Name: رصد وظيفة القلب في اليرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن للدراسات فسيولوجية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-16T17:02:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: اكتشف تقنيات رصد وظيفة القلب في يرقات Drosophila melanogaster للدراسات الفسيولوجية. تتضمن الطرق التحضيرات السليمة والمفصوصة وتسجيلات الجهد الكهربائي لتحليل قنوات الأيونات ونشاط الناظم.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تمويل المنح الدراسية التي تقدمها Ribble زاي في قسم علم الأحياء ، والباحثون كنتاكي الشباب والمرحلة الجامعية ، وجدتها! مكتب (جامعة من كنتاكي).

<ol><li>Ashton, K., Wagoner, A. P., Carrillo, R., Gibson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+trait+loci+for+the+monoamine-related+traits+heart+rate+and+headless+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Quantitative trait loci for the monoamine-related traits heart rate and headless behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 157, 283-294 (2001).</li>
<li>Azpiazu, N., Frasch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinman+and+Bagpipe%3A+Two+homeo+box+genes+that+determine+cell+fates+in+the+dorsal+mesoderm+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Tinman and Bagpipe: Two homeo box genes that determine cell fates in the dorsal mesoderm of Drosophila.</a> Genes & Development. 7, 1325-1340 (1993).</li>
<li>Badre, N. H., Martin, M. E., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+and+behavioral+effects+of+carbon+dioxide+on+Drosophila+melanogaster+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">The physiological and behavioral effects of carbon dioxide on Drosophila melanogaster larvae.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 140, 363-376 (2005).</li>
<li>Baker, J. D., McNabb, S. L., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hormonal+coordination+of+behavior+and+physiology+at+adult+ecdysis+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The hormonal coordination of behavior and physiology at adult ecdysis in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 3037-3048 (1999).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Bodmer, R., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+homeobox-containing+gene%2C+msh-2%2C+is+transiently+expressed+early+during+mesoderm+formation+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A new homeobox-containing gene, msh-2, is transiently expressed early during mesoderm formation of Drosophila.</a> Development. 110, 661-669 (1990).</li>
<li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+activity+of+Drosophila+larvae%3A+Impedance+%26+video+microscopy+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">Monitoring activity of Drosophila larvae: Impedance & video microscopy measures.</a> Drosophila Information Service. 87, 85-87 (2004).</li>
<li>Dasari, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+influence+of+serotonin+on+the+larval+heart+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Direct influence of serotonin on the larval heart of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Physiol. B. 176, 349-357 (2006).</li>
<li>Dasari, S., Viele, K., Turner, A. C., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+p-CPA+and+MDMA+on+physiology%2C+development+and+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22European+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Influence of p-CPA and MDMA on physiology, development and behavior in Drosophila melanogaster.</a> European J. Neurosci. 26, 424-438 (2007).</li>
<li>Dowse, H., Ringo, J., Power, J., Johnson, E., Kinney, K., White, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+congenital+heart+defect+in+Drosophila+caused+by+an+action-potential+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A congenital heart defect in Drosophila caused by an action-potential mutation.</a> J. Neurogenetics. 10, 153-168 (1995).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Neurosci. 25, 271-280 (2005).</li>
<li>Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J. Neurogenetics. 18, 377-402 (2004).</li>
<li>Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+ion+channel+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of ion channel dysfunction in Drosophila.</a> Kidney International. 3, 766-771 (2000).</li>
<li>GG, G. u <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+heartbeat+in%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila.+J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of heartbeat in.</a> Drosophila. J. Neurobiol. 28, 269-280 (1995).</li>
<li>He, B., Adler, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+in+the+development+of+the+Drosophila+arista%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms in the development of the Drosophila arista.</a> Mechanisms of Development. 104, 69-78 (2001).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J. Comp. Physiol. B. 167, 89-97 (1997).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Bray, N., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+identification+of+ion+channels+central+to+the+Drosophila+cardiac+pacemaker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological identification of ion channels central to the Drosophila cardiac pacemaker.</a> J. Neurogenetics. 12, 1-24 (1998).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+heterologous+neuropeptides+are+cardioactive+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Native and heterologous neuropeptides are cardioactive in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 1, 1229-1236 (2000).</li>
<li>Johnson, E., Sherry, T., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+cardiac+pacemaker+of+Drosophila%3A+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.%2C+Systemic%2C+Environmental+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the cardiac pacemaker of Drosophila: cellular mechanisms.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem., Systemic, Environmental Physiol. 172, 227-236 (2002).</li>
<li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+standard+food+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Inform.+Serv%22%5BJournal%5D)">A new standard food medium.</a> Drosophila Inform. Serv. 34, 117-117 (1960).</li>
<li>Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+circulation+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22General+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of circulation in insects.</a> General Pharmacol. 29, 23-38 (1997).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mechanisms of Development. 118, 51-59 (2001).</li>
<li>Muller, K. J., Nicholls, J. G., Stent, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMuller%2C+KJ+%22Neurobiology+of+the+Leech%22">Neurobiology of the Leech</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 254-254 (1981).</li>
<li>Nichols, R., Kaminski, S., Walling, E., Zornik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+activity+of+a+cardioacceleratory+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulating the activity of a cardioacceleratory peptide.</a> Peptides. 20, 1153-1158 (1999).</li>
<li>Ocorr, K., Akasaka, T., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cardiac+disease+model+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Age-related cardiac disease model of Drosophila.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 128, 112-116 (2007a).</li>
<li>Ocorr, K. A., Crawley, T., Gibson, G., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+for+cardiac+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genetic variation for cardiac dysfunction in Drosophila.</a> PLoS ONE. 2, e601-e601 (2007).</li>
<li>Papaefthmiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+method+for+recording+the+electrical+activity+of+the+isolated+heart+of+the+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">An in vitro method for recording the electrical activity of the isolated heart of the adult Drosophila melanogaster.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biol. Animal. 37, 445-449 (2001).</li>
<li>Peron, S., Zordan, M. A., Magnabosco, A., Reggiani, C., Megighian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+action+potential+to+contraction%3A+Neural+control+and+excitation-contraction+coupling+in+larval+muscles+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.Physiol.+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiol%22%5BJournal%5D)">From action potential to contraction: Neural control and excitation-contraction coupling in larval muscles of Drosophila.</a> Comp. Biochem.Physiol. A: Molecular & Integrative Physiol. 154, 173-183 (2009).</li>
<li>Ponzielli, R., Astier, M., Chartier, A., Gallet, A., Therond, P., Semeriva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+tube+patterning+in+Drosophila+requires+integration+of+axial+and+segmental+information+provided+by+the+Bithorax+Complex+genes+and+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Develop%22%5BJournal%5D)">Heart tube patterning in Drosophila requires integration of axial and segmental information provided by the Bithorax Complex genes and hedgehog signaling.</a> Develop. 129, 4509-4521 (2002).</li>
<li>Sl ma, K., Farkas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+patterns+during+the+postembryonic+development+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat patterns during the postembryonic development of Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 51, 489-503 (2005).</li>
<li>St hmer, W., Roberts, W. S., Almers, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSt+hmer%2C+W+%22Single+channel+recordings%22">Single channel recordings</a>. Sakmann, B., Neher, E. The loose patch clamp, Plenum Press. New York. 123-132 (1983).</li>
<li>Wessells, R. J., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+assays+for+heart+function+mutants+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Screening assays for heart function mutants in Drosophila.</a> Biotechniques. 37, 58-66 (2004).</li>
<li>Zornik, E., Paisley, K., Nichols, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+transmitters+and+a+peptide+modulate+Drosophila+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Neural transmitters and a peptide modulate Drosophila heart rate.</a> Peptides. 20, 45-51 (1999).</li>
</ol>

