Name: الحصاد وإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لتسجيل الكهربية وغيرها من الإجراءات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-20T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: تعلم تقنية تشريح أجنة ذبابة الفاكهة لإعداد الأنسجة العصبية العضلية باستخدام الغراء الجراحي المتصلب بالماء. تتيح هذه الطريقة إجراء تسجيلات كهربية ودراسة التطور العصبي العضلي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

معتمد من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح كيلوبايت GM54544.

الجزء 1 : الأجهزة والمعدات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مطلوب مجهر تشريح جيد للتشريح الجنين ؛ يقترح التكبير 40X ، مع قطع العين 25X الحد الأقصى لزيادة التكبير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مطلوبة ملقط غرامة (رقم 5) لاختيار دليل للأجنة وأجنة devitellinization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مطلوب معدات لصنع الزجاج وتعديل الإبر الدقيقة. مطلوبة انسحبت من الزجاج الإبر للتشريح. نحن نفضل الزجاج صلبا للتشريح (تستمر لفترة أطول) ، ولكن معيار أنابيب زجاجية سميكة الجدران (1-1،5 ملم القطر الخارجي) يعمل كذلك. بعض الناس استخدام الإبر التنغستن غرامة ، بالكهرباء إلى الحدة المطلوبة في حمام من هيدروكسيد الصوديوم 1M باستخدام 10 أمبير + autotransformer البطارية. الإبر التنغستن شحذ تشريح لها فائدة أنها مرنة نسبيا وطويل الأمد. وترد الإبر الزجاج جوفاء (مشابهة لتشكيل أقطاب التصحيح المشبك) لأنابيب البلاستيك وتستخدم أثناء تشريح لشفط وطرد من المياه المالحة ، وكذلك التسليم المراقب من الغراء. مجموعة متنوعة من الزجاج جر تتوفر لتصنيع الزجاج الإبر. يمكن للكمبيوتر أن تكون مبرمجة مسبقا جر لسحب مجموعة متنوعة من الأشكال والأحجام. وبراون يلهب النماذج (سوتر الصك شركاه) هي المفضلة على نطاق واسع. وينبغي أن يكون مجمع المجهر (40X 20 هدف) سيكون متاحا لفحص وتعديل كهربائي قبل استخدامه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويشيع استخدام نوعين من الحلول لحمام الأنسجة الجنينية أثناء تشريح : 1) &quot;قياسية&quot; (جان وجان ، 1976a) أو &quot;تعديل المعيار&quot; (Broadie ، 2000) ملاحات ، على أساس الحلول شيوعا للتسجيل في النظم الأخرى اللافقارية ، و 2) &quot;الدموي مثل&quot; (HL) ملاحات (ستيوارت وآخرون 1994) ، حلا وسطا بين المالحة القياسية وقياس التركيزات الأيونية الدموي في ذبابة الفاكهة. تجدر الإشارة إلى أن أيا من هذه ملاحات تحاكي بدقة التركيب الكيميائي للالدموي في الجسم الحي (Broadie ، 2000). يتضمن معيار المالحة (مم) : 135 كلوريد الصوديوم ، 5 بوكل ، 4 MgCl 2 و 1.8 CaCl 2 ، 72 السكروز ، 5 TES ، ودرجة الحموضة 7،2. المجربون قد ترغب أيضا في النظر في إعداد تجاريا المالحة الحشرات (وسائل الإعلام مثل شنايدر الحشرات) ، وهو غير مناسب للتسجيل الكهربية ولكن على الأرجح لحماية صحة الأنسجة المكشوفة. </li></ol> الجزء 2 : التدريج الأجنة والتشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجمع البيض الأمثل ، والحفاظ على الشباب (&lt;7 أيام) ، ذكور الذباب صحية والإناث (20-40) على أواني زرع الطازجة لمدة 2-3 أيام. أواني زرع تتألف في العادة من الأكواب البلاستيكية 100 مل (ثلاثي صب) مثقبة لتوفير ما يكفي من دوران الهواء ، وتغطي لوحة آغار 60 مم. لوحات تحتوي على أجار التفاح أو عصير العنب مع تصلب آغار. عدة وصفات موجودة ، ولكن هو مثال واحد على النحو التالي : 700 مليلتر من الماء ، 25-30 آغار غراما ، و 300 مل من عصير (العنب أو التفاح) ، 0.5g البارابين الميثيل (ف hydroxymethylbenzoate) ، والسكر 30G. الأوتوكلاف الماء وآغار ، وتغلي بشكل منفصل ف hydroxymethylbenzoate مع السكر وعصير. مزيج من عصير آغار والحلول وتصب بسرعة الى 60 ملم لوحات ، وإزالة الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل جمع البيض ، ويتم تغذية الذباب مع لصق الخميرة (7 جرام خميرة بيكر في 9 مل من المياه المخزنة في 4 درجات مئوية) على لوحات جديدة ، تغير ما لا يقل عن مرتين في اليوم لمدة يومين على الاقل. قبل 3 أيام ، يجب أن يكون وعاء جيد إنتاج البيض 100-200 للساعة الواحدة. وقد لوحظ أفضل وضع البيض في وعاء حافظ على جانبها مع آغار في لوحة خدش. وسيتم وضع العديد من الأجنة في أو بالقرب من الخدوش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لجمع أعداد كبيرة من الأجنة ، ونقل الأجنة بلطف من لوحة أجار في سلة باستخدام فرشاة الرسم. ويمكن إجراء سلة مع أنبوب الطرد المركزي 15 أو 50 مل. قطع الجزء السفلي ترك مساحة كافية للاعتراض على شاشة (70 ميكرومتر شبكة) بين الغطاء والجزء العلوي من الأنبوب. شطف الأجنة مع DH 2 0 وضعت في طبق بتري من المبيض بنسبة 50 ٪ الى 100 ​​٪ جديدة لإزالة المشيماء الخارجي. بدلا من ذلك ، يمكن جمع البيض بشكل فردي باستخدام الملقط غرامة ، وdechorionated عن طريق وضعها يدويا في قطرة من التبييض. يمكن اجتثاث chorionation تتخذ من أكثر من 30 ثانية إلى 2 دقيقة (التبييض الطازجة أسرع بكثير) ، وينبغي رصدها تحت مجهر تشريح. إزالة المشيماء يعرض لامعة ، والغشاء المحي شفافة. وينبغي أن البيض Dechorionated تشطف ، أو وضعها في المياه المالحة ، والتبييض يدمر الأنسجة devitellinized بسرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فمن الأهمية بمكان أن مرحلة الأجنة بعناية حتى سن التنموية المنشودة. في المراحل الجنينية تعريف ذبابة الفاكهة (17/01 ؛ كامبوس اورتيغا وHartenstein ، 1985) ليست مفيدة ، وتطوير جميع الوظيفية العصبية والعضلية يحدث في مرحلة متأخرة 16 أو 17 مرحلة. وبالتالي ، فإن قام قبل ساعات التنموية الأجنة عند 25 درجة مئوية في حاضنة مرطب ، في ساعات بعد الإخصاب أو ، وهو الأكثر شيوعا ، وبعد وضع البيض (AEL). في ظل هذه الظروف ، تخلق يدوم 21 + / -- 1 ساعة عند 25 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البيض من وضع البيض توقيت (1-2 ساعةوينظر