Name: التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-06T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: تعلم عزل خلايا الدم الأولية من نخاع عظام الفئران وتحويلها إلى خلايا صارية باستخدام الإنترلوكين-3، ثم إجراء التحويل الكهربي بكفاءة 30% لدراسة وظائف الجينات في المناعة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

حصاد نخاع العظام من Femurs وظنبوب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوة الأولى من هذا الإجراء هو الحصاد نخاع العظم من femurs وظنبوب من 6 -- 12 أسبوعا الماوس القديم (نحن نستخدم BALB / ج الفئران ولكن يمكنك أن تفعل هذا الإجراء مع أي سلالة الماوس). لتبدأ ، الموت ببطء الماوس عن طريق الاستنشاق CO 2 (لن يظهر). عظم الفخذ والظنبوب الحصاد من رجليه الخلفيتين كل منها. ثم ، مع شفرة حلاقة ، وقطع كل نهاية femurs لإزالة مفاصل الورك والركبة وكشف نقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بطريقة مماثلة ، وقطع كل نهاية ظنبوب لإزالة الركبة والكاحل والمناطق المجاورة لفضح نخاع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ حقنة 3 مل مع إبرة عيار 26 وملء مع RPMI تستكمل مع FBS 10 ٪ ، والبنسلين ، وستربتوميسين ، وبيتا المركابتويثانول - (BME = 100 أوقية). باستخدام الملقط ، وعقد على مدى عظم طبق بتري تحتوي RPMI وسائل الإعلام. إدراج إبرة حقنة في واحدة من نهاية العظام وتضغط على المكبس لطرد نخاع العظام. يمكن نقل إبرة حقنة صعودا وهبوطا داخل العظم لاخراج نخاع المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الإجراء للعظام في كل شيء ، ومن ثم المضي قدما في إنشاء الثقافات. </li></ol> إنشاء الثقافات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإنشاء الثقافات نخاع العظام ، وماصة للنخاع العظمي مسح صعودا وهبوطا عدة مرات لتفريق النسيج في التعليق الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان تصفية 70 ميكرون على رأس أنبوب مخروطي 50 مل وإضافة تعليق الخلية إلى التصفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف طبق بيتري مرة واحدة مع RPMI ، ثم تضاف إلى تصفية شطف ميكرون 70. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام المطاط في نهاية المكبس من المحاقن 1 مل ، طحن قطع نخاع العظام المتبقية على رأس تصفية 70 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يغسل مرة واحدة مع مرشح RPMI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل تصفية ، أجهزة الطرد المركزي للتعليق في 1200 دورة في الدقيقة خلية لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل بيليه الخلية عن طريق إعادة التعليق في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. نحصل عادة ~ 90 مليون خلية من عظام one الماوس ، (اثنان زائد femurs ظنبوب اثنين). بعد عد الخلايا ، وأجهزة الطرد المركزي من جديد في 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا في كمية صغيرة من RPMI وقسامة لهم في قوارير تحتوي على ما يكفي من زراعة الأنسجة RPMI بحيث التركيز النهائي هو 1 مليون خلية لكل مليلتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة السيتوكينات لتعزيز تطوير نوع من الخلايا اهتمامك. في هذه الحالة ، يتم إضافة خلوى انترلوكين - 3 (IL - 3 = 10 نانوغرام / مل) لتشجيع تنمية قعدات والخلايا البدينة. للحصول على قعدات ، يحضن لمدة 10 يوما. للخلايا البدينة ، احتضان لمدة 5 اسابيع. عندما توليد الخلايا البدينة ، ينبغي أن يتم تغيير وسائل الإعلام وIL - 3 مرة واحدة في الاسبوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هنا نظرة على كيف يجب أن تظهر الخلايا البدينة بعد الطلاء. هذه الصورة تدل على تمايز الخلايا في نخاع الأسسة الصاري والخلايا البدينة 10 يوما بعد إضافة انترلوكين - 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم الحصول على نوع من الخلايا المطلوبة ، المضي قدما في خطوة electroporation. </li></ol> Electroporating خلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء الخطوة electroporation ، وتحديد عدد الخلايا في قارورة الثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعادة electroporated الخلايا في مناطق ذات كثافة من 10 مليون دولار لكل مل ، ونقل ذلك عدد الخلايا المطلوبة لأنابيب مخروطية وأنابيب الطرد المركزي في 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الطرد المركزي ، نضح وسائل الإعلام ، وغسل الخلايا مع 1X PBS ، ومرة ​​أخرى في أجهزة الطرد المركزي 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح في برنامج تلفزيوني وإضافة بيو راد electroporation بولسير جين العازلة لجعل التعليق خلية من 10 مليون خلية لكل مليلتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إعادة التعليق الخلايا ، إضافة DNA البلازميد المطلوب عند تركيز النهائي من 10 إلى 20 ميكروجرام لكل مليلتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 150 microliters لتعليق خلية في آبار من اختيارك على طبق electroporation 96 - جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع لوحة في قاعة electroporation وحة MXcell وإغلاق الغطاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل ترنسفكأيشن من الخلايا البدينة ، يجب أن تكون مبرمجة على بروتوكول electroporation في MXcell إلا باستخدام بروتوكول مسبقا أو تخزينها. التحسين من خلال التجارب اكتشفنا أن أعلى كفاءة الخلايا البدينة ترنسفكأيشن تحدث باستخدام مربع بروتوكولات نبض الموجة. فإننا سوف تختلف الظروف electroporation على لوحة لتسليم 300V/20ms ، 350/15ms ، 350V/20ms ، والبقول 350V/10ms موجة مربع في 2000uF و 1000 أوم. مرة واحدة وقد تم تعيين البروتوكول وتحميلها على الجهاز ، اضغط على &quot;نبض&quot; لelectroporate الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد اكتمال electroporation ، ونقل الخلايا إلى نسيج لوحة الثقافة. نحن عادة نقل كل electroporation ميكروليتر 150 عينة لبئر في لوحة نسيج الثقافة 48 - جيدا يحتوي على 300 microliters RPMI (تستكمل مع 10 ٪ FCS والبنسلين والستربتوميسين ، وبيتا المركابتويثانول) ب 10 نانوغرام لكل مليلتر انترلوكين - 3. يتم تحضين الخلايا ليلا 37 درجة مئوية ، ثم يعاير 24 ساعة في وقت لاحق للتعبير والقمع. </li></ol> ترانsfection النتائج يظهر صورة مجهرية الفلورسنت من الخلايا بعد electroporation ناجحة باستخدام 20 ميكروجراما لكل مل GFP البلازميد في الفيديو. ويمكن استخدام نظام الكفاءة electroporation ترنسفكأيشن MXcell من حوالي 30 ٪ يمكن الحصول عليها. نظام يسمح لك أن تختلف الظروف لتحقيق أقصى قدر من الكفاءة الخاص ترنسفكأيشن ، مع الحفاظ على بقاء الخلية.

