Name: إعداد يسحق ذبابة الفاكهة كروموسوم كثور الخيوط الصبغية للجسم وصفها (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-09T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: تعلم تقنية السحق لإعداد كروموسومات Drosophila متعددة الخيوط من الغدد اللعابية لليرقات. تُستخدم هذه الطريقة في دراسة التعديلات الايبيجينية وبنية الكروماتين.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر السيدة ف Lephart لصيانة المخزونات يطير وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الصحية للحصول على منحة (GM62916) والمؤسسة الوطنية للعلوم منح (MCB0817107).

ويتم تكييف بروتوكول التالية للإعداد للاسكواش كثور الخيوط الصبغية كروموسوم من الإجراء وصفها في يوهانسن وآخرون. (2009). 1. ثقافة يرقات ذبