Name: PuraMatrix تغليف الخلايا السرطانية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: اكتشف طريقة تغليف خلايا سرطان المبيض CAR5 في هيدروجيل PuraMatrix لإنشاء نماذج ثلاثية الأبعاد. يُحسّن هذا البروتوكول دراسة استجابة الأورام للعلاجات المختلفة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ملاحظات فنية : <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبدأ تهليم من خلال إضافة الأملاح. لذا ، فمن الأهمية بمكان أن لا أملاح تأتي في اتصال مع PuraMatrix هو المطلوب حتى تهليم ؛ التعرض للأملاح أيونية قوة منخفضة جدا (على سبيل المثال ، &lt;0.05 م) سوف يتسبب تهليم لا رجعة فيه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن استخدام الحلول الأسهم المتبقية التي يتم إعدادها في وقت لاحق شريطة ألا يكونوا قد تأتي في اتصال مع الأملاح. كنت لا داعي للقلق بشأن صوتنة تكرار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن إزالة فقاعات الهواء aliquoting PuraMatrix في أنابيب معقمة تليها الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نكون حذرين للغاية خلال التغييرات وسائل الاعلام كما يمكن أن يحدث خللا تطلع بسهولة PuraMatrix السرير. </li></ul> المواد : دينار بحريني الببتيد RAD16 PuraMatrix هيدروجيل - 1 ٪ (القط # 354250) : إن تركيز الببتيد الإجمالية للخليط مخفف هو 10 ملغ / مل. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المياه Sonicator حمام أو دوامة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 96 - جيدا ثقافة خلية طبق </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلية ثقافة وسائل الإعلام </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معقمة المصفاة H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معقمة المصفاة السكروز 20 ٪ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا (جميع الخلايا في 5000 / إضافة) : OVCAR - 5 </li></ul> يجب تنفيذ جميع الخطوات تحت ظروف معقمة. الإجراء : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصوتن للPuraMatrix 1 ٪ (RAD16) في المياه sonicator الحمام لمدة 30 دقيقة لتقليل اللزوجة قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن الآن حل PuraMatrix 1 ٪ يكون في أنابيب معقمة aliquoted لتبسيط التجارب في المستقبل. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجنب تكون فقاعات الهواء ، وإذا كانت تدور ببساطة شكل أسفل أنابيب معقمة تحتوي PuraMatrix دورة في الدقيقة 1000 (300 x ج) لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيز الببتيد الإجمالية للخليط مخفف هو 10 ملغ / مل. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسيتم مطلي مجموعتين من 4 آبار بنسبة 2.5 ملغ / مل و 1.25 ملغ / مل تركيز الببتيد المجموع ، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع PuraMatrix في كل مجموعة بشكل جيد مع 0.2 ميكرون معقمة تصفيتها السكروز 20 ٪ و 13.3 ٪ سكروز لتركيزات الببتيد مجموعه 5 مل / ملغ و 2.5 ملغ / مل على التوالي لتحقيق تركيز 2X من PuraMatrix دينار بحريني في السكروز 10 ٪. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل السكروز 20 ٪ ، 10 غراما من تمييع السكروز ، ثم وحدة التخزين إلى 50 مل من الماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إعداد 13 ٪ و 10 ٪ سكروز تمييع الحل الأسهم 20 ٪. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السكروز 13 ٪ (مقابل كل مل 10) : 6.5 مل السكروز 20 ٪ + 3.5 مل العقيمة H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 ٪ سكروز (لكل 10 مل) : 5.0 مل السكروز 20 ٪ + 5.0 مل العقيمة H 2 O. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير مزيج سيد الببتيد PuraMatrix استنادا إلى عدد من الآبار التي تنوي لوحة. (انظر المثال أدناه). ثم قسامة في أنابيب الفردية التي تحتوي على 25 مل من مزيج الرئيسي. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي إعداد هذا المزيج الرئيسي في ضعف التركيز النهائي المطلوب من مجموع الببتيد كما سيتم تخفيفه مع حجم مساو من خلايا أثناء الطلاء. <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig11.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تعليق خلية خلية خلية trypsinizing الثقافات أحادي الطبقة. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن استخدام 2 مل من 0.05 ٪ التربسين EDTA لكل قارورة T - 75. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحييد التربسين من قبل وسائل الإعلام بالإضافة إلى زراعة الخلايا التي تحتوي على 10 ٪ الحرارة المعطل الجنين المصل البقري (استخدم ما لا يقل عن 2 مل من وسائل الإعلام لكل مل من التربسين المستخدمة في الخطوة السابقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا الدقيقة في 1000 (~ 300 x ج) لمدة 5 دقائق لإنشاء خلية بيليه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا في السكروز 10 ٪ العقيمة التي تمت تصفيتها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا وتدور مرة أخرى في أسفل دورة في الدقيقة 1000 (~ 300 x ج) لمدة 5 دقائق لإزالة كميات ضئيلة من الملح وجدت في وسائل الإعلام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend الخلايا OVCAR - 5 في السكروز 10 ٪ في الدورة العاشرة لل2.0 10 5 خلية / مل بحيث الفرز النهائي في الخلية جيدا وسوف 5000 الخلايا في كل بئر. يجب أن يتم تنفيذ الخطوات التالية بسرعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ميكرولتر من 25 س 2.0 10 5 خلية / مل تعليق لأنبوب الفرد الأول الذي يحتوي 25 ميكروليتر من مزيج سيد PuraMatrix كما هو موضح في التخطيطي أعلاه. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المزيج بسرعة pipetting (~ 5 مرات صعودا وهبوطا) في أنبوب دون إدخال فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة ثم 50 ميكرولتر الخلية تعليق / PuraMatrix الخليط المناسب من البئر 96 طبق بشكل جيد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تهليم من PuraMatrix دينار بحريني من قبل pipetting بلطف ميكرولتر 150 خلية ثقافة وسائل الإعلام (+ 10 ٪ RPMI FBS) إلى جانب البئر <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig12.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات المذكورة في 8 حتى تم مطلي جميع الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة جدا إزالة برفق ~ 2 / 3 من وسائل الإعلام باستخدام ماصة 200 ميكرولتر للتوازن الرقم الهيدروجيني للهيدروجيل. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا تستخدم الشافطة الكهربائية حيث سيؤدي ذلك إلى تعطيل ماتركس </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان غيض ماصة في البئر بحيثلا تلمس السرير برفق PuraMatrix وإزالة وسائل الاعلام من البئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي الحرص على عدم تعطيل المصفوفة خلال ثقافة الخلايا في PuraMatrix. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة جدا برفق 150 ميكرولتر من خلية ثقافة جديدة وسائل الاعلام الى جانب الخلايا التي تحتوي كذلك مغلفة في PuraMatrix. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير ثقافة وسائل الإعلام في كل خلية ساعة كل 48 جيدا مع وسائل الاعلام ثقافة جديدة بتكرار الخطوات بعناية 10 و 11. </li></ol> ممثل النتائج : <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig1tmb.jpg" alt="الشكل 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. كانت مغلفة OVCAR - 5 الخلايا كما هو موضح في البروتوكول أعلاه. تم الحصول على الصور باستخدام مجهر مقلوب أوليمبوس FV1000 مجهزة تي DeepSee الأطياف ، فيزياء : الياقوت الليزر ضبطها إلى 750 نانومتر. وأجريت دورات التصوير في أيام 1 و 3 و 5 و 7 بعد الطلاء. واستخدمت مسافة طويلة في العمل ، والمياه غمس الهدف 40X (0.8 أوليمبوس LUMPLFLN NA) لصورة من خلال PuraMatrix. جمعت ثلاثي الأبعاد من خلال الحصول على كميات مداخن الصورة في الخطوات 1.47 ميكرون المحوري. جمعت اثنين من غير descanned كشف عن انبعاث تألق ذاتي باستخدام البنفسجي (440-490 نانومتر) والأخضر (510-550 نانومتر) مرشحات ممر الموجة. تمت معالجة الصور والأفلام النهائي عمق المكدس باستخدام ImageJ عن طريق الجمع بين كل من قنوات الكشف. الرجاء <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1692/1692_fig1.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1.

