Name: ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات NMJ (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-02-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: تعلم تشريح يرقات Drosophila لتحضير الوصلات العصبية العضلية للتصوير المناعي. تُستخدم هذه التقنية لدراسة تطور التشابكات العصبية في الأحياء العصبية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

قبل أن تبدأ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن تزرع في كل الثقافات 25 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قد تكون على استعداد HL3.1 العازلة تشريح مقدما. اتخاذ قسامة 50 مل من HL3.1 وابقائه على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير 15 مل من فورمالديهايد الطازجة بنسبة 3.5 ٪ في HL3.1. يبقيه على الجليد. </li></ol> اليرقات تشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قطرة من HL3.1 الباردة على لوحة التشريح. هذا وسوف تبقي الحيوان من التجفيف وصعق الحيوان مما يسهل التعامل معها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط طويل ، حدد تجول اليرقة طور مرحلي الثالث ووضعه في قطرة من HL3.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أولا ، استخدام الملقط قصيرة لاستيعاب دبوس minutien. وضع دبوس بين spiracles الخلفي. والحيوان وعادة ما يحاول الزحف بعيدا عن دبوس تمتد نفسها بنفسها ، وجعل من الأسهل بالنسبة لك لوضع دبوس في رأسه بشكل مباشر من يرقة بالقرب من السنانير الفم. تمتد طوليا من أصل الحيوان. هذا سيساعدك على أقصى قدر من جدار الجسم يتعرض يمكنك تحقيق خلال عدة قطاعات. ملاحظة : إذا اخترت دبوس أول رئيس والحيوان قد التفاف حول جسمها دبوس أو سوط الهيئة ذهابا وإيابا مما يجعل من الصعب دبوس. يمكنك مواجهة هذا عادة عن طريق إزالة HL3.1 ووضع قطرة باردة جديدة مذهلة الحيوان مرة أخرى. لا يمكن للعالم أيضا ضبطاء مجرد الاستيلاء على الحيوان والاحتفاظ بها في مكان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص الربيع باستخدام إجراء شق أفقي الأمامي لمجرد دبوس الخلفي على الجانب الظهري من اليرقة. مكان واحد شفرة المقص في شق وجعل قطع رأسي على طول خط الوسط ظهري باتجاه نهاية منقاري من اليرقة. على المنصة من الحيوان جعل شقوق الأفقية إلى اليسار واليمين من دبوس. ملاحظة : النتيجة النهائية يجب أن تبدو وكأنها أنا على الجانب الظهري لليرقة على طول محور rostrocaudal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأجهزة. تبدأ من خلال وضع العديد من نقاط إضافية HL3.1 على يرقة. وهذا سيمكن أجهزة لتعويم ما يصل إلى خارج الجسم مما يسمح لك لإزالتها بسهولة أكبر بكثير. أولا ، إزالة نظام القصبة الهوائية. ثانيا ، استخدام ملقط لانتزاع ما تبقى من الأجهزة وإزالتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال الخطوة 3 جعلتك رفرف رفرف اليسار واليمين في جدار الجسم. دبوس اللوحات في ترتيب عقارب الساعة مع التأكد من امتداد جدار الجسم أفقيا ورأسيا. </li></ol> تثبيت الإصلاح في كل حيوان الفورمالديهايد بنسبة 3.5 ٪ في HL3.1 لمدة 25 دقيقة. غسل الحيوانات مرتين في HL3.1 لمدة 5 دقائق. تخزين إزالة المسامير ونقل اليرقات إلى أنبوب 1.5 مل تحتوي على 1X PBS. إذا كنت تخطط لاستخدام صورة NMJ به نيون تنصهر فيها ، يجب أن صورة الحيوانات في غضون يومين. قد قمت بتخزين اليرقات تشريح لمدة تصل إلى أسبوع واحد في 4 درجة مئوية. ممثل النتائج هناك عدة عناصر رئيسية ليرقة ذبابة الفاكهة تشريح بشكل صحيح. أولا ، لا بد من اتخاذ المزيد من الحيطة لا يلحق الضرر العضلات ، وخاصة عضلات 4 و 6 و 7. هذه هي عضلات الأكثر شعبية للدراسة ، وإذا كانت معطوبة تجاهل الإعدادية فيليه وتشريح حيوان آخر. ثانيا ، يجب على المرء أن تأكد من أن يتم تمديد الحد الأقصى الحيوان بحيث يمكن تمييز كل العضلات وNMJ.