المقبل) التي تتراوح أعمارهم مناسب لمعايير شكلية. بعد الغسيل واسعة في DH 2 O ، يتم وضع البيض في صحن dechorionated ثقافة البلاستيك (تحت O 2 درهم) للعرض. ويمكن التأكد من التدريج الصحيح مع المعايير المورفولوجية باستخدام الضوء المنعكس مع مجهر تشريح (كامبوس وHartenstein أورتيغا ، 1985). من المسلم به عموما تنضج في وقت متأخر من مرحلة الأجنة (22 - 24H AEL) على وشك الفقس عن طريق تجزئة للبشرة والقصبة الهوائية المتضخمة. ويمكن أيضا استخدام الأجنة يكون genotyped GFP موازنات ومضان المجهر تشريح مع الفلاتر المناسبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتشريح والأجنة ونظموا dechorionated تنمويا المرفقة (الجانب الظهري متابعة) على ساترة تحت قطرة من المياه المالحة (انظر الخطوة 1.5). تتم إزالة غشاء الأجنة من المحي بواسطة ثقب الغشاء قرب نهاية الأمامي أو الخلفي مع micropipette الزجاج أو إبرة التنغستن ، ومن ثم تحرير بلطف الجنين من الغشاء. استعدادا للتشريح ، ينبغي وضع الجنين على ساترة ليصل السطح الظهري (الجانب الظهرية يصل تشريح سيعرض النظام العصبي وبطني neuromusculature للتجارب ، ولكن من الواضح أن يكون وضع الجنين في طرق أخرى لتسهيل الحصول على أخرى الأنسجة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأجنة مرحلة مبكرة (&lt;16 ساعة AEL) نعلق مباشرة لتنظيف الزجاج أو الزجاج المطلي مع متعدد الليزين (بولي - L - يسين هيدروبروميد ؛ Broadie وباتي ، 1993a ، ب). يجب أن يكون لاصق الأجنة كبار السن (&gt; 16 ساعة AEL) ، في أعقاب تشكيل إهاب ، مثالي لcoverslips (داو كورننغ) Sylgard المغلفة. ويتم استخدام المياه البلمرة cyanoacrylate الغراء الجراحية أو البيطرية (Broadie وباتي ، 1993c ، د). يتم تسليم الغراء من خلال ماصة زجاج كهربائي صغير (10-20 ميكرون غيض القطر الداخلي) موصولة إلى أنبوب المطاط مع تدفق الغراء التي تسيطر عليها ضغط الفم. يجب توخي الحذر أثناء الولادة الغراء ، والصمغ polymerizes بسرعة عند الاتصال المالحة. نلاحظ أيضا أنه لا يمكن إجراء الإلتصاق في المياه المالحة أو منخفضة مع عدم وجود تركيزات أيون ثنائي التكافؤ ، كما يتطلب الغراء أيونات ثنائي التكافؤ لتبلمر. واستخدم لأول مرة بكميات صغيرة من الغراء تعلق بحزم الرأس والذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حالما يتم لصقها ينتهي من الجنين الى ساترة ، يتم إجراء شق على طول خط الوسط الظهرية مع القطب الزجاج أو شحذ إبرة التنغستن. يرصد هذا أسهل من خلال ثقب بلطف خط شق قبل اتخاذ خفض النهائي. وترد ثم الجانبين من شق إلى ساترة مع أكثر الغراء ، لنشر بلطف الشقة الجنين. الأعضاء الداخلية بما في ذلك في الأمعاء ، والهيئات والدهون ، اختياريا ، ثم تتم إزالة القصبة الهوائية عن طريق الشفط باستخدام ماصة الزجاج المرفقة أنابيب مطاطية (Broadie وباتي 1993a ، ج). وينبغي الآن أن يرفق الجنين شقة للساترة ، البشرة أسفل بطني مع نظام العصبي المركزي والأعصاب الطرفية ، وعضلات جسدية تتعرض للتجريب. </li></ol>

التدريج الدقيق للأجنة غير الحاسمة نظرا لنضوج السريع للخصائص الفنية على مدار الساعة لعدة ساعات فقط. العديد من القضايا من تعقيد هذا التدريج. أولا ، معظم الباحثين استخدام بويضة لأجنة يضع توقيت المرحلة ، ولكن في المرة البيض يمكن أن تتفاوت كثيرا من الحيوان إلى الحيوان في ظروف مختلفة (Broadie وآخرون 1992). على وجه الخصوص ، والإناث على نظام غذائي محدود تميل إلى الاحتفاظ البويضات المخصبة لفترات طويلة قبل زرع. ولذلك فمن الأهمية بمكان للإناث &quot;واضحة&quot; عن طريق تغذية على نظام غذائي غن...

<table><tbody><tr><td>أقفاص جمع الأجنة</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100 (للأطباق مقاس 60 mm؛ وتتوفر مقاسات أخرى)</td><td>يمكن أيضاً صنع الأقفاص منزلياً باستخدام كؤوس ذات ثلاث فوهات مثقوبة، كما هو موضح في الفيديو</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Dow Corning</td><td>متوفر من شركات مختلفة</td><td>يلتصق الغراء الجراحي بشكل أفضل بالشرائح الغطائية المطلية بمادة sylgard</td></tr><tr><td>أنابيب زجاجية دقيقة، القطر الخارجي 1.0-1.5 mm</td><td>متنوعة</td><td></td><td>لسحبها وتحويلها إلى إبر زجاجية دقيقة للتشريح وأنابيب لإيصال الغراء</td></tr><tr><td>أنابيب بلاستيكية، لتوصيلها بالممص الزجاجي للشفط الفموي ووضع الغراء</td><td>Tygon</td><td></td><td>يجب أن يتطابق القطر الداخلي للأنبوب مع القطر الخارجي للزجاج.</td></tr></tbody></table>

الحصاد وإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لتسجيل الكهربية وغيرها من الإجراءات

Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures

ذبابة الفاكهة نموذجا رئيس الوزراء الجينية لدراسة كل من التطور الجنيني وعلم الأعصاب وظيفية. تقليديا ، لا بأس هذه الحقول المعزولة عن بعضها البعض ، مع تواريخ مستقلة إلى حد كبير والمجتمعات العلمية. ومع ذلك ، فإن التفاعل بين هذه المجالات المتباينة عادة البرامج التنموية الكامنة وراء اكتساب الخصائص الكهربائية وتمايز وظيفي الإشارات الكيميائية من نقاط الاشتباك العصبي وظيفية خلال المراحل النهائية لتشكيل الدوائر العصبية. هذه الواجهة هي منطقة ذات أهمية حاسمة للتحقيق فيها. في ذبابة الفاكهة ، وهذه مراحل التطوير الوظيفي يحدث خلال الفترة من 8 ساعات &lt;(عند درجة 25) خلال الثلث الأخير من مرحلة التطور الجنيني. واعتبر هذه الفترة الطويلة في وقت متأخر نظرا لالتنموية المستعصية التحقيق إلى ترسب من إهاب صعبة ، والبشرة غير منفذة. وكان مقدما اختراق تطبيق المياه البلمرة الغراء الجراحية التي يمكن تطبيقها محليا لإهاب لتمكين تشريح للرقابة في وقت متأخر من مرحلة الأجنة. مع شق طولي ظهري ، يمكن وضع الجنين شقة ، وكشف الحبل البطني العصب وعضلات الجسم الحائط لتحقيق التجريبية. وقد تم استخدام هذا النظام بشكل كبير لعزل وتوصيف طفرات جينية الجنينية التي تعوق تشكيل المشبك ، وبالتالي تكشف عن الآليات الجزيئية التي تحكم مواصفات وتمايز الاتصالات المشبك والوظيفية خصائص متشابك الإشارة.

هذا الأسلوب يعرض neuromusculature الجنينية لذبابة الفاكهة المناعية أو تسجيل الكهربية. ومن المفيد لدراسة الأحداث المبكرة في التنمية العصبية والعضلية أو أداء الكهربية في المسوخ التي لا يفقس.

تعد ذبابة الفاكهة (Drosophila) نموذجاً جينياً رائداً لدراسة كل من التطور الجنيني وعلم الأعصاب الوظيفي. وتقليدياً، كانت هذه المجالات...

