصاد واسعة كطعم لصيد الأسماك ، وثعبان البحر محارة 29 ،.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وأيد البحوث الأصلي الموصوفة أعلاه ، منح NSF 0344630.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- Lochhead, J. H. Selected Invertebrate Types. Brown, F. A. , John Wiley and Sons, Inc. New York, NY. 360-381 (1950).
- Shuster, C. N. The circulatory system and blood of the horseshoe crab Limulus polyphemus L.: a review. US Dept Energy, Fed Regul. Comm. , Washington. (1978).
- Conrad, M. L., Pardy, R. L., Wainwright, N., Child, A., Armstrong, P. B.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