<ol><li>Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+the+larval+neuromuscular+junction+in+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster.</a> J. Physiol. 262, 189-214 (1976).</li>
<li>Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotypic+morphology+of+glutamatergic+synapses+on+identified+muscle+cells+of+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae.</a> J Neurosci. 9, 710-725 (1989).</li>
<li>Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+neuromuscular+junction%3A+a+model+system+for+studying+synaptic+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function.</a> Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).</li>
<li>Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+control+neuromuscular+specificity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila.</a> Cell. , 73-1137 (1993).</li>
<li>Feng, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).</li>
</ol>

ويمكن استخدام هذه التقنية أظهر تشريح في هذا الفيديو لإعداد يرقات ذبابة الفاكهة لمجموعة متنوعة من التقنيات التجريبية. إذا به بروتين فلوري موجودة ، ويمكن تحميل واليرقات والتقط على الفور. خلاف ذلك ، يمكن أن يؤديها من أجل immunostaining علامة مقصورات متشابك محددة. بالإضافة ، يمكن بسهولة أن يؤديها الكهربية على يرقات تشريح لتقييم أداء النقل العصبي. اكتسبت NMJ من ذبابة الفاكهة بشعبية كبيرة منذ أوائل ال...

HL3 الاحتياطي تشريح : (مم) 70 كلوريد الصوديوم ، 5 بوكل ، 0.2 CaCl2 ، 20 MgCl2 ، 10 NaHCO3 ، 5 طرهالوز ، 115 السكروز ، وHEPES 5 ، ودرجة الحموضة 7.3.<br /<br /&gt; Sylgard تشريح اللوحة : مزيج بلطف (لتجنب فقاعات) 10:01 في كوب. يصب الخليط في طبق بيتري (أي حجم). SylGard تسمح لعلاج بين عشية وضحاها في حاضنة 37C.

ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات nmj

Drosophila Larval NMJ Dissection

و<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الوصل العصبي العضلي (NMJ) هو نظام يستخدم نموذج المتبع لدراسة تطوير واللدونة متشابك. استخدام على نطاق واسع<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; محرك النظام هو نتيجة لسهولة الوصول إليها عالية. ويمكن تحليل ذلك مع قرار وحيد الخلية. هناك 30 في عضلات hemisegment الذين الترتيب داخل جدار الجسم هامشية معروفة. مجموعه من الخلايا العصبية الحركية 35 نعلق على هذه العضلات في النمط الذي الدقة العالية. استخدام البيولوجيا الجزيئية وعلم الوراثة ، ويمكن للمرء أن خلق حيوانات معدلة وراثيا أو المسوخ. ثم ، يمكن للمرء أن دراسة الآثار التنموية على التشكل وظيفة NMJ. من أجل الوصول إلى NMJ للدراسة ، فمن الضروري أن يشرح بعناية كل يرقة. نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح صحيح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات لدراسة NMJ عن طريق إزالة جميع الأعضاء الداخلية في حين ترك جدار الجسم سليما. هذا الأسلوب هو مناسب لاعداد اليرقات التصوير ، والمناعية ، أو الكهربية.

هذا البروتوكول يوضح كيفية تشريح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات في إعداد و / أو التصوير المناعية من مفترق الطرق العصبية والعضلية.

ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات NMJ

يُعد الوصل العصبي العضلي (NMJ) في ذبابة الفاكهة (Drosophila) نظاماً نموذجياً معتمداً يُستخدم لدراسة التطور واللدونة التشابكية. إن الاستخدام الواسع...

تبدأ هذه العملية بوضع يرقات في الطور الثالث على لوح التشريح. يتم وضع دبابيس في الطرفين الخلفي والأمامي لليرقة. تُستخدم المقصات لفتح جسم اليرقة، بينما تُستخدم الملاقط لإزالة الأعضاء الداخلية.أخيراً، يتم وضع أربعة دبابيس إضافية في كل زاوية من جدار جسم اليرقة لإبقائها مشدودة أثناء عملية التثبيت. مرحباً، أنا جوناثان برينت من مختبر برايان مكاب في قسم الفسيولوجيا والفيزياء الحيوية الخلوية في كلية الأطباء والجراحين بجامعة كولومبيا. سنعرض لكم اليوم إجراء تشريح يرقة drosophila و MJ.نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة التطور التشابكي للوصلة العصبية العضلية. لذا، فلنبدأ. في يرقات Drosophila، يوجد 30 عضلة في كل نصف قطعة جسمية، وتكون ترتيباتها داخل جدار الجسم المحيطي معروفة.تقوم 35 خلية عصبية حركية بتعصيب هذه العضلات وفق نمط نمطي للغاية. وللوصول إلى الوصلة العصبية العضلية أو NMJ، من الضروري تشريح كل يرقة بعناية باستخدام أدوات تشريح مناسبة. ويمكن استخدام الوصلة العصبية العضلية في التصوير أو الكيمياء النسيجية المناعية أو الفسيولوجيا الكهربائية.ابدأ الإجراء بوضع قطرة من محلول HL 3.1 المنظم على لوح تشريح. يتم تحضير المحلول المنظم مسبقاً وتبريده على الثلج. استخدم ملقطاً من الفولاذ المقاوم للصدأ (SS) كبير الحجم لالتقاط يرقات النجمة ذات الطرف الثالث المتجولة بعناية من جانب القارورة.تشير الحركة إلى أن اليرقة لم تدخل في مرحلة التعذر. ضع اليرقة بحيث يكون الجانب الظهري للأعلى في قطرة من المحلول المنظم على لوح التشريح. سيعمل المحلول المنظم البارد على تخدير اليرقة وإبقائها ساكنة. باستخدام الملقط، ضع دبوسًا بين الكريات الخلفية، ثم ضع دبوسًا ثانيًا بالقرب من خطافات الفم الداكنة بحيث يتم تمديد اليرقة وتصبح جاهزة للفرد.باستخدام مقص زنبركي، قم بعمل شق أفقي صغير باتجاه الطرف الخلفي لليورقة. أدخل إحدى شفرات المقص في الشق وقم بإجراء قطع طولي باتجاه الطرف الأمامي لليورقة. بعد ذلك، قم بعمل شقوق أفقية عند الطرف الأمامي لليورقة إلى يسار ويمين الدبوس.لإزالة الأعضاء مثل الأمعاء، أضف عدة قطرات من محلول HL 3.1 المنظم إلى الحيوان، حيث ستطفو الأمعاء والأعضاء الأخرى في المحلول، ويمكن سحبها بعيداً عن الجسم باستخدام الملقط. كذلك، قم بإزالة الجهاز الرغامي مع الأعضاء الأخرى. الآن، قم بكشف عضلات الجسم الداخلية عن طريق تثبيت الشقوق الناتجة عن البضع للخلف باستخدام الدبابيس.تأكد من تمديد جدران الجسم وفتحها أفقياً وعمودياً عند تثبيت السدائل. قم بإزالة أي بقايا أعضاء متبقية واغسلها مرة واحدة.بعد إضافة منظم HL 3.1 الطازج، تصبح اليرقة الآن جاهزة للتثبيت باستخدام فورمالدهيد مُحضّر حديثاً ومخفف إلى 3.5% في XPBS واحد؛ اغمر اليرقات والمثبت غمرًا كاملاً وانتظر لمدة 25 دقيقة. عند انتهاء فترة التثبيت، اغسل اليرقات مرتين بمنظم HL 3.1 لمدة ثلاث دقائق. أزل الدبابيس بعناية، ثم انقل اليرقات إلى أنابيب سعة 1.5 مل تحتوي على XPBS واحد إذا لزم الأمر.يمكن تخزين اليرقات لمدة تصل إلى يومين عند درجة حرارة 4 °C. وللحصول على أفضل النتائج، استخدم اليرقات المشرحة فوراً. هناك عدة مكونات رئيسية ليرقة drosophila مشرحة بشكل صحيح.أولاً، يجب توخي الحذر لعدم إتلاف العضلات، وخاصة العضلات السادسة والسابعة والرابعة. ثانياً، يجب تمديد الحيوان بشكل صحيح؛ وإلا فقد لا يكون الوصل العصبي العضلي متاحاً أو قابلاً للتمييز.يمكنكم رؤية يرقة تم تشريحها بشكل صحيح هنا. يظهر الوصل العصبي العضلي (NMJ) بوضوح، وأصبح النظام الآن جاهزاً للتجارب. لقد عرضنا لكم للتو كيفية تشريح يرقة المريء لدراسة الوصل العصبي العضلي.عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم ترك العضلات سليمة؛ فإذا تضررت العضلات، لن تكون هناك وصلات عصبية عضلية لدراستها. هذا كل شيء.شكرًا للمشاهدة، مع تمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح الجهاز العصبي المركزي يرقات ذبابة الفاكهة من المركز الثالث طور مرحلي.

تشريح الجهاز العصبي المركزي اليرقات في Melanogaster ذبابة الفاكهة

هذا البروتوكول يوضح كيفية تنفيذ المناعية على يرقة ذبابة الفاكهة تشريح.

ذبابة الفاكهة اليرقات NMJ المناعية

يرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن توفير نظام النموذج المثالي للتحقيق في آليات النقل داخل محواري الأعصاب قطعي اليرقات. باستخدام هذا الإجراء ، يمكن مقارنة 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة تحمل طفرات مختلفة ليرقات النوع البري.

تصور الأعصاب القطاعي اليرقات في 3 الثالثة طور مرحلي ذبابة الفاكهة التحضيرات اليرقات

هذا البروتوكول توضح طريقة موثوقة لالتخدير والتصوير من دون...

في التصوير من يرقات ذبابة الفاكهة فيفو سليمة الفرعية الخلوية في القرار

الوصل العصبي العضلي (NMJ)...

تشريح والتصوير من المناطق النشطة في ذبابة الفاكهة الوصل العصبي العضلي

في التصحيح الموقع وتستخدم لتوصيف المشبك التسجيلات الكهربية للخلايا العصبية في الدوائر سليمة. في ذبابة الفاكهة الوراثية نموذج التصحيح تحامل صعب لأن CNS صغيرة ومحاطة غمد قوية. توضح هذه المقالة الإجراء لإزالة الخلايا العصبية وغمد نظيفة لاحقة التسجيلات المشبك التصحيح.

إعداد<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا العصبية المركزي لل<em&gt; في الموقع</em&gt; تصحيح لقط

&lt; p class = "jove_content"&gt; في هذا الفيديو ، ذبابة الفاكهة تغمر الألياف العصبية في صبغة FM ، التي ترتبط بدهون غشاء الخلية. يحفز قطب الشفط الدقيق والنبضات الكهربائية عملية الالتقام الخلوي ، ويدمج صبغة FM في حويصلات داخلية مشكلة حديثا. هذه الطريقة ، التي تصور مراحل ما قبل المشبكي للنقل العصبي ، مفيدة لدراسة الوظيفة المشبكية وإطلاق الناقل العصبي.

تحميل وتفريغ صبغة FM بوساطة القطب الكهربائي الدقيق في ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية

يتم الحفاظ على مورفولوجيا وحجم وموقع العضيات داخل الخلايا تطوريا ويبدو أنها تؤثر بشكل مباشر على وظيفتها. أصبح فهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه العمليات هدفا مهما لعلم الأحياء الحديث. نوضح هنا كيف يمكن تسهيل هذه الدراسات من خلال تطبيق التقنيات الكمية.

لماذا الكمي المسائل: توصيف الظواهر في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات عصبي عضلي مفرق

نحن هنا وصف طريقة بسيطة ويمكن الوصول إليها على نطاق واسع لإصابة الأعصاب القطعي في يرقات ذبابة الفاكهة لتصور وكمية التنكس العصبي من الخلايا العصبية الحركية في تقاطع عصبي عضلي (نمج) من اليرقات الطور الثالث.

A بسيطة العصبية الميكانيكية إصابة منهجية للدراسة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; موتور العصبون التنكس

نحن نصف تقنية تشريح تحافظ على بنية التقاطع العصبي العضلي وتمكن من دراسة كيميائية مناعية مفصلة للخلايا العصبية الحركية في ساق دروسوفيلا البالغة.

تشريح والكيمياء المناعية من الساق الكبار Drosophila للكشف عن التغيرات في تقاطع العصبية والعضلية لخلية عصبية محركية محددة

هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا لتصور شبكات الأنابيب الدقيقة في الوصلات العصبية العضلية وخلايا العضلات. إلى جانب الأدوات الوراثية القوية لذبابة الفاكهة ، يسهل هذا البروتوكول إلى حد كبير الفحص الجيني وتحليل ديناميكيات الأنابيب الدقيقة لدور البروتينات التنظيمية لشبكة الأنابيب الدقيقة في الجهاز العصبي.

استخدام ذبابة الفاكهة اليرقات العصبية العضلية والخلايا العضلية لتصور شبكة الأنابيب الدقيقة

تعلم تشريح يرقات Drosophila لتحضير الوصلات العصبية العضلية للتصوير المناعي. تُستخدم هذه التقنية لدراسة تطور التشابكات العصبية في الأحياء العصبية.

ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات NMJ

استكشف المزيد من الفيديوهات