Name: يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM) (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-05T19:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 16 s
Description: اكتشف تقنية الميكروسكوب الرقطة النيونية لدراسة ديناميكيات بروتينات الهيكل الخلوي في الخلايا الحية. تُستخدم هذه الطريقة لقياس سرعة البروتينات وحركتها بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويتم تمويل تطوير qFSM من U01 منحة المعاهد الوطنية للصحة GM06230.

<ol><li>Waterman-Storer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+speckle+microscopy+%28FSM%29+of+microtubules+and+actin+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent speckle microscopy (FSM) of microtubules and actin in living cells.</a> Curr Protoc Cell Biol. Chapter 4, Unit 4.10-Unit 4.10 (2002).</li>
<li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305, 1782-1786 (2004).</li>
<li>Zhang, X. F., Schaefer, A. W., Burnette, D. T., Schoonderwoert, V. T., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rho-dependent+contractile+responses+in+the+neuronal+growth+cone+are+independent+of+classical+peripheral+retrograde+actin+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Rho-dependent contractile responses in the neuronal growth cone are independent of classical peripheral retrograde actin flow.</a> Neuron. 40, 931-944 (2003).</li>
<li>Salmon, W. C., Adams, M. C., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-wavelength+fluorescent+speckle+microscopy+reveals+coupling+of+microtubule+and+actin+movements+in+migrating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Dual-wavelength fluorescent speckle microscopy reveals coupling of microtubule and actin movements in migrating cells.</a> J Cell Biol. 158, 31-37 (2002).</li>
<li>Danuser, G., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fluorescent+speckle+microscopy+of+cytoskeleton+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys+Biomol+Struct%22%5BJournal%5D)">Quantitative fluorescent speckle microscopy of cytoskeleton dynamics.</a> Annu Rev Biophys Biomol Struct. 35, 361-387 (2006).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

عدة عوامل رئيسية هي حاسمة لنجاح رقطة الحصول على الصور ، الرقطة جيدة ولكن تبدأ وتنتهي مع نوعية أكتين الخاص fluorescently المسمى. وهناك نسبة عالية من العلامات صبغ لمونومر أكتين ، بتعيين حوالي 0،4-0،7 ضمان الرقطة ستظهر مشرق ومنفصلة ، في حين أن البروتين المسمى ذاتها ينبغي أن تكون قابلة للذوبان وخالية من الركام. نفس القدر من الأهمية هو الإجراء microinjection. لضمان التوازن الطبيعي الخلية (والبقاء) ، والخلايا تحتاج إلى حقن ذات ضغط التدفق المنخفض ، في معرض تقديمه على تركيز منخفض من البرو...

حقن العازلة (IB) 50 ملي الغلوتامات البوتاسيوم 0.5 M MgCl2 (الملحق 2A) تخزين ما يصل الى 2 سنوات في -20 درجة مئوية &nbsp; G - العازلة 2 مم تريس ⋅ الكلورين ، ودرجة الحموضة 8.0 (الملحق 2A) 0.2 ملم CaCl2 (الملحق 2A) إضافة قبل الاستخدام : 0.2 ملم ATP (راجع صفة ل100 ملم) 0.5 مم 2 - المركابتويثانول تخزين ما يصل إلى 1 في اليوم 4 درجات مئوية

يعيش التصوير خلية من طراز f - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (fsm)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

في هذا البروتوكول وصفنا استخدام الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM) لالتقاط صور عالية الدقة للديناميات أكتين PtK1 في الخلايا. وهناك ميزة فريدة من FSM هو قدرته على التقاط الحركة ودوران حركية (التجميع / التفكيك) من شبكة من طراز F - أكتين داخل الخلايا الحية. هذه التقنية مفيدة بشكل خاص في القياسات الكمية المستمدة من طراز F - أكتين ديناميات عندما يقترن برامج الكمبيوتر الرؤية (qFSM). نحن تصف التحديد ، والتصور microinjection تحقيقات أكتين الفلورية في الخلايا الحية. الأهم من ذلك ، إجراءات مماثلة تنطبق على تصور macomolecular الجمعيات الأخرى. وقد ثبت عن FSM ميكروتثبول ، خيوط وسيطة ، والمجمعات الالتصاق.

الاختيار ، microinjection ، والتصوير من fluorescently المسمى F - أكتين عبر الفلورسنت رقطة المجهري (FSM).

يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM)

نصف في هذا البروتوكول استخدام مجهر البقع الفلورية (FSM) لالتقاط صور عالية الدقة لديناميكيات الأكتين في خلايا PtK1. إن...

live-cell-imaging-f-actin-dynamics-via-fluorescent-speckle-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذه الورقة تهدف إلى إرشاد القارئ في عملية متكاملة لقوة ذرية المجهر البصرية التصوير الميكانيكي لتحفيز الخلايا الحية في الثقافة. ويرد بروتوكول خطوة بخطوة. وقدم ممثل مجموعة البيانات التي تظهر استجابة الخلية الحية لتحفيز الميكانيكية.

يعيش استجابة الخلية لتحفيز الميكانيكية المتكاملة التي درستها فرقة الميكروسكوب الضوئي والذرية

التصوير المجهري للخلايا البطانية يعيش معربا عن GFP - الأكتين يسمح توصيف التغيرات الدينامية في الهياكل هيكل الخلية. على عكس التقنيات التي تستخدم عينات ثابتة ، وهذا الأسلوب يوفر تقييما مفصلا للتغيرات الزمنية في الهيكل الخلوي الأكتين في الخلايا نفسها قبل وأثناء وبعد مختلف المحفزات المادية والدوائية ، أو التهابات.