كما يظهر المزيد من المعلومات الجينومية وتطوير أدوات جديدة مثل سيرنا ، أصبح استخدام الخلايا ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية أكثر أهمية من أي وقت مضى إلى مزيد من فهمنا للأمراض المسالك ، وتفاعلات البروتينات والبروتين ، ونقل الإشارة. ويتم الحصول على الخلايا الأولية مباشرة من أنسجة أو سوائل وزراعتها في المختبر. ويمكن التلاعب بها هذه الخلايا في عدد من الطرق ، بما في ذلك من خلال إدخال المادة الجينية الخارجية. أصبح من الواضح بشكل متزايد أن الطريقة الأكثر فعالية لإدخال الحمض النووي البلازميد أو سيرنا داخل الخلايا الأساسي هو electroporation. Electroporation يعرض الخلايا لنبضات كهربائية من أجل زيادة عابر نفاذية غشاء الخلية ، مما يسمح الأحماض النووية خارجية لدخول الخلية. يمكن تحسين هذا الأسلوب من ترنسفكأيشن لاستيعاب الاختلافات بين أنواع مختلفة من الخلايا / خطوط ، وبالتالي يمكن استخدامها لtransfect الخلايا البدنية ، فضلا عن غيرها من نخاع العظم أي المستمدة من الخلية. وعلاوة على ذلك ، خلافا لفيروسي بوساطة ترنسفكأيشن ، electroporation لا تفرض قيودا على حجم الحمض النووي transfected ، ولا تتطلب تحضيرا واسعة النطاق. على النقيض من الدهون بوساطة ترنسفكأيشن ، يمكن أن تكون أقل سمية electroporation ، ولا يؤدي في محاصرة endosomal للحامض النووي transfected. وقد وضعت الحيوي راد نظام electroporation MXcell خصيصا لهذه الخلايا. ويسمح لك MXcell تختلف الظروف لتحقيق أقصى قدر من الكفاءة والصلاحية الخاص ترنسفكأيشن الخلية. من أجل تحسين الكفاءة وتقليل ترنسفكأيشن موت الخلايا ، وعدد كبير من المعلمات electroporation بما في ذلك الجهد ، يمكن تعديل السعة ، والمقاومة ، وطول النبضة وتقييمها.