لإجراء التسجيلات الفيزيولوجية الكهربائية في أجنة ذبابة الدروسوفيلا، يجب أولاً جمعها وتنسيقها وتشريحها؛ حيث يتم التشريح المنضبط باستخدام غراء جراحي بوليمري مائي يعمل على تثبيت الأجنة على شرائح التغطية. بعد ذلك، يتم إزالة الأعضاء الداخلية من الأجنة المثبتة للكشف عن الجهاز العصبي المركزي البطني، والأعصاب الطرفية، والعضلات الجسدية. مرحباً، أنا ديف فيذرستون من قسم العلوم البيولوجية هنا في جامعة إلينوي في شيكاغو.مرحباً، أنا تون من مختبر ديف فيذرستون في قسم العلوم البيولوجية بجامعة إلينوي في شيكاغو. سنوضح لكم اليوم كيفية جمع وتشريح أجنة سمكة الزيبرا (Zebrafish) في مراحلها المتأخرة يدوياً. نستخدم هذا الإجراء المختبري العام للتحضير لاختبارات التوصيل الكهربائي البديلة لتطور ووظيفة الجهاز العصبي العضلي في سمكة الزيبرا، وهو ما سأعرضه لكم في عرض تقديمي آخر من JoVE.لنبدأ الآن. يبدأ هذا البروتوكول بجمع الأجنة، وهو إجراء شائع يُستخدم في مجموعة متنوعة من تجارب joof، والذي سنراجعه الآن. قم بوضع مزيج من 20 إلى 40 ذبابة شابة من الذكور والإناث في وعاء وضع البيض.يتم وضعها في غرفة ترطيب عند درجة حرارة 25 degrees Celsius. ولتقدير المرحلة التطورية للجنين بدقة، يجب أن تكون درجة الحرارة والرطوبة ثابتتين. وعلى الرغم من توفر أواني وضع البيض التجارية، إلا أنه يمكن تصنيعها من كؤوس بلاستيكية مثقبة بسمك 100 mil تتناسب مع أطباق apple auger بقطر 60 millimeter.يمكن العثور على وصفة مثقاب التفاح في البروتوكول المكتوب. يمكن إجراء الثقوب في الكأس باستخدام مسبار ساخن، ويجب أن تكون أصغر من حجم الذباب البالغ. يتم تدعيم الأطباق بكتلة من معجون الخميرة، والتي ستحفز الإناث على وضع الكثير من البيض؛ اخلط الخميرة والماء حتى يصل المزيج إلى قوام زبدة الفول السوداني، ثم ادهنه على الأطباق باستخدام ملعقة مسطحة.قم بتغيير الطبق مرتين يومياً، وذلك عبر نقر الذباب لإخراجه من الطبق. والآن يمكنني وضع طبق جديد وإعادته إلى الحاضنة. ولكن في هذه الأثناء، يمكنني التحقق من عدد البيض الذي تم وضعه هنا بحلول اليوم الثالث.يجب أن تنتج الوعاء الجيد ما بين 100 إلى 200 بيضة في الساعة، مع وصول أقصى إنتاج للبيض في الفترة ما بين الفجر وأواخر الصباح. ولتبسيط عملية الجمع، يتم خدش أو نحت أصل في برغي لوحة الجمع، حيث سيتم وضع معظم البيض داخل هذه الخدوش أو بجوارها لهذا الإجراء. تُترك الذباب لوضع البيض لمدة تتراوح من ساعة إلى ساعتين، لتمكين حصاد الأجنة في مراحلها المتأخرة، ولكن هذا الإطار الزمني سيختلف اعتماداً على التجربة.ستختلف طرق جمع الأجنة أيضاً بناءً على عدد الأجنة المطلوبة للتجربة. فبالنسبة لعمليات التشريح والفيزيولوجيا الكهربائية، يلزم عدد قليل نسبياً من الأجنة، وفي هذه الحالة يمكن التقاطها برفق من الأطباق باستخدام ملاقط دقيقة. ولإزالة الغشاء الكوريوني الخارجي، اشطف الأجنة بالماء المقطر وضعها في طبق يحتوي على مبيض (bleach) طازج بتركيز 50 إلى 100%، مع مراقبة الأجنة تحت مجهر تشريحي.