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدوات تشريح : الجميلة # 5 ملاقط ومقصات غرامة (الحصول على جميع العلوم من أدوات الجميلة (الولايات المتحدة) ، وشركة ، 373 - G فخمة بارك محرك ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا 94404-1139) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح المجهر مع وظيفة التكبير والتصغير للتشريح والفرز معدل ضربات القلب. لتحفيز التنسيق للقلب هناك حاجة لذلك أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتسجيلات خارج الخلية داخل الخلايا ويستخدم مجهر مركب تستقيم مع أهداف (4 x و 20X). مضخم الخلايا القياسية وA / D لوحة تسجيل على الخط لجهاز كمبيوتر. يتم تسجيل الإشارات الكهربائية على الخط إلى واجهة PowerLab/4s (ADInstruments واستراليا). نستخدم البرامج القياسية من ADInstruments اسمه تخطيط أو نطاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكيماويات : يتم الحصول على جميع المواد الكيميائية المالحة من شركة سيغما الكيميائية (سانت لويس ، MO). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتسجيلات الخلايا نستخدم أنابيب الزجاج الشعرية (كتالوج # 30-31-0 من FHC ، برونزويك ، ME ، 04011 ، الولايات المتحدة) لتسجيل وmacropatch الاتصال وتحفيز كهربائي نستخدم Kimax - 51 ، كيمبل منتجات الفن. رقم 34502 ، رقم 0.8 1.1mm ، طول 100mm. ينبغي أن يكون القطب الخلايا المقاومة بين 20 و 30 mOhm. هي التي شيدت من قبل القطب macropatch قطع غيض من الزجاج بعد أن قدم معلومات سرية غرامة من مجتذب الكهربائي. غيض قبالة كسر يحتاج إلى فترة انقطاع عن 20μM عمودي نظيفة في القطر. غيض من الحرارة ثم مصقول ل10μM عن القطر الداخلي للتسجيل خارج الخلية التنسيق. للتحفيز الكهربائي للقلب محرك نستخدم طرف النهائي من حوالي 20-50 ميكرومتر في القطر. يتم تشغيل رمح القطب على عنصر التدفئة لتجعله ينحني نحو 45 درجة مئوية مع منحنى تدريجيا. هذا ينتج شقة أو التجويف الكهربائي عمودي على أنبوب القلب وزاوية مع تتلاعب الصغيرة سوف تنتج نحو 45 درجة أخرى إلى الإعداد. </li></ol>