دراسة الهيكل الخلوي أكتين في الخلايا البطانية لايف تعرب عن GFP - أكتين

المعلومات الزمانية المكانية حول البروتينات الديناميكية داخل الخلايا الحية ضرورية لفهم علم الأحياء. يكشف نوع من الفحص المجهري فائق الدقة يسمى الفحص المجهري السريع ثلاثي الأبعاد (f3D-SIM) عن معلومات فريدة حول الحلقة Z الحركية الخلوية في البكتيريا: مظهرها الشبيه بالخرزة والديناميكيات السريعة ل FtsZ داخل الحلقة.

فائقة الدقة التصوير من Cytokinetic Z الدائري في البكتيريا تعيش طريق سريع منظم 3D الإضاءة المجهري (F3D-SIM)

يعد التوزيع المكاني والديناميكيات الزمنية لبروتينات غشاء البلازما والدهون موضوعا ساخنا في علم الأحياء. هنا تتم معالجة هذه المشكلة من خلال تحليل تذبذب الصورة المكانية والزمانية الذي يوفر من الناحية المفاهيمية نفس الكميات الفيزيائية لتتبع الجسيمات المفردة ، ولكنه يستخدم ملصقات جزيئية صغيرة وإعدادات مجهرية قياسية.

من السريع إلى التصوير الإسفار الجزيئية قانون إنتشار على أغشية الخلايا الحية في المجهر التجاري

للتحقيق في سرعات التدفق واتجاهية الأكتين الخيطي في المشبك المناعي للخلية التائية ، يتم دمج التصوير فائق الدقة للخلايا الحية مع تألق الانعكاس الداخلي الكلي وقياسه كميا باستخدام التحليل الطيفي لارتباط الصورة المكانية والزمانية.

القشرية أكتين تدفق في خلايا T كميا بواسطة المكانية والزمانية صورة الارتباط الطيفي للهيكلة الإضاءة المجهر البيانات

نقدم بروتوكول لتطبيق التداخل PhotoActivated التعريب المجهري (iPALM)، 3-الأبعاد جزيء واحد توطين طريقة سوبر قرار المجهر، لتصوير الهيكل الخلوي الأكتين في خلايا الثدييات ملتصقة. هذا النهج يسمح التصور القائم خفيفة من الميزات الهيكلية النانوية التي من شأنها أن تبقى على خلاف ذلك دون حل نتيجة التقليدي المجهر الضوئي محدودة الحيود.

ثلاثي الأبعاد فائقة الدقة المجهر من الشعيرات F-أكتين من التداخل PhotoActivated التعريب المجهري (iPALM)

ويصف هذا البروتوكول أسلوب جديد يسمح للتصور الكمي من تشكيل معقدة من البروتينات الفخ، استناداً إلى نقل الطاقة الرنين فورستر، وعمر fluorescence التصوير المجهري.

تصور داخل الخلايا المطوقة الاتجار بواسطة عمر Fluorescence التصوير المجهري

ونحن تصف كيفية تمكين التقنيات المتناهية الصغر و photomanipulation مثل فراب وفوتواكتيفيشن تحديد بارامترات حركية وديناميات الزمانية المكانية للبروتينات داخل ترحيل الخلايا. قراءات تجريبية تشمل ديناميات سوبسيلولار ودوران المنظمين حركية أو cytoskeleton أكتين الكامنة.

تقنيات ميكرومانيبوليشن يسمح تحليل الديناميات Morphogenetic ودوران للمنظمين سيتوسكيليتال

للتقدم، يجب أن تمارس مخاريط النمو قوى جذب ضد البيئة الخارجية. جيل قوى الجر يعتمد على ديناميات أكتين واقتران مخلب. وتصف هذه الدراسة أساليب لتحليل ديناميات أكتين، اقتران مخلب وقوى الجر للتقدم مخروط النمو.

تحليلات أكتين دايناميكز، اقتران مخلب وقوة الجر للنمو مخروط مقدما

نحن نقدم بروتوكولات لفحوصات الموائع الدقيقة البسيطة لخيوط الأكتين ، بالاشتراك مع الفحص المجهري الفلوري ، والتي تسمح للمرء بمراقبة خيوط الأكتين الفردية بدقة في الوقت الفعلي مع تعريضها بالتتابع لحلول البروتين المختلفة.

استخدام الموائع الدقيقة والمجهر الفلوري لدراسة ديناميكيات تجميع خيوط وحزم الأكتين المفردة

هنا ، نقدم طرقا لتحضير مجموعات الأكتين البلورية السائلة شبه ثنائية الأبعاد (2D) المتشابكة والمتشابكة والمتصالبة من البروتينات المنقاة.

ضبط أوضاع الانقباض والتشوه للتجميعات النشطة القائمة على الأكتين في المختبر: من الشبكات النشطة ثنائية الأبعاد إلى قطرات البلورات السائلة

اكتشف تقنية الميكروسكوب الرقطة النيونية لدراسة ديناميكيات بروتينات الهيكل الخلوي في الخلايا الحية. تُستخدم هذه الطريقة لقياس سرعة البروتينات وحركتها بدقة عالية.

يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM)

استكشف المزيد من الفيديوهات