بعد مرور 30 إلى 120 ثانية، ستتحلل القشرة الخارجية (corion) لتكشف عن الغشاء الحيوي الشفاف واللامع. ونظراً لأن المبيض يمكن أن يدمر الأنسجة الحية بسرعة، يجب شطف البيوض منزوعة الكلور لفترة وجيزة أو وضعها في محلول ملحي. ضع البيوض منزوعة الكلور في طبق زراعة بلاستيكي يحتوي على ماء مقطر.في هذا الوقت، يمكن تحديد الأنماط الجينية بصرياً عن طريق فحص علامات GFP باستخدام مجهر تشريح فلوري، وبمجرد فرز الأجنة المطلوبة وباستخدام المرشحات المناسبة، يتم البدء في عملية التشريح. ونظراً لأن الأجنة صغيرة جداً بحيث لا يمكن استخدام دبابيس التشريح معها، فإن الأمر يتطلب بعض التحضيرات المسبقة. يجب لصق الأجنة الأكبر سناً ذات القشيرات المتطورة على شرائح غطاء مطلية بالصمغ باستخدام صمغ السيانوأكريليت الجراحي أو البيطري، والمعروف أيضاً باسم histo aal.تعمل مادة Blue بشكل جيد لأنها تتبلمر عند ملامستها لمحلول يحتوي على أيونات ثنائية التكافؤ. ابدأ عملية التشريح بنقل الجنين المطلوب إلى شريحة غطاء مطلية بمادة cigar تحت قطرة من المحلول الملحي بحيث يكون الجانب الظهري للأعلى. قم بإزالة الغشاء الحيوي عن طريق إجراء شق صغير في الغشاء باستخدام ماصة مجهرية زجاجية أو إبرة تنجستن.ثم قم بتحرير الجنين بلطف من الغشاء. ستلتصق الأجنة في مراحلها المبكرة مباشرة بالزجاج النظيف أو الزجاج المغطى بـ poly L lysine. أما بالنسبة للأجنة الأكبر سناً، فقم بتثبيتها على شرائح غطاء مغطاة بـ sard عن طريق وضع غراء جراحي باستخدام ماصة زجاجية صغيرة متصلة بأنبوب مطاطي.يتم التحكم في تدفق الغراء عن طريق الفوهة. استخدم كميات صغيرة من الغراء لتثبيت الرأس والذيل بإحكام. قم بذلك بعناية لأن الغراء يمتزج بسرعة في المحلول الملحي.لتشريح الجنين المثبت، قم بعمل ثقوب بلطف على شكل خط على طول الخط الناصف الظهري باستخدام قطب زجاجي أو إبرة تنجستن مدببة. وباستخدام الأداة نفسها، قم بإجراء شق عن طريق القطع عبر الثقوب. ومن الضروري أن تكون إبرة التشريح دائمًا بزاوية ضحلة لتجنب إتلاف الجهاز العضلي العصبي البطني.بعد ذلك، قم بإزالة الأعضاء الداخلية باستخدام شفط فموي لطيف عبر ماصة زجاجية متصلة بأنبوب مطاطي. قم ببسط الجنين بشكل مسطح باستخدام المزيد من الغراء لتثبيت جوانب الشق على شريحة التغطية. وبمجرد شفط جميع الأعضاء الداخلية، تصبح الأعصاب الطرفية للجهاز العصبي المركزي البطني والعضلات الجسدية مكشوفة لإجراء التجارب.في هذه المرحلة، يكون الجنين جاهزاً لإجراء التسجيلات الفيزيولوجية الكهربائية أو يمكن تثبيته لإجراء الكيمياء النسيجية المناعية والفحص المجهري اللاحق باستخدام التقنيات التقليدية. لقد عرضنا لكم للتو كيفية عزل وتشريح الأجنة في المراحل المتأخرة الأكثر ليونة. قد يكون تطبيق الغراء الجراحي وتشريح الأجنة أمراً محبطاً في البداية، ولكن لا توجد حيل سرية في ذلك.يجب عليك تطوير المهارات الحركية الدقيقة من خلال الممارسة على مدى عدة أسابيع، ولكن ستزداد نسبة عمليات التشريح الناجحة تدريجياً. يرجى الاطلاع على الفيديو الآخر الخاص بنا، والذي يفصل تكوينات التسجيل من الخلايا العضلية والعصبونات الحركية. هذا كل شيء.شكراً للمشاهدة وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