رصد وظيفة القلب في اليرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن للدراسات فسيولوجية

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

نقدم أساليب مختلفة لتسجيل وظيفة القلب في اليرقات<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt;. النهج يسمح بقياس معدل ضربات القلب في كل اليرقات غير المقيد وضبط النفس. للسيطرة المباشرة للبيئة حول القلب نهج آخر يستخدم يرقات تشريح وإزالة الأجهزة الداخلية من أجل الاستحمام القلب في المركبات المطلوبة. قلب يتعرض يسمح أيضا لرصد الامكانيات الغشاء الذي يمكن أن تعطي فكرة للتيارات الأيونية التي تم إنشاؤها بواسطة myocytes والتوصيل الكهربائي على طول أنبوب القلب. هذه المقاربات المختلفة لديها مزايا وعيوب للتجارب التي تمت مناقشتها في المستقبل. إعداد القلب اليرقات نموذجا إضافية إلى جانب<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; NMJ الهيكل العظمي للتحقيق في دور تنظيم الكالسيوم داخل الخلايا على وظيفة الخلوية. تعلم المزيد حول التيارات الأساسية التي تشكل الأيونية إمكانات العمل في myocytes في مختلف الأنواع ، ويمكن للمرء أن يأمل في الحصول على التعامل مع الاختلالات في الأيونية المعروفة المرتبطة جينات محددة مسؤولة عن الأمراض المختلفة في الثدييات.

نقدم وسائل مختلفة لمراقبة وظيفة القلب في يرقة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; لتقييم الأسئلة التعامل مع وظيفة تقاطعات الفجوة ، والطفرات القناة الايونية ، تعديل تنظيم ضربات القلب والنشاط الدراسات الدوائية.

نقدم طرقاً متنوعة لتسجيل الوظيفة القلبية في يرقات ذبابة الفاكهة (Drosophila). وتتيح هذه المنهجيات قياس معدل ضربات القلب في حالات عدم التقييد و...