<table><tbody><tr><td>نظام التثقيب الكهربائي Gene Pulser MXcell</td><td>Bio-Rad</td><td>165-2670</td><td></td></tr><tr><td>محلول التثقيب الكهربائي Gene Pulser</td><td>Bio-Rad</td><td>165-2677</td><td></td></tr></tbody></table>

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لelectroporation

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

أصبح من الواضح بشكل متزايد أن electroporation هي الطريقة الأكثر فعالية لإدخال الحمض النووي البلازميد أو سيرنا داخل الخلايا الأولية. وضعت خصيصا لجين electroporation MXcell بولسير النظام وعازلة لجين electroporation بولسير transfect الأحماض النووية في خلايا الثدييات والتي يصعب transfect الخلايا ، مثل الفيديو cells.This الابتدائي ووقف يوضح كيفية تأسيس الخلية الأولية الثقافات المكونة للدم من نخاع عظام الفئران ويعد بعد ذلك لelectroporation في النظام MXcell. نبدأ من خلال عزل عظم الفخذ والساق. ويتم حصاد ثم نخاع العظام من عظم الفخذ والساق على حد سواء ويتم تأسيس الثقافات. ثم يتم transfected مثقف خلايا نخاع العظام وتحليلها.

يصف هذا الإجراء كيفية تأسيس الخلية الأولية الثقافات المكونة للدم من نخاع عظام الفئران وتبعتها ترنسفكأيشن باستخدام الجينات electroporation MXCell بولسير النظام.

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

بات من الواضح بشكل متزايد أن التثقيب الكهربائي هو الطريقة الأكثر فعالية لإدخال الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين البلازميدي (plasmid DNA) أو الحمض النووي الريبوزي التدخلي الصغير (siRNA) في الخلايا الأولية. إن جهاز Gene Pulser...