harvesting-preparing-drosophila-embryos-for-electrophysiological

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

هذا الفيديو يوضح إعداد الثقافات العصبية الأولية من أجنة ذبابة الفاكهة midgastrula المرحلة. آراء الثقافات الحية تظهر الخلايا 1 بعد ساعة من الطلاء ، والخلايا العصبية متباينة بعد 2 أيام من النمو في وسط بيكربونات المستندة إلى المعرفة. والخلايا العصبية كهربائيا منفعل وشكل اتصالات متشابك.

التحضير للثقافات متعلق بالخلايا العصبية من أجنة ذبابة الفاكهة المرحلة Midgastrula

ويقدم طريقة بسيطة وغير مكلفة وفعالة للتحضير للأجنة ذبابة الفاكهة تعيش التصوير التحليل. بروتوكول يتيح لنا الرطوبة والغاز والصرف لا ضغط الجنين ذبابة الفاكهة. هذا الأسلوب هو مناسبة لGFP القائم على التصوير المباشر للأجنة ذبابة الفاكهة باستخدام stereomicroscope أو تستقيم المجهر المركب.

لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق

الكهربية في تسجيل ذبابة الفاكهة الأجنة

نحن تصف عملية لترسيخ وتثبيت ، sectioning ، والتصوير من مرحلة...

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

نحن هنا وصف كامل الفلورسنت...

كله جبل RNA نيون<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة

الهدف من هذا البروتوكول هو توفير نهج مباشر وغير مكلفة لجمع الأجنة ذبابة الفاكهة على نطاق متوسط ​​(0.5-1 ز) وإعداد مقتطفات البروتين التي يمكن استخدامها في التطبيقات البروتين المصب، مثل تقارب مطياف الكتلة تنقية (أب-مس ).

إعداد على نطاق متوسط ​​من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مقتطفات الجنين للتجارب بروتيوميك

يصف هذا العمل بروتوكول لتوليد عالية الدقة في الموقع مرحبا-C مكتبات من أحكام نظموا قبل جاستروليشن melanogaster المورفولوجية الأجنة.

جيل من الكروماتين على نطاق الجينوم تكيف التقاط المكتبات من الأجنة المورفولوجية محكم نظموا في وقت مبكر

نحن نقوم بوصف طريقه للتتبع العكسي للخلايا العصبية للمحركات الجنينية باستخدام اصباغ فلورية للدهون.

التتبع العكسي للخلايا العصبية للمحركات الجنينية باستخدام الاصباغ الفلورية الليبوهيلليك

يتم تقديمها هنا هو بروتوكول لmicroinject وفي وقت واحد صورة الأجنة Drosophila متعددة خلال النمو الجنيني باستخدام لوحة المستندة إلى، صورة عالية المحتوى.

Drosophila إعداد الجنين و Microinjection لالمجهر الخلية لايف تنفيذها باستخدام محلل المحتوى العالي الآلي

يلعب انقباض Actomyosin دورا مهما في تكوين الخلايا والأنسجة. ومع ذلك ، من الصعب التلاعب بانقباض الأكتوميوسين في الجسم الحي بشكل حاد. يصف هذا البروتوكول نظاما بصريا وراثيا يثبط بسرعة انقباض الأكتوميوسين بوساطة Rho1 في أجنة ذبابة الفاكهة ، مما يكشف عن الفقدان الفوري للتوتر الظهاري بعد تعطيل الأكتوميوسين في الجسم الحي.

تثبيط البصريات الوراثية لانقباض أكتوميوسين بوساطة Rho1 إلى جانب قياس التوتر الظهاري في أجنة ذبابة الفاكهة

تعلم تقنية تشريح أجنة ذبابة الفاكهة لإعداد الأنسجة العصبية العضلية باستخدام الغراء الجراحي المتصلب بالماء. تتيح هذه الطريقة إجراء تسجيلات كهربية ودراسة التطور العصبي العضلي.

الحصاد وإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لتسجيل الكهربية وغيرها من الإجراءات

استكشف المزيد من الفيديوهات