تعد ذبابة الفاكهة Drosophila جذابة وراثياً لإجراء تحقيقات حول تطور القلب ووظيفته ونشاط منظم ضربات القلب الكامن. يوضح هذا الإجراء كيفية إعداد تحضيرات من اليرقات السليمة والمشرحة، وكيفية مراقبة معدل ضربات القلب. كما يسمح التحضير المشرح بتسجيل الجهود خارج الخلوية أو داخل الخلوية لمزيد من الوصول إلى وظيفة القنوات الأيونية.مرحباً، أنا روبن كوبر، عضو هيئة تدريس في قسم الأحياء بجامعة كنتاكي. سيقوم طلابي اليوم، آن كوبر، وكايلا ريمان، ومات وارد، وإيستر بوكو، بعرض إجراءات مختلفة لمراقبة معدل ضربات القلب في يرقات Drosophila. تُسمى الطريقة التالية غير المقيدة بطريقة "مزرعة النمل" لأن اليرقات يتم تصويرها ضمن مستوى بؤري واحد.لأفضل رؤية للييرقات، استخدم مجهراً تشريحياً بعدسة شيئية أساسية بقوة 2x وعدسة أنبوبية بقوة 0.5x لتحقيق أفضل دقة مكانية وتكبير لمساحة مستطيلة تبلغ 1 سنتيمتر في 0.5 سنتيمتر. يمكن تسجيل الصور ومقاطع الفيديو عبر كاميرا مثبتة على العدسة العينية. لبدء هذه الطريقة، ضع اليرقة بين شريحتين زجاجيتين مع طبقة رقيقة من الغذاء.يتم تثبيت الشرائح بحيث تكون المسافة بينها من 1 إلى 1.5 مليمتر باستخدام فواصل بلاستيكية على الجوانب الأربعة. قم بإمالة العينة بزاوية تتراوح بين 20 و 45 درجة لبضع دقائق لتحفيز اليرقة على إبقاء رأسها متجهاً للأسفل. اضبط مرآة المجهر للحصول على أفضل تباين للقلب أو القصبتين الهوائيتين لمراقبة ضربات القلب.تعد طريقة الغراء وسيلة تثبيت دائمة لتقييد اليرقات على شريحة زجاجية. لبدء طريقة الغراء، ضع غطاء شريحة نظيفًا فوق شريحة زجاجية، ثم ضع قطرة صغيرة من الغراء القوي (super glue) على أحد أركان غطاء الشريحة.بعد ذلك، اشطف اليرقات بالماء. ولإزالة الطعام الزائد، امتص السائل باستخدام منديل ورقي أو طرف منشفة ورقية. وبمجرد شطف اليرقة جيداً، التقطها برفق باستخدام ملقط نظيف وضعها على الشريحة بعيداً عن غطاء الشريحة تحت المجهر، مع توجيه اليرقة بحيث تكون على بطنها.ستظهر على المعدة أخاديد أفقية باهتة تمتد على طولها مع وجود شعيرات سوداء دقيقة. يجب أن يكون ظهر اليرقات متجهًا للأعلى ويتميز بوجود خطين متوازيين يمثلان القصبات الهوائية. باستخدام مجموعة ثانية من الملاقط المخصصة حصريًا للتعامل مع الغراء، خذ كمية صغيرة من القطرة الموجودة في نهاية الشريحة وضعها عند الزاوية في الجانب المقابل.استخدم كمية ضئيلة تكفي فقط لتغطية رأس الملقط. التقط الحيوان وضعه على الغراء مع التأكد من بقاء الجانب البطني للأسفل باتجاه الفوهة السوداء.يجب أن تكون الخطاطيف عند حافة غطاء الشريحة أو بالقرب منها، وكذلك خطاطيف الفم واللولب البني. يجب ألا تلامس الغراء. اضغط برفق على اليرقة لتسطيحها.لتطبيق المادة المختبرة، يفضل توزيع قطرات صغيرة باستخدام حقنة بالقرب من رأس اليرقة. يتم رصد معدل ضربات القلب عن طريق عد عدد مرات نبض الحلزونات في الدقيقة الواحدة. ولإجراء ملاحظات لفترات أطول، يمكن تغذية اليرقات في مكانها وترطيبها لمنع الجفاف. ولصنع لوح تشريح صالح للاستخدام تحت المجهر، استخدم مشرطاً لقطع ثقب بقطر 2 cm في مركز قطعة من الشريط المغناطيسي ثم ألصقها بشريحة زجاجية.استخدم دبابيس تشريح تم ثنيها ولصقها بمشابك ورقية لتسهيل عملية التثبيت. أثناء التشريح، ضع يرقات نجمية في مرحلة الثلث الثالث السليمة على لوح التشريح. مع توجيه الجانب الظهري للأعلى، يجب أن تكون القصبة الهوائية مرئية من خلال الجلد الخارجي.ضع دبوسين في اليرقات على جانبي خطافات الفم، ودبوسين آخرين على جانبي الحلزونات. بعد ذلك، أضف المحلول الملحي للحفاظ على رطوبة اليرقات. ثم قم بإجراء شق أفقي عند الطرف الملتف، يليه قطع طولي يستمر بمحاذاة الحلزونات باتجاه رأس الحيوان.