تبدأ هذه الإجراءات بحصاد عظام الفخذ والظنبوب من الفئران. وبعد إزالة مفاصل الورك والركبة والكاحل، يتم عزل النخاع عن طريق حقن وسط RPMI في الطرف المفتوح للعظم. وبعد الحصول على معلق من الخلايا المفردة، يتم تمايز خلايا نخاع العظم إلى خلايا صارية، ثم تُوضع في أطباق التثقيب الكهربائي ذات 96 بئراً، ومن ثم يتم إجراء عملية عفن (transfection) لها.باستخدام نظام التثقيب الكهربائي Gene Pulse أو MX Cell. باستخدام بروتوكولات نبضات الموجة المربعة، يمكن تحقيق كفاءات ترنسفكشن تصل إلى حوالي 30%. تتمثل الخطوة الأولى من الإجراء في حصاد نخاع العظم من عظم الفخذ وظنبوب فأر يتراوح عمره بين 6 إلى 12 أسبوعاً.للبدء، يتم القتل الرحيم للفأر عن طريق استنشاق CO2، ثم تُجمع عظمة الفخذ والساق من الأرجل الخلفية لكل فأر. بعد ذلك، وباستخدام شفرة الحلاقة، يتم قطع كل طرف من عظمة الفخذ لإزالة مفاصل الورك والركبة وتعريض النخاع بطريقة مماثلة. ثم يتم قطع كل طرف من عظمة الساق لإزالة المناطق المجاورة للركبة والكاحل وتعريض النخاع.بعد ذلك، أحضر حقنة مزودة بإبرة مقاس 26.5، واملأها بوسط RPMI المكمل بـ 10%FBS، والبنسلين، والستربتومايسين، وbeamer، وcapita ethanol، وL-glutamine. وباستخدام الملقط، ثبت العظمة فوق طبق بتري يحتوي على وسط RPMI. أدخل إبرة الحقنة في أحد طرفي العظمة واضغط على المكبس لشطف نخاع العظم.يمكن تحريك إبرة المحقنة لأعلى ولأسفل داخل العظم لشطف النخاع المتبقي. كرر هذه العملية لجميع العظام، ثم انتقل إلى مرحلة إنشاء مزارع نخاع العظم. قم بسحب نخاع العظم الذي تم شطفه ودَفعه لأعلى ولأسفل عدة مرات لتفتيت الأنسجة وتحويلها إلى معلق خلوي.ثم ضع مرشحاً بمسامية 70 ميكرون فوق أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر وأضف معلق الخلايا إلى المرشح. بعد ذلك، اشطف طبق بتري مرة واحدة باستخدام وسط RPMI. ثم أضف سائل الشطف إلى المرشح 70 ميكرون، وباستخدام الطرف المطاطي لمكبس حقنة سعة 1 مليلتر، قم بسحق قطع نخاع العظم المتبقية فوق المرشح 70 ميكرون.اغسل المرشح مرة واحدة باستخدام RPMI بعد غسله. قم بطرد تعليق الخلايا مركزياً بسرعة 1200 RPM لمدة خمس دقائق. اغسل كتلة الخلايا المترسبة عن طريق إعادة تعليقها في PBS.قم بعد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemocytometer). نحصل عادةً على ما يقرب من 90 مليون خلية من عظام فأر واحد، من عظمي الفخذ وعظمي الساق. بعد عد الخلايا، قم بطردها مركزياً مرة أخرى بسرعة 1200 RPM لمدة خمس دقائق.أعد تعليق الخلايا في كمية صغيرة من وسط RPMI ووزعها في دوارق زراعة الأنسجة، بحيث تحتوي على كمية كافية من وسط RPMI ليكون التركيز النهائي 1 مليون خلية لكل ملليلتر. ثم أضف السيتوكينات لتعزيز نمو نوع الخلايا المطلوب. في هذه الحالة، يتم إضافة السيتوكين interleukin three لتعزيز نمو الخلايا القاعدية والخلايا الصارية؛ وللحصول على الخلايا القاعدية يتم التحضين لمدة 10 أيام، أما بالنسبة للخلايا الصارية فيتم التحضين لمدة خمسة أسابيع عند توليد الخلايا الصارية.