<ol><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designer+self-assembling+Peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Designer self-assembling Peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS One. 1, e119-e119 (2006).</li>
</ol>

puramatrix تغليف الخلايا السرطانية

PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells

أدلة متزايدة تشير إلى أن زراعة الخلايا السرطانية في ثلاثة أبعاد أكثر دقة يلخص تعقيد البيولوجيا الورم. كثير من هذه النماذج تستخدم تشكيل الغشاء القاعدي المستمدة من الحيوانات التي تحتوي على كميات متفاوتة من عوامل النمو والسيتوكينات التي يمكن أن تؤثر على نمو هذه النماذج ثقافة الخلية. هنا ، نحن تصف بالتفصيل إعداد واستخدام PuraMatrix ، وهي متوفرة تجاريا هلام الذاتي تجميع الببتيد التي تخلو من الحيوانات المستمدة من المواد والعوامل الممرضة لتغليف ونشر الخلايا السرطانية خط المبيض ، OVCAR - 5. نبدأ تصف كيفية إعداد PuraMatrix قبل الاستخدام. المقبل ، ونحن لشرح كيفية مزج صحيح PuraMatrix وتعليق خلية لتغليف الخلايا في هيدروجيل. بالإضافة إلى ذلك على وسائل الإعلام أو الثقافة حقن الخلايا في بيئة الفسيولوجية ، المكون من الببتيد PuraMatrix بسرعة النفس تجمع في هيدروجيل 3D أن يسلك الليفية مقياس النانومتر هيكل مع متوسط ​​حجم المسام من 500-200 نانومتر<sup&gt; 1</sup&gt;. بالإضافة إلى ذلك ، نحن لشرح كيفية نشر الثقافات التي تزرع في PuraMatrix مغلفة. عندما مغلفة في PuraMatrix ، OVCAR - 5 خلايا التجمع في ثلاثة هياكل الابعاد عنيبية أن أكثر شبها مورفولوجيا العقيدات micrometastatic الملاحظة في العيادة في نماذج من المونولاير المختبر. باستخدام المجهر مبائر نوضح ظهور الخلايا ممثل - 5 OVCAR PuraMatrix مغلفة في يوم 1 و 3 و 5 و 7 الطلاء آخر. وينبغي استخدام PuraMatrix على خلايا سرطانية في ثقافة تحسين فهمنا لهذا المرض وتسمح لنا لتقييم الاستجابة للعلاج في النظم نموذج أكثر التنبؤية سريريا.

هذا الفيديو يوضح كيفية تغليف الخلايا السرطانية والثقافة في PuraMatrix ، وهي متوفرة تجاريا الذاتي تجميع جل الببتيد.

PuraMatrix تغليف الخلايا السرطانية

تشير الأدلة المتزايدة إلى أن استزراع الخلايا السرطانية في أبعاد ثلاثة يحاكي تعقيد بيولوجيا الأورام بشكل أكثر دقة. والعديد من هذه...