ارفع دبوساً ظهرياً واحداً وقم بتعليقه أسفل القشيرة. استخدم الدبوس للتوسيع. افتح تجويف الجسم.كرر العملية مع الدبابيس الثلاثة الأخرى. بمجرد تثبيت الحيوان وهو مفتوح، قم بإزالة الأحشاء مع الحرص على عدم إتلاف الرغامي أو القلب. ترتبط بعض التراكيب، بما في ذلك الدماغ وبعض الأجسام الدهنية، بالقلب وسوف يتضرر القلب عند إزالتها.اترك التحضير ليرتاح في حمام محلول ملحي HL three لمدة تتراوح من ثلاث إلى خمس دقائق بعد التشريح؛ حيث يتم إجراء التسجيلات داخل الخلوية والميدانية في هذا التحضير مع تطبيق العوامل الدوائية مباشرة على القلب. يستغرق إجمالي وقت خطوة التشريح هذه من ثلاث إلى ست دقائق. لإجراء التنبيه الكهربائي، يجب أولاً تجهيز أقطاب كهربائية بؤرية؛ وذلك بتمرير قطب زجاجي فوق عنصر تسخين لصقله بالنار وعمل ثنية تدريجية بزاوية 45 درجة تقريباً، ثم قم بتثبيت القطب البؤري المملوء بمحلول ملحي HL three بدرجة حرارة الغرفة في جهاز التحكم (manipulator) بحيث يكون الطرف متجهاً لأسفل.تأكد من ملامسة سلك المحفز للمحلول الملحي داخل القطب ومن أن المحفز في وضع الإيقاف. قم بتثبيت تحضير حديث لتشريح القلب على المجهر. ضع سلك التأريض في المحلول الملحي.مع الحرص على عدم لمس الدبابيس أو إزعاج التحضير. حافظ على تركيز الرؤية على القطب الكهربائي أثناء استخدام جهاز التحكم لتحريكه لأسفل في المحلول الملحي. وبمجرد وصوله إلى المحلول الملحي، ضع طرف القطب بحيث يكون اللمعة مسطحة مقابل القلب وتلامسه بخفة.بمجرد وضع القطب الكهربائي، اضبط تردد جهاز التحفيز عند 2 hertz مع ضبط الجهد الكهربائي على أدنى إعداد له. قم بتشغيل جهاز التحفيز. ثم اضبط التردد ليكون حوالي 3 hertz وزد الجهد الكهربائي ببطء حتى تزداد سرعة ضربات القلب لتتوافق مع إيقاع جهاز التحفيز.يمكن الآن التحكم في النظم عن طريق جهاز التحفيز. كما يمكن إضافة مركبات لمعرفة ما إذا كانت تؤثر على الانقباض أو التوصيل الكهربائي. لإجراء تسجيلات الجهد الميداني، املأ قطب تسجيل الماكرو باتش (macro patch) بالوسط الاستحماني وثبته في جهاز تحكم دقيق على مجهر مركب.قم بتوصيل القطب الكهربائي بمضخم وجهاز تسجيل. استخدم الموجه لخفض تجويف القطب الكهربائي فوق قلب عينة تشريح مثبتة بالمجهر. المس القلب بطرف القطب الكهربائي بلطف شديد.يمكن الآن إجراء تسجيلات ميدانية لتسجيل الجهود الميدانية من منطقة أخرى من القلب. ارفع طرف القطب الكهربائي برفق وحركه إلى منطقة جديدة باستخدام الملاعب، ثم ابدأ مجدداً في تسجيلات الجهد الميداني للطرف. يتيح ذلك مراقبة دقيقة لمعدل ومدة الإشارات الكهربائية في القلب لقياس الجهود عبر الغشائية للخلايا العضلية القلبية في اليرقات.أولاً، تأكد من أن تجويف قطب كهربائي حاد مملوء بـ 3 molar potassium chloride مسطح تماماً مقابل القلب بزاوية 45 درجة تقريباً من الوضع العمودي. وبمجرد تحديد الموضع بشكل صحيح، المس القلب برفق بطرف القطب الكهربائي ثم أدخل الطرف في خلية. يمكن إعادة استخدام القطب الكهربائي إذا لم يكن مكسوراً.تسمح التسجيلات داخل الخلوية بقياس الأساس الأيوني لجهد الفعل والأشكال المميزة للجهود لفحص تأثيرات طفرات القنوات الأيونية أو معدلات القنوات. لقد عرضنا لكم للتو كيفية إجراء تسجيلات القلب، بالإضافة إلى كيفية قياس الجهود داخل الخلوية وجهود المجال. يمكنك استخدام هذه التقنيات لدراسة التغيرات القلبية، بالإضافة إلى التدخلات الدوائية والتعديلات الجينية.عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم عدم سحب أي بنية مرتبطة متصلة بالقلب أو الضغط بقوة مفرطة باستخدام القطب البؤري. كذلك عند استخدام طريقة اللصق، يجب الحرص على عدم لصق الفم أو الكرة بحيث تُغلق. هذا كل شيء.شكرًا للمشاهدة وتمنياتنا بالتوفيق في تجاربكم.

monitoring-heart-function-larval-drosophila-melanogaster-for

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

دراسة السلوك الحركي المعقد...

عالية الدقة تعقب الفيديو للتنقل في الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن

الكهربية في تسجيل ذبابة الفاكهة الأجنة

التقنية اللازمة لوضع الرؤية والقلب النابض في اليرقات وتعليم...

تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة</em

قمنا بتطوير شبه الآلي التحليل البصري نبضات أسلوب (سهى) لتحليل تسجيلات عالية السرعة الضوئية...

شبه الآلي التحليل البصري نبضات القلوب الصغيرة

يصف هذا التقرير طريقة لقياس نشاط يرقات ذبابة الفاكهة باستخدام مراقب نشاط ذبابة الفاكهة TriKinetics. يستخدم الجهاز أشعة الأشعة تحت الحمراء للكشف عن حركات ما يصل إلى 16 فرديا. يمكن تحليل البيانات لتمثيل معلمات الحركة بما في ذلك معدلات ومواقع داخل غرف الفحص.

قياس اليرقات آخر في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مراقبة النشاط

هنا ، يتم وصف البروتوكولات التجريبية لإعداد ذبابة الفاكهة في مراحل نمو مختلفة وإجراء التصوير البصري الطولي لذبابة الفاكهة بنبضات القلب باستخدام نظام مجهري التماسك البصري المخصص (OCM). يمكن تمييز التغيرات المورفولوجية والديناميكية القلبية كميا من خلال تحليل المعلمات الهيكلية والوظيفية للقلب من صور OCM.

إعداد ذبابة الفاكهة والتصوير الطولي من وظيفة القلب في فيفو باستخدام البصرية بالاتساق المجهري (OCM)

ويصف البروتوكول مقايسة بسيطة التعرف على يرقات melanogaster المورفولوجية التي تعاني من نقص تحت مستويات الأوكسجين الغلاف الجوي العادي. ويسمح هذا البروتوكول اليرقات التاكسج ينبغي تمييز من طفرات أخرى تظهر متداخلة تعمل مثل الركود أو بطء النمو.

"مقايسة" Burrowing/النفقي "الكشف عن نقص" في اليرقات melanogaster المورفولوجية

ويصف هذا البروتوكول وسيلة لتسجيل النشاط الكهربائي تنازلي للنظام العصبي المركزي melanogaster المورفولوجية لتمكين فعالة من حيث التكلفة ومريحة لاختبار وكلاء الدوائية، الطفرات الوراثية للبروتينات العصبية، و/أو دور مسارات الفيزيولوجية غير مستكشفة.

تسجيل الكهربية لنشاط الجهاز العصبي المركزي للطور الثالث Melanogaster المورفولوجية

يصف هذا البروتوكول جيل ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر التي تعبر عن eNpHR2.0 أو ReaChR opsins في القلب لتصوير OCT وسرعة القلب البصرية الوراثية. تم الإبلاغ عن تعليمات مفصلة لتصوير ذبابة الفاكهة OCT وتعديل ضربات القلب ، بما في ذلك محاكاة السكتة القلبية القابلة للاستعادة ، وبطء القلب ، وعدم انتظام دقات القلب في الحيوانات الحية في مراحل النمو المختلفة.

تطوير نماذج ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر للتصوير والتحكم البصري الوراثي لوظيفة القلب

يقدم البروتوكول طريقة عالية الإنتاجية وفعالة من حيث التكلفة لتقييم السمية العصبية في ذبابة الفاكهة من خلال القياس الكمي للخلل الحركي كبديل لنماذج الثدييات التقليدية. يهدف إلى تقييم التأثيرات السامة للأعصاب للمركبات الصيدلانية أو العوامل البيئية أو التعديلات الجينية باستخدام نموذج حساس وقابل للتكرار ومفضل أخلاقيا.

التحليل السلوكي للخلل الحركي في ذبابة الفاكهة السوداء كقراءة للسمية العصبية

اكتشف تقنيات رصد وظيفة القلب في يرقات Drosophila melanogaster للدراسات الفسيولوجية. تتضمن الطرق التحضيرات السليمة والمفصوصة وتسجيلات الجهد الكهربائي لتحليل قنوات الأيونات ونشاط الناظم.

رصد وظيفة القلب في اليرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن للدراسات فسيولوجية

استكشف المزيد من الفيديوهات