كروماتوغرافيا العمود

1. ملاط هلام السيليكا

1. صب هلام السيليكا في قارورة إرلينماير. يجب أن يكون وزن مادة التعبئة حوالي 50 ضعف وزن العينة التي يتم فصلها. إذا كانت المركبات التي يتم فصلها لها قيم R_f متشابهة جدا ، فقد يتطلب الأمر استخدام كمية أكبر من السيليكا لكل عينة ، وهذا هو الحال في هذا المثال.
   1. ضع 10 جم من السيليكا في قارورة إرلينماير ، حيث يتم عزل 50 مجم من العينة (45 مجم من الفلورينون و 5 مجم من رباعي الفينيل بورفيرين).
2. أضف نظام المذيبات (الهكسان / ثنائي كلورو الميثان ، 70٪: 30٪) إلى قارورة Erlenmeyer التي تحتوي على هلام السيليكا. أضف ما يكفي من المذيبات للتأكد من أن كل هلام السيليكا قد تم إذابته جيدا. لن تذوب السيليكا ، لكن الخليط سيكون ملحوظا بصريا عند إذابته. بمجرد إضافة المذيب ، قم بتدوير قارورة Erlenmeyer للتأكد من أن كل السيليكا قابلة للذوبان جيدا.

2. إعداد العمود

1. حدد العمود بالحجم المناسب. عادة يجب ملء العمود في منتصف الطريق تقريبا بملاط هلام السيليكا. كلما كبرت العينة التي يتم تنقيتها ، زاد حجم العمود المطلوب.
2. قم بتوصيل الجزء السفلي من العمود بقطعة من الصوف الزجاجي. باستخدام قضيب طويل ، تأكد من تثبيت الصوف بإحكام في الجزء السفلي من العمود فوق محبس مباشرة.
3. بمجرد أن يصبح الصوف في مكانه ، ضع طبقة رقيقة من الرمل فوق الصوف الزجاجي.
   ملاحظة: إذا كان العمود مزودا بفريت زجاجي فوق محبس ، فيجب حذف هذه الخطوة.
4. قم بتثبيت العمود في الوضع الرأسي على حامل حلقي.
5. باستخدام قمع ، اسكب الملاط المحضر من هلام السيليكا برفق في العمود. قد تحتاج إلى إضافة مذيب إضافي لنقل الملاط من قارورة Erlenmeyer إلى العمود. باستخدام ماصة ، اغسل أي هلام سيليكا يلتصق بجوانب العمود.
   1. عندما يستقر هلام السيليكا في العمود ، اضغط برفق على جوانب العمود للتأكد من أن هلام السيليكا يحزم بإحكام ويستبعد أي فقاعات هواء.
6. افتح محبس التثبيت واترك المذيب يجف في قارورة Erlenmeyer نظيفة حتى قبل أن يلتقي هلام السيليكا ومقدمة المذيب. يجب ألا يجف هلام السيليكا أبدا حتى يكتمل الإجراء.
7. ضع طبقة رقيقة من الرمل فوق هلام السيليكا ( الشكل 1 ). باستخدام ماصة ، اغسل أي رمل قد يكون عالقا على جوانب العمود.
8. صفي أي مذيب إضافي حتى يجف الرمل ، ولكن ليس وصولا إلى طبقة هلام السيليكا.

الشكل 1. الإعداد المناسب لتجربة كروماتوغرافيا العمود قبل إضافة العينة.

3. إضافة العينة إلى العمود

1. قم بإذابة العينة بأقل كمية ممكنة من المذيبات (باستخدام نفس المذيب الذي تم استخدامه لصنع ملاط هلام السيليكا).
2. باستخدام ماصة، أضف العينة برفق إلى أعلى العمود.
3. بمجرد وضع العينة على الجزء العلوي من العمود ، افتح محبس واترك المذيب يجف من خلال طبقة الرمل ولكن ليس طبقة هلام السيليكا. استخدم كمية صغيرة جدا من المذيبات لغسل أي عينة قد تكون متشبثة بجوانب العمود. قم بتصريف هذا المذيب الإضافي من خلال طبقة الرمل أيضا.

4. مسح العينة من خلال العمود

1. باستخدام ماصة ، أضف برفق 4-5 مل من المذيب بطريقة لا تزعج طبقة الرمل.
2. ضع قمعا في الجزء العلوي من العمود واملأ ما تبقى من العمود ببطء شديد وبلطف بالمذيب.
3. افتح المحبس واترك المذيب يجف عبر العمود.
4. ابدأ في جمع المرحلة المتنقلة أثناء تصريفها من العمود إلى أنابيب الاختبار.
   1. يجب وضع أنابيب الاختبار في رف أنبوب الاختبار بطريقة متسلسلة.
5. أضف مذيبا إضافيا إلى الجزء العلوي من العمود حسب الحاجة حتى يتم التخلص من جميع المركبات المرغوبة من العمود.

5. استعادة المكونات

1. إذا كانت المركبات ملونة ، فيمكن التعرف عليها بصريا. ومع ذلك ، إذا كانت المركبات عديمة اللون ، فسيتعين التعرف عليها باستخدام ضوء المرئي (UV) (إذا كانت المركبات تحتوي على اقتران) أو مع البقعة المناسبة. يمكن التحقق من نقاء المركبات باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.
2. حدد أنابيب الاختبار التي تحتوي على المركبة (المركبات) المطلوبة.
3. ادمج جميع الكسور التي تحتوي على مركب (مركبات) معزولة مطلوبة في قارورة قاع دائري (RB) موزونة مسبقا. افعل ذلك لكل مركب يتم عزله.
4. تبخر المذيب عن طريق وضع قارورة RB على المبخر الدوار.
5. بمجرد إزالة كل المذيب ، قم بوزن RB مع المنتج المجفف واطرح الوزن الأولي ل RB للحصول على عائد.