يجب تغيير الوسط الغذائي وIL three مرة واحدة أسبوعياً. إليكم نظرة على المظهر الذي يجب أن تبدو عليه خلايا نخاع العظم مباشرة بعد الزرع. توضح هذه الصورة تمايز خلايا نخاع العظم إلى خلايا قاعدية وخلايا صارية بعد 10 أيام من إضافة interleukin three.بمجرد الحصول على نوع الخلايا المطلوب، انتقل إلى خطوة التثقيب الكهربائي. لبدء خطوة التثقيب الكهربائي، حدد عدد الخلايا في المزرعة. عادةً ما يتم إجراء التثقيب الكهربائي لخلايا الدورق بكثافة 10 مليون خلية لكل ملليلتر.قم بنقل عدد الخلايا المطلوب إلى أنابيب مخروطية، ثم قم بطرد الأنابيب مركزياً بسرعة 1200 RPM لمدة خمس دقائق. بعد الطرد المركزي، اسحب الوسط الزرعي، واغسل الخلايا باستخدام XPBS واحد، ثم قم بالطرد المركزي مرة أخرى بسرعة 1200 RPM لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، اسحب PBS وأضف محلول التوازن الخاص بعملية التثقيب الكهربائي BioRad gene pulsar لتحضير معلق خلوي بتركيز 10 مليون خلية لكل ملليلتر.بعد إعادة تعليق الخلايا، أضف الحمض النووي البلازميدي المطلوب بتركيز نهائي يتراوح من 10 إلى 20 micrograms per milliliter. امزج محلول الخلايا بلطف، ثم وزع 150 microliters من معلق الخلايا في الآبار المختارة في لوحة التثقيب الكهربائي ذات 96 بئراً. بعد ذلك، ضع لوحة التثقيب الكهربائي في حجرة لوحات MXL وأغلق الغطاء قبل البدء في عملية ترانسفكشن خلايا نخاع العظم والتثقيب الكهربائي.يجب برمجة البروتوكول في جهاز MXL، ما لم يتم استخدام بروتوكول مسبق الضبط أو مخزن؛ ومن خلال تجارب التحسين، اكتشفنا أن أعلى كفاءات عفن الخلايا (transfection) لخلايا نخاع العظام تحدث باستخدام بروتوكولات نبضات الموجة المربعة. سنقوم بتغيير ظروف التثقيب الكهربائي على اللوحة لإرسال نبضات موجة مربعة بقيمة 2000 micro phs في 1000 ohms. بمجرد ضبط البروتوكول وتحميله على الجهاز، اضغط على زر النبض (pulse) لمعالجة الخلايا، وبعد اكتمال عملية التثقيب الكهربائي، انقل الخلايا إلى لوحة زراعة الأنسجة.عادةً ما نقوم بنقل كل عينة تخثير كهربائي بحجم 150 µL إلى بئر في طبق زراعة أنسجة يحتوي على 48 بئراً، حيث يحتوي كل بئر على 300 µL من وسط RPMI مع 10 ng/mL من Interleukin three. تُحضن الخلايا طوال الليل عند درجة حرارة 37 °C، ثم تُفحص بعد 24 ساعة لتقييم التعبير والتثبيط. هذه صورة مجهرية فلورية للخلايا.بعد إتمام عملية التثقيب الكهربائي بنجاح باستخدام 20 µg/mL من بلازميد GFP، وذلك بواسطة نظام التثقيب الكهربائي MX cell، يمكن الحصول على كفاءات ترانسفكشن تصل إلى حوالي 30%. يتيح لك هذا النظام تغيير الظروف لزيادة كفاءة الترانسفكشن إلى الحد الأقصى مع الحفاظ على حيوية الخلايا. ويعد نظام MX cell مفيداً بشكل خاص للخلايا الثديية الأولية مثل هذه الخلايا المكونة للدم في الفئران.لقد عرضنا لكم للتو كيفية عزل خلايا نخاع العظم من الفئران ونقل الجينات إلى الخلايا الصارية المتمايزة باستخدام نظام MX للتثقيب الكهربائي للخلايا. هذا كل شيء. شكرًا لمشاهدتكم، وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

the-preparation-primary-hematopoietic-cell-cultures-from-murine-bone

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذا الإجراء يوضح كيفية استخدام الجينات electroporation MXcell بولسير النظام بسرعة وبسهولة تحديد أفضل الظروف لelectroporation الليفية الماوس الجنينية (MEFs) أو الخلايا الأولية الأخرى. وتناقش أيضا اعتبارات المشاكل المرتبطة في شريط الفيديو.

باستخدام الجينات Electroporation MXcell بولسير النظام لTransfect الخلايا الأولية ذات الكفاءة العالية

يصف هذا الإجراء وسيلة لعزل والثقافة الجهاز الفئران كورتي مع أو بدون حوف ودوامة لولبية العقدة العصبية. نظهر أيضا طريقة للتعبير عن الجينات مراسل الخارجية في جهاز ازدراع كورتي بواسطة electroporation.

الابتدائية الثقافة وElectroporation البلازميد الجهاز الفئران كورتي.

تم وصف طريقة لتحليل التوزيع من الأسلاف نخاع العظام المكونة للدم في التدفق الخلوي، وكذلك لعزل بكفاءة عالي النقاء الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs). ويستند أساسا لإجراء العزل في تخصيب المغناطيسي للخلايا + C-كيت والخلية فرز لتنقية HSCs للدراسات الخلوية والجزيئية.

المظهري التحليل وعزل الخلايا الجذعية المكونة للدم الفئران والأسلاف النسب، الملتزم

بروتوكول لسريع كريسبر/Cas9-بوساطة تعطيل الجينات في الماوس والخلايا المكونة للدم الابتدائي البشرية الموصوفة في هذا المقال. وقدم ريبونوكليوبروتينس Cas9-سجرنا عبر انهانسر مع سجرناس التي تم إنشاؤها عن طريق النسخ في المختبر و Cas9 التجارية. وتتحقق الكفاءة العالية التحرير مع ضيق الوقت والتكلفة المالية.

تعطيل الجينات ذات كفاءة عالية من الخلايا السلف مورين والبشرية المكونة للدم قبل كريسبر/Cas9

ويوضح هذا البروتوكول إجراء أمن وفعال لتعديل CD133+ الخلايا الجذعية المكونة للدم. قدم غير الفيروسية والمغناطيسية بوليبليكس النهج القائم الذي قد توفر أساسا للاستفادة المثلى آثار الخلايا الجذعية العلاجية، وكذلك فيما يتعلق بمراقبة المنتج الخلية التي تدار عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي.

بروتوكول لنقل ميكرورنا إلى المشتقة من نخاع العظام المكونة للدم الخلايا الجذعية البالغة لتمكينها هندسة الخلايا جنبا إلى جنب مع استهداف المغناطيسي

ويرد وصفها بروتوكولات لتحرير الجينوم عاليه الكفاءة من الجذعية التي تكون الدم murine والخلايا سلف (hspc) من قبل نظام crispr/كاس 9 لتطوير بسرعة أنظمه نموذج الماوس مع التعديلات الجينية الخاصة بالنظام التي تكون الدم.

لينتيفيرال CRISPR/كاس 9-بوساطة الجينوم التحرير لدراسة خلايا الدم في نماذج الامراض

تصف هذه الطريقة تنقية التدفق الخلوي ل MEP و MKp من عظام الفخذ والساق وعظام الحوض.

عزل السلف ميغاكاريوسيت الماوس

هنا ، نقدم طريقة اقتصادية وفعالة لعزل وتوليد خلايا تغصنية عالية النقاء مشتقة من نخاع العظام من الفئران بعد 7 أيام من الزراعة مع 10 نانوغرام / مل GM-CSF / IL-4.

بروتوكول اقتصادي وفعال لعزل وزراعة الخلايا الشجيرية المشتقة من نخاع العظم من الفئران

يظهر هنا بروتوكول لبدء وصيانة وتحليل مزارع الخلايا الجذعية المكونة للدم في الفئران باستخدام التوسع القائم على كحول البولي فينيل خارج الجسم الحي ، بالإضافة إلى طرق معالجتها وراثيا عن طريق نقل الفيروسات العدسية والتثقيب الكهربائي.

إكس فيفو التوسع والتلاعب الجيني للخلايا الجذعية المكونة للدم في الفئران في الثقافات القائمة على كحول البولي فينيل

نقدم هنا بروتوكولات تمكن من عزل الخلايا اللحمية من عظم الفئران ونخاع العظام والغدة الصعترية وأنسجة الغدة الصعترية البشرية المتوافقة مع تعدد الخلايا أحادي الخلية.

عزل الخلايا اللحمية من أعضاء المكونة للدم

تعلم عزل خلايا الدم الأولية من نخاع عظام الفئران وتحويلها إلى خلايا صارية باستخدام الإنترلوكين-3، ثم إجراء التحويل الكهربي بكفاءة 30% لدراسة وظائف الجينات في المناعة.

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

استكشف المزيد من الفيديوهات