لقد كانت نماذج زراعة الخلايا أحادية الطبقة أدوات مفيدة جدًا لدراسة مختلف الأمراض بما في ذلك السرطان. ومع ذلك، تفشل هذه النماذج في محاكاة البيئة ثلاثية الأبعاد الملحوظة في الجسم الحي. سيوضح هذا الفيديو استخدام Matrixx النقي، وهو هلام ببتيدي ذاتي التجميع متاح تجاريًا لتغليف وإكثار الخط الخلوي لسرطان المبيض CAR five.يتم خلط معلق الخلايا مع مادة Matrixx النقية ووسط استنبات الخلايا. ويُضاف الوسط لبدء عملية التفاعل في مادة Matrixx النقية؛ وعندما يتم تغليف الخلايا واستنباتها في مادة Matrixx النقية من نوع Carv، تتجمع خمس خلايا لتكوين تراكيب ASIN R ثلاثية الأبعاد تشبه في شكلها العُقيدات النقيلية الدقيقة. مرحباً، أنا عدنان عبي.أنا زميل باحث في مختبر الدكتور TBA Hassan في مركز المرأة للطب الضوئي في مستشفى ماساتشوستس العام. سنعرض لكم اليوم بروتوكولاً حول كيفية تغليف وزراعة خط خلوي لسرطان المبيض في مصفوفة اصطناعية تسمى pure matrix. نحن نستخدم هذا النموذج في مختبرنا لتقييم الاستجابة العلاجية لسرطان المبيض.لنبدأ الآن. يحتوي هيدروجيل الببتيد RAD 16 من BD 1%pure matrix على تركيز ببتيد إجمالي قدره 10 mg/mL قبل الاستخدام. قلل لزوجة الـ pur matrix عن طريق وضعه في حمام مائي ثم استخدام جهاز السونيكاتور (sonicate) لمدة 30 دقيقة، مع الحفاظ على الظروف المعقمة بعد عملية السونيكاتور.قم بتوزيع محلول المصفوفة النقي بتركيز 1% في أنابيب معقمة. ولتبسيط التجارب المستقبلية، تجنب تكوين فقاعات هوائية؛ وفي حال تكونها، قم ببساطة بطرد مركزي للأنابيب المعقمة التي تحتوي على المصفوفة النقية بسرعة 1000 RPM لمدة خمس دقائق. في هذا العرض التوضيحي، سنقوم بصب مجموعتين من أربع آبار بتركيز 2.5 mg/mL و 1.25 mg/mL من التركيز الكلي للببتيد على التوالي. قم بتحضير خليطين رئيسيين من ببتيد المصفوفة النقي بناءً على عدد الآبار التي تنوي صبها، وهي ثماني آبار في هذه الحالة.يجب تحضير كل خليط رئيسي بتركيز يعادل ضعف التركيز النهائي المطلوب للببتيد الكلي، حيث سيتم تخفيفه بحجم مساوٍ من الخلايا أثناء عملية الزرع؛ ولتحضير الخلطات الرئيسية، يتم تخفيف المصفوفة النقية باستخدام محلول سكروز معقم بتركيز 10% ومحلول سكروز بتركيز 13.3% للوصول إلى تركيزات ببتيد كلية تبلغ 5 mg/mL و 2.5 mg/mL على التوالي، وذلك لتحقيق تركيز 2x من المصفوفة النقية في محلول سكروز 10%، ثم يتم توزيع 25 µL من الخلطات الرئيسية في ثماني أنابيب منفصلة. وبذلك تصبح الخلطات الرئيسية للمصفوفة النقية جاهزة لتغليف الخلايا. سيتم تغليف وإكثار خط خلايا سرطان المبيض CAR5 في هذه التجربة، وقبل استخدام التريبسين، يتم تحضين الخلايا مع 10 mL من محلول PBS المعقم الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم لمدة تتراوح من 15 إلى 20 دقيقة.قم بشفط محلول PBS واستخدم التريبسين لهضم طبقة أحادية من الخلايا في المزرعة الخلوية، ثم قم بتحييد التريبسين عن طريق إضافة وسط زراعة الخلايا الذي يحتوي على 10% من مصل جنين البقر المعطل حرارياً. استخدم مليلترين على الأقل من الوسط لكل مليلتر من التريبسين المستخدم في الخطوة السابقة. بعد ذلك، انقل الخلايا إلى أنابيب طرد مركزي وقم بطردها مركزياً بسرعة 1000 RPM لمدة خمس دقائق لتكوين كتلة خلوية.بعد عملية الطرد المركزي، قم بتعليق كتلة الخلايا في محلول سكروز بنسبة 10% مُفلتر ومعقم. قم بعدّ الخلايا ثم قم بعملية طرد مركزي أخرى بسرعة 1000 RPM لمدة خمس دقائق. لإزالة الكميات الضئيلة من الأملاح الموجودة في وسط الزرع، قم بتعليق الخلايا في محلول سكروز بنسبة 10% بكثافة 2 × 10⁵ خلية لكل ملليلتر، بحيث يكون العدد النهائي للخلايا في كل بئر 5,000 خلية.الخلايا الآن جاهزة للتغليف في Matrixx النقي. يجب تنفيذ الخطوات التالية لتغليف الخلايا في المصفوفة النقية بسرعة، وذلك بإضافة 25 µL من معلق الخلايا الذي تم تحضيره مسبقاً إلى الأنبوب الفردي الأول الذي يحتوي على 25 µL من المزيج الرئيسي لـ Matrixx النقي. يُمزج الخليط بسرعة عن طريق السحب والطرد بالماصة حوالي خمس مرات داخل الأنبوب دون إدخال فقاعات هوائية.بعد ذلك، قم بنقل 50 µL من خليط معلق الخلايا في مصفوفة Matrixx النقية إلى البئر المناسب في طبق زراعة خلايا يحتوي على 96 بئرًا. ابدأ عملية بلمرة مصفوفة BD النقية عن طريق إضافة 150 µL من وسط زراعة الخلايا بلطف إلى جانب البئر. كرر خطوات تغليف الخلايا لبقية الآبار.تذكر أنه يجب تنفيذ هذه الخطوات بسرعة، كما يجب إكمال إجراء التغليف بالكامل لبئر واحد قبل الانتقال إلى البئر التالي. بعد توزيع الخلايا في جميع الآبار الثمانية، اترك الخلايا لمدة 30 دقيقة. وبعد مرور 30 دقيقة، وباستخدام ماصة سعة 200 microliter، ضع طرف الماصة في البئر بحيث لا يلامس طبقة المصفوفة النقية، وقم بإزالة الوسط من البئر برفق شديد. يجب إزالة نحو ثلثي الوسط لمعادلة pH للهيدروجيل.لا تستخدم جهاز شفط الفراغ لأن ذلك سيؤدي إلى خلخلة المصفوفة. بعد ذلك، أضف بحذر شديد 150 µL من وسط زراعة الخلايا الطازج إلى جانب البئر التي تحتوي على خلايا مغلفة في Matrixx النقي. وبنفس الطريقة الموضحة سابقاً، قم بإزالة ثلثي الوسط وأضف وسطاً طازجاً إلى الآبار المتبقية.استبدل وسط زراعة الخلايا في كل بئر كل 48 ساعة بوسط زراعة جديد. تم تغليف خلايا Ocar five كما هو موضح في البروتوكول السابق. تظهر الصور نماذج ثلاثية الأبعاد تمثيلية لخلايا OR five مغلفة ومستنبتة في مصفوفة نقية في الأيام 1 و3 و5 و7.لقد عرضنا لكم للتو كيفية تغليف الخط الخلوي لسرطان المبيض OCar-5 داخل المزرعة باستخدام مصفوفة اصطناعية تسمى PureMatrix. وعند استخدام PureMatrix، من المهم إدراك أن هذا البروتوكول قد تم تحسينه ليتناسب مع الخط الخلوي OCar-5؛ لذا سيتعين على كل باحث تحسين البروتوكول وضبطه بدقة ليتوافق مع الخط الخلوي الخاص بدراسته.وتذكر عند إجراء تغييرات الوسط الغذائي، أنه من المهم جداً عدم تعكير طبقة المصفوفة لأنها هشة للغاية، فلا تقم مطلقاً بسحب السوائل بالشفط واستخدم دائماً الماصة. هذا كل شيء. شكراً جزيلاً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

الفحص تخليص الظهارية وصفها هنا يستفيد من خلايا fluorescently المسمى والوقت الفاصل بين الفحص المجهري لتصور فيديو وكميا قياس التفاعلات بين الأجسام الشبه الكروية سرطان المبيض المتعددة الخلايا الظهارية وmonolayers الخلية. طرازا هذا الفحص الخطوات في وقت مبكر من ورم خبيث سرطان المبيض.

في الفحص المختبري التخليص الظهارية النماذج أن الخطوات في وقت مبكر من الإنبثاث سرطان المبيض

وقد تم توثيق النشاط السامة للخلايا من phenanthridine PJ-34 في خلايا السرطان الذين يخضعون الانقسام في الوقت الحقيقي من خلال التصوير متحد البؤر الحية. PJ-34 استئصال سرطان الثدي البشرية MDA-MB-231 الخلايا إيواء خارج centrosomes في الانقسام. على عكس الانقسام ثنائي الوصل العادي، لم تكن متفاوتة المسافات خارج centrosomes في قطبي المغزل في حضور PJ-34.

موت الخلايا المرتبطة الانقسام الشاذ التي لاحظها التصوير متحد البؤر في الخلايا السرطانية لايف

الأنسجة المهندسة والمستمدة من الخلايا الليفية مصفوفة الأصلي هو أداة لتوليد الناشئة ركيزة اللحمية التي تدعم انتشار الخلايا الظهارية والتمايز. هنا يتم تقديم بروتوكول تطبيق هذه المنهجية لتقييم تأثير مختلف أنواع الخلايا اللحمية في بيولوجيا الخلايا السرطانية.

هندسة الأنسجة اللحمية من الورم المكروية مع التطبيق على غزو الخلية السرطانية

توفر هذه المقالة منهجيات تفصيلية لاستخدام ثلاثية الأبعاد (3D) فحوصات لتحديد سرطان الثدي غزو الخلية. على وجه التحديد، ونحن مناقشة الإجراءات المطلوبة لانشاء مثل هذه المقايسات، الكمي، وتحليل البيانات، فضلا عن أساليب لدراسة فقدان النزاهة الغشاء الذي يحدث عندما تغزو الخلايا.

الكمي لسرطان الثدي الغزو خلية باستخدام ثلاثي الأبعاد (3D) نموذج

هنا ، نقدم بروتوكولا لتغليف الخلايا التقويضية ، التي تستهلك الدهون لإنتاج الحرارة في الأنسجة الدهنية داخل البطن وتزيد من تبديد الطاقة في الفئران البدينة.

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

تقوم هذه الطريقة بتقييم غزو الخلايا السرطانية من الكرات إلى مصفوفة ثلاثية الأبعاد محيطة.  يتم إنشاء الكرات الكروية عبر طريقة زراعة القطرات المعلقة ثم يتم تضمينها في مصفوفة تتكون من مواد الغشاء القاعدي والكولاجين من النوع الأول.  يتم مراقبة الغزو من الكرويات لاحقا.

خلية السرطان كروي الفحص لتقييم الغزو في إعداد 3D

هنا ، نصف طريقة للفحص المجهري طويل المدى لتتبع الخلايا المفردة طوليا استجابة للعلاجات المضادة للسرطان.

من خلال المرآة: المجهري الوقت الفاصل بين وتتبع طولية من الخلايا واحدة لدراسة العلاج المضادة للسرطان

&lt; p class = 'jove_content'&gt; قمنا بتكييف غشاء صغير يسهل اختراقه لتقليد البيئة المكروية للورم (TME). يتكون النموذج من ثقافة خلايا مختلطة ، ويسمح بتوليد مبسط لمجموعات الخلايا الفردية عالية الإثراء دون استخدام علامات الفلورسنت أو فرز الخلايا ، ويسمح بدراسة الاتصال بين الخلايا داخل TME في ظل الظروف العادية أو الإجهاد.

وتقليد من المكروية ورم: طريقة بسيطة لتوليد بالسكان خلية المخصب والتحقيق بين الخلايا الاتصالات

هنا، يمكننا وصف أسلوب ثقافة ثلاثي الأبعاد لتحليل مورفولوجية الابتدائي خلايا سرطان الثدي، كذلك فيما يتعلق بدراسة تفاعلها المباشر/غير المباشر مع وحيدات ونتائج مثل تدهور الكولاجين وتجنيد الخلايا المناعية والخلايا الغزو، والترويج للالتهابات المتصلة بالسرطان.

تحليل الاتصالات بين وحيدات وخلايا سرطان الثدي الأولية في مصفوفة خارج الخلية استخراج (أكمي)-على أساس نظام ثلاثي الأبعاد

باراكريني وجوكستاكريني من التفاعلات الخلوية دوراً هاما في العديد من العمليات البيولوجية، بما في ذلك تطور الورم والاستجابات المناعية، والأوعية، والتنمية. هنا، يستخدم أسلوب ثقافة الدانية لدراسة الإشارات paracrine حيث يتم الاحتفاظ تركيزات مترجمة من العوامل التي يفرزها مع منع الاتصال الخلوية مباشرة.

أسلوب ثقافة الدانية لدراسة Paracrine الإشارات بين الخلايا

اكتشف طريقة تغليف خلايا سرطان المبيض CAR5 في هيدروجيل PuraMatrix لإنشاء نماذج ثلاثية الأبعاد. يُحسّن هذا البروتوكول دراسة استجابة الأورام للعلاجات المختلفة.

PuraMatrix تغليف الخلايا السرطانية

استكشف المزيد من الفيديوهات