Name: اكتشاف بروتين Ubiquitination (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: اكتشف طرق كشف يوبيكيتينة البروتين في الخلايا المزروعة وفي المختبر. تساعد هذه البروتوكولات الباحثين على فهم آليات الأمراض المرتبطة بهذه التعديلات البروتينية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح RO1 DC006497 ، RO1 NS057289 وPO1 ES016738 (الألف إلى الياء تشانغ) ؛ معهد كاليفورنيا للحصول على منح الطب التجديدي RS1 - 00331-1 وRL1 - 00682 - 1 (الألف إلى الياء تشانغ) ، وباركنسون الأمريكية رابطة مرض (الألف إلى الياء تشو تشانغ وYS) ، وجيه مايكل فوكس مؤسسة للأبحاث مرض باركنسون (Z. تشانغ).

اكتشاف بروتين في الخلايا ubiquitination مثقف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مثقف خلايا Transfect البلازميدات مع التعبير عن المصالح والبروتين (حاتمة الموسومة إصدار) اليوبيكويتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل كاملة العازلة تحلل الخلية (2 ٪ SDS ، 150 مم كلوريد الصوديوم ، و 10 ملي تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، ودرجة الحموضة 8.0) مع orthovanadate 2mm والصوديوم ، و 50 ملي فلوريد الصوديوم ، ومثبطات الأنزيم البروتيني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ليز الخلايا مع 100 ميكرولتر تحلل الخلية العازلة في لوحة (6 طبق سم). إذا تم استخدام أكبر صحن ، وضبط حجم وفقا لذلك. دوامة الطبق بعناية للسماح للتحلل العازلة تغطية المنطقة بأكملها من الخلايا المزروعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع الخلايا مع مكشطة الخلية ونقل lysates الخلية في أنبوب 1.5 مل إيبندورف. وضع أنبوب على صفيحة ساخنة على الفور ليغلي لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قص الخلايا مع جهاز صوتنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 900ul العازلة للتخفيف (10 ملي تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، ودرجة الحموضة 8.0 ، 150 مم كلوريد الصوديوم ، EDTA 2 مم ، تريتون 1 ٪). احتضان العينات في درجة مئوية (4) ل30-60 دقيقة مع التناوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور العينات المخففة في XG 20000 لمدة 30 دقيقة. طاف نقل الناتج إلى أنبوب إيبندورف جديدة. يجب الحرص على عدم تعكير صفو بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس تركيز البروتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد البروتين A - G - agarose أو حبة مترافق الأضداد ضد البروتين المستهدف في منطقة عازلة متوافق (50 ٪ الطين). قطع نهاية ضيقة من طرف P - 200 ماصة ونقل 14-20 ميكرولتر من الراتنج ل500-1،500 ميكروغرام من lysates الخلية التي أعدت للمناعي. لخلايا ذات كفاءة عالية ترنسفكأيشن ، سوف يكون كافيا 500 ميكروغرام. للخلايا مع انخفاض كفاءة ترنسفكأيشن ، قد تكون هناك حاجة إلى مزيد من البروتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخلية lysate - حبة الخليط في 4 درجات مئوية خلال الليل مع التناوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور باستمرار الخرز في 5000 x ج لمدة 5 دقائق. نضح لطاف. غسل راتنج مع الغسيل العازلة (10 ملي تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، ودرجة الحموضة 8.0 ، 1 م كلوريد الصوديوم ، EDTA 1 ملم ، 1 ٪ NP - 40) مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور حبات لمرة أخيرة في XG 20000 لمدة 30 ثانية. نضح المخزن الغسيل المتبقية وتغلي الراتنج مع العازلة 2X تحميل SDS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل عينات على جل SDS - PAGE immunoblotting لتحليلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اكتشاف بروتين اليوبيكويتين والهدف مع الأضداد منها. لimmunoblotting ، ونحن عموما كشف اليوبيكويتين الأولى. وعندئذ يكون الغشاء المستخدمة للكشف عن البروتين عجل. </li></ol> اكتشاف بروتين ubiquitination على الهدف عن طريق فحص في المختبر ubiquitination <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 5X ubiquitination العازلة (100 ملي تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، ودرجة الحموضة 7.5 ، 25 مم MgCl2 ، 2.5 ملي DTT ، 10 ملي ATP). تخزينها في aliquots صغيرة في -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. بعض البروتوكولات أيضا إضافة فوسفات الكرياتين كيناز والكرياتين في المخزن المؤقت لل1،2 تجديد ATP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل رد فعل ، وإعداد مزيج يحتوي على ما يلي : <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ميكرولتر 8 </td><td> 5X ubiquitination العازلة </td></tr><tr><td> 250 نانوغرام </td><td> ubiquitination E1 </td></tr><tr><td> 500 نانوغرام </td><td> ubiquitination E2 </td></tr><tr><td> 0.5 ميكروغرام </td><td> اليوبيكويتين </td></tr><tr><td> 0.5 ميكروغرام </td><td> بروتين من الفائدة </td></tr><tr><td></td><td> المياه لحجم الكلي 40 ميكرولتر </td></tr></tbody></table> والضوابط ، وإعداد ردود فعل مماثلة في غياب أي E1 ، E2 ، أو اليوبيكويتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان الخليط عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة أو أكثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف رد الفعل بإضافة SDS - PAGE العازلة عينة ونموذج تغلي لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل عينات على SDS - PAGE هلام immunoblotting لتحليلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اكتشاف بروتين اليوبيكويتين والهدف مع الأضداد منها. </li></ol>

<ol><li>Xiong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PINK1%2C+and+DJ-1+form+a+ubiquitin+E3+ligase+complex+promoting+unfolded+protein+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">PINK1, and DJ-1 form a ubiquitin E3 ligase complex promoting unfolded protein degradation.</a> J Clin Invest. 119, 650-660 (2009).</li>
<li>Xirodimas, D. P., Saville, M. K., Bourdon, J. C., Hay, R. T., Lane, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mdm2-mediated+NEDD8+conjugation+of+p53+inhibits+its+transcriptional+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mdm2-mediated NEDD8 conjugation of p53 inhibits its transcriptional activity.</a> Cell. 118, 83-97 (2004).</li>
<li>Didier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNF5%2C+a+RING+finger+protein+that+regulates+cell+motility+by+targeting+paxillin+ubiquitination+and+altered+localization%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">RNF5, a RING finger protein that regulates cell motility by targeting paxillin ubiquitination and altered localization.</a> Mol Cell Biol. 23, 5331-5345 (2003).</li>
<li>Laney, J. D., Hochsetrasser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+14.5+Analysis+of+Protein+Ubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Protein+Science%22%5BJournal%5D)">Unit 14.5 Analysis of Protein Ubiquitination.</a> Current Protocols in Protein Science. , 14.5.1-14.5.11 (2002).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يفصحون عنه.

في هذا العرض ، ونحن أول من وصف الخطوات التي تسمح الكشف عن تعديل اليوبيكويتين على بروتين من الاهتمام في خلايا الثدييات مثقف. استخدمنا من أجل الكشف عن ubiquitination تحديدا على البروتين من الفائدة ، وليس على البروتينات المتفاعلة غير تساهمي ، وهو شرط صارم لتحلل الخلية ، وغسل 1،3 مناعي. Ubiquitination ، الكشف عنها من قبل للبروتين مناعي الهدف في مثل هذه الحالة الصعبة تليها مكافحة اليوبيكويتين immunoblotting ، ولذلك فإن من المرجح أن تكون محددة للبروتين الهدف. لمنع deubiquitin...

اكتشاف بروتين ubiquitination

Detection of Protein Ubiquitination

Ubiquitination ، المرفق التساهمية من اليوبيكويتين ببتيد لاستهداف البروتينات ، هو تعديل مفتاح posttranslational التي قامت بها مجموعة من ثلاثة الانزيمات. وهي تشمل اليوبيكويتين - E1 تفعيل أنزيم اليوبيكويتين - E2 التصريف الانزيم ، واليوبيكويتين E3 يغاز. خلافا لE1 و E2 ، E3 عرض ligases اليوبيكويتين خصوصية الركيزة. من ناحية أخرى ، فإن العديد من الانزيمات deubiquitylating أدوارا في تجهيز البروتينات polyubiquitinated. يمكن أن يؤدي إلى تغيير Ubiquitination الاستقرار البروتين ، وتوطين الخلوية ، والنشاط البيولوجي. ترتبط طفرات في الجينات المسؤولة عن المسار ubiquitination / deubiquitination أو اختلال وظيفة نظام اليوبيكويتين مع العديد من الأمراض البشرية المختلفة مثل أنواع مختلفة من السرطان ، وتنكس عصبي ، والاضطرابات الأيضية. قد كشف ubiquitination تغيير أو العادي للبروتينات هدف توفير فهم أفضل عن التسبب في هذه الأمراض. هنا ، نحن تصف بروتوكولات للكشف عن البروتين في الخلايا ubiquitination مثقف<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; وبالأنابيب<em&gt; في المختبر</em&gt;. هذه البروتوكولات هي مفيدة أيضا للكشف عن الأخرى مثل تعديل اليوبيكويتين جزيء صغير مثل sumolyation وneddylation.

Ubiquitination هو تعديل مفتاح posttranslational التي قامت بها مجموعة من ثلاثة الانزيمات. ترتبط طفرات في الجينات المسؤولة عن هذا التعديل مع العديد من الأمراض البشرية المختلفة. هنا ، نحن تصف بروتوكولات للكشف عن البروتين في الخلايا ubiquitination مثقف<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; وبالأنابيب<em&gt; في المختبر</em&gt;.

اكتشاف بروتين Ubiquitination

تعد عملية ubiquitination، وهي الارتباط التساهمي لمتعدد الببتيد ubiquitin بالبروتينات المستهدفة، تعديلاً أساسياً بعد الترجمة يتم بواسطة مجموعة من ...

مرحباً، أنا تشو من مختبر جو في معهد برمنغهام للأبحاث الطبية. سنعرض لكم اليوم إجراءً لكيفية الكشف عن تكون البروتينات النووية. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة بروتين parkin أو ربيطات UBI three وركيزتها.لنبأ الآن. لبدء هذا البروتوكول، قم بنقل البلازميدات التي تعبر عن كل من البروتين المستهدف ونسخة من اليوبيكويتين (ubiquitin) مرتبطة بـ epitope tag إلى الخلايا. اترك الخلايا تنمو لمدة 40 ساعة تقريبًا، ثم انتقل إلى طاولة المختبر لتحليل الخلايا، حيث يتم شفط الوسط السائل وغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS.بعد ذلك، يتم تحلل الخلايا بإضافة 100 µL من محلول تحلل الخلايا، الذي يحتوي على 2% SDS لكل طبق بقطر 6 cm. يتم تدوير كل طبق بحيث يغطي المحلول الخلايا تماماً. بعد ذلك، استخدم كاشطة الخلايا لجمع الخلايا المتحللة ونقلها إلى أنبوب سنترفيوج سعة 1.5 mL.ضع الأنبوب فوراً على كتلة تسخين وقم بغلي الخلايا المحللة لمدة 10 دقائق لمزيد من تغيير طبيعة البروتينات وإذابتها. بعد الغليان، استخدم جهاز سونيكاتور (sonication device) لقص الخلايا والحمض النووي DNA الخاص بها. هذه الخطوة تجعل نواتج تحلل الخلايا أقل لزوجة.بعد عملية السونيكيشن، أضف 900 µL من محلول التخفيف المنظم واترك العينات تدور عند درجة حرارة 4 °C لمدة تتراوح بين 30 إلى 60 دقيقة. بعد الحضن، قم بطرد العينات المخففة مركزياً عند 20,000 Gs لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 4 °C للحصول على البروتينات الذائبة. ثم، مع الحرص على عدم تعكير الراسب، انقل supernatant إلى أنبوب إبندورف جديد.أخيراً، قم بقياس تركيز البروتين في الطافي باستخدام طريقة مثل مقايسة Lowry المعدلة التي نستخدمها هنا. والآن، أصبحت مستعداً لاستخدام الترسيب المناعي لعزل البروتين المستهدف من البروتينات الأخرى الموجودة في الطافي. تتمثل الخطوة الأولى في الترسيب المناعي في تحضير الخرز المقترن بالأجسام المضادة الموجهة ضد البروتين المستهدف.يمكنك استخدام الخرز المقترن بالأجسام المضادة المتوفر تجارياً أو تحضير أجسام مضادة مثبتة خاصة بك باستخدام عوامل الربط المتقاطع. وكما فعلنا هنا، قم بتحضير الأجسام المضادة المثبتة في محلول منظم متوافق لصنع ملاط بنسبة 50% لتهيئة تفاعل الترسيب الأميني. اقطع الطرف الضيق لطرف ماصة P 200 وانقل من 14 إلى 20 µL من الراتنج إلى 500 إلى 1500 µg من تحللات الخلايا المحضرة.قم بتعديل كمية محلول تحلل الخلايا المستخدمة وفقاً لكفاءة ترانسفكشن الخلايا لديك. اترك خليط خرزات محلول تحلل الخلايا يدور عند درجة حرارة 4 °C طوال الليل. خلال هذه الفترة، سيرتبط الجسم المضاد المقترن بالخرزات بشكل نوعي بالبروتين المستهدف.في اليوم التالي، قم بطرد حبيبات الراتنج مركزياً عند 5,000 Gs لمدة خمس دقائق عند درجة حرارة أربع درجات مئوية لترسيب البروتين. وبعد ارتباط البروتين بالحبيبات، اسحب السائل الطافي واغسل الراتنج مرتين باستخدام محلول الغسيل عالي الملوحة عن طريق الطرد المركزي عند 5,000 Gs لمدة خمس دقائق. عند درجة حرارة أربع درجات مئوية، قم بطرد الحبيبات مركزياً للمرة الأخيرة عند 20,000 GS لمدة 30 ثانية واسحب محلول الغسيل المتبقي.الآن بعد أن قمت بتنقية البروتين المستهدف، حان الوقت لفصل البروتين باستخدام هلام SDS page. أولاً، قم بغلي راتنج الخرز مع ضعف كمية منظم تحميل SDS لتمسخ البروتينات وإكسابها شحنة سالبة. ثم قم بتحميل العينات التي أعددتها على هلام SDS page.انقل البروتينات من الهلام إلى غشاء باستخدام بروتوكول الـ western blotting المتبع في مختبرك. ثم قم بمعالجة اللطخة باستخدام أجسام مضادة ضد ubiquitin أو البروتين المستهدف، وقم بتظهير الغشاء على فيلم لتصوير البروتينات المرتبطة باليوبيكويتين. لقد شرحنا لك للتو كيفية الكشف عن عملية إضافة اليوبيكويتين للبروتينات في الخلايا المستزرعة.يمكن إجراء هذه التجربة نفسها في المختبر (in vitro) داخل أنبوب اختبار. يبلغ الحجم الكلي لهذا التفاعل 40 µL ويمكن تنفيذه في أنبوب PCR. قم بتحضير كل تفاعل على النحو التالي.أولاً، أضف خمسة أضعاف من منظم UBIQUITINATION، الذي يحتوي على TP وعامل مختزل DIO three etol، وDTT. بعد ذلك، أضف إنزيمات ubiquitination وهي E one وE two. ثم أضف الركائز، وubiquitin، والبروتين المستهدف.أكمل الحجم الكلي للتفاعل ليصل إلى 40 µL باستخدام الماء كمجموعات ضابطة. جهّز تفاعلات مماثلة في غياب أي من ubiquitin E1 أو E2 أو البروتين المستهدف. حضّن الخليط عند 37 °C لمدة ساعة واحدة أو أكثر.أوقف التفاعل بإضافة منظم عينات SDS page. اغلِ العينة لمدة 10 دقائق. حمّل العينات على هلام SDS page وتابع تحليل اللطخة المناعية (immuno blotting) كما فعلت في تجربة vivo in.إليك مثال على نتيجة هذا البروتوكول. باركنسون. البروتين المستهدف هنا هو البروتين المرتبط بمرض باركنسون. ويظهر المسار الرابع بروتين parin الموبيكويتين (ubiquitinated parin).تظهر اللطخات أو السلالم القوية النموذجية فوق الوزن الجزيئي لبروتين parin غير المعدل لمقارنة عدة ظروف تجريبية، كما يجب مراعاة مستويات التعبير الخلوي لكل من البروتين المستهدف غير المعدل، parin، وubiquitin في كل حالة. هذا مثال على عملية ubiquitination لبروتين parin في المختبر (in vitro)، حيث تم فحص parin المنقى بتقارب لعملية ubiquitination في المختبر بوجود recombinant E one وE two وbiotin tag ubiquitin. تم الكشف عن parin المرتبط بـ biotin ubiquitinated بواسطة streptavidin HRP. يظهر Parin المرتبط بـ ubiquitinated على شكل سلالم فوق الوزن الجزيئي لبروتين parin غير المعدل؛ وتعتبر المسارات واحد واثنان وأربعة ضوابط لا تحتوي على ubiquitin وE one وE two وparkin على التوالي.لقد شرحنا لكم للتو كيفية الكشف عن بروتين new vaccination في الخلايا المستزرعة. عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر تحضير محلل الخلايا في ظروف تثبيط عالية وتخفيف محلل الخلايا قبل إضافة الأجسام المضادة المعبأة. هذا كل شيء.شكراً لكم على المشاهدة، وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجربتكم.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يصف هذا الفيديو طريقة لاستخراج وتنقية الببتيدات الموجودة في كل مكان تحتوي على ببتيدات ثنائي جلايسين متبقية من خليط ببتيد معقد. قد تساعد الطريقة المقدمة في تحديد مواقع الانتشار الأصلية في البروتين.

استخراج الببتيدات الموجود في Ubiquitinylated على أساس التقارب المناعي: تقنية لاستخراج الببتيدات الموسومة باليوبيكويتين بشكل انتقائي من كسور الببتيد المنقاة

البروتوكول الحالي تفاصيل طريقة لقياس نشاط الانزيمات وظيفيا deubiquitinating مثلي. تحقيقات متخصصة تعديل تساهميا الانزيم وتسمح للكشف. يحمل هذا الأسلوب القدرة على تحديد أهداف علاجية جديدة.

طريقة لقياس آخر من Deubiquitinating الانزيمات في خطوط الخلايا وعينات الأنسجة

نحن نقدم طريقة لتنقية والكشف وتحديد الببتيدات diGly التي تنشأ من البروتينات في كل مكان من عينات بيولوجية معقدة. الطريقة المعروضة قابلة للاستنساخ وقوية وتتفوق على الأساليب المنشورة فيما يتعلق بمستوى عمق تحليل كل يوم.

الكشف عن مواقع اكتشاف البروتين من قبل إثراء الببتيد وقياس الطيف الكتلي

Ubiquitination هو تعديل ما بعد الترجمة الذي يلعب أدوارا هامة في العمليات الخلوية ويتم تنسيقها بإحكام من قبل deubiquitination. العيوب في كل من ردود الفعل تكمن وراء الأمراض البشرية. نحن نقدم بروتوكولات لإجراء رد فعل في كل مكان وdeubiquitination في المختبر باستخدام المكونات النقية.

في كل مكان في المختبر واختبارات الديوبيكيتيمنت النيوكليوسوم

يهدف هذا البروتوكول إلى إنشاء اوبيكييتين (Ub) و اوبيكويتين-أمثال (Ubls) بروتينيه محدده من أجل تحديد التعديلات من هذا النوع من التعديلات بعد الانتقالية (PTMs) ، المرتبطة بحاله معينه مثل العلاج أو النمط الظاهري.

تنميط اوبيكويتين و اوبيكويتين-مثل التعديلات اللاحقة الانتقالية وتحديد التعديلات الهامه

تصف هذه الطريقة تقييم التغيرات العالمية في طوبولوجيا سلسلة ubiquitin. ويتم التقييم بتطبيق نهج البروتيوميات المستهدفة القائمة على قياس الطيف الكتلي.

تحليل سلسلة يوبيكيتين من خلال رصد التفاعل الموازي

نحن نقدم بروتوكولا مفصلا لفحص الانتشار في كل مكان لركيزة معينة و E3 ubiquitin-ligase في خلايا الثدييات. تم استخدام خطوط الخلايا HEK293T للإفراط في التعبير عن البروتين ، وتم تنقية الركيزة متعددة التواجدات في كل مكان من تحلل الخلايا عن طريق الترسيب المناعي ، وتم حلها في SDS-PAGE. تم استخدام النشاف المناعي لتصور هذا التعديل بعد الترجمة.

تقييم الركيزة في كل مكان بواسطة E3 Ubiquitin-ligase في تحلل خلايا الثدييات

يصف البروتوكول طريقة خطوة بخطوة لتنقية البروتينات الموجودة في كل مكان من خلايا الثدييات باستخدام بروتين مثبط الورم p53 كمثال. تم تنقية بروتينات p53 في كل مكان من الخلايا في ظل ظروف صارمة غير مسخ وتغيير طبيعة .

تنقية بروتينات p53 في كل مكان من خلايا الثدييات

يسلط هذا البروتوكول الضوء على طريقة معدلة للكشف عن الوصلات المتقاطعة لبروتين الحمض النووي (DPCs) وقياسها كميا وتعديلاتها اللاحقة للترجمة (PTMs) ، بما في ذلك الوجود في كل مكان ، و SUMOylation ، و ADP-ribosylation التي تسببها مثبطات توبويزوميراز والفورمالديهايد ، مما يسمح بدراسة تكوين وإصلاح DPCs و PTMs الخاصة بها.

الكشف الكمي عن الروابط المتقاطعة بين الحمض النووي والبروتين وتعديلاتها اللاحقة للترجمة

تظهر التجربة المستخدمة هنا طريقة لرسو الجزيئات جنبا إلى جنب مع تقنيات المسبار للتنبؤ والتحقق من التفاعل بين الجزيئات الصغيرة للطب الصيني التقليدي وأهداف البروتين.

فحص مركبات الطب الصيني التقليدي لتثبيط نشاط UCHL3 بناء على تقنية الالتحام الجزيئي ومسبار إنزيم deubiquitinating

يعد اليوبيكوتينيشن منظما حيويا لوظائف البروتين داخل الخلية. هنا، نصف طريقتين لتحليل الخلايا لاكتشاف مستويات اليوبيكوتينات في بروتين الركيزة في الخلايا الثديية ونقارن فعاليتهما في تحليل مستويات اليوبيكوتين. تم تحفيز فرط التعبير عن البروتين في خلايا HEK293T بواسطة النقل العابر، وتم اكتشاف البروتينات الشاملة في كل مكان بواسطة تحليل النقطة الغربية.

استراتيجيات مقارنة لاكتشاف اليوبيكوتينيشن في محللات الخلايا الثديية باستخدام SMAD2/SMURF2 كنموذج

اكتشف طرق كشف يوبيكيتينة البروتين في الخلايا المزروعة وفي المختبر. تساعد هذه البروتوكولات الباحثين على فهم آليات الأمراض المرتبطة بهذه التعديلات البروتينية.

اكتشاف بروتين Ubiquitination

استكشف المزيد من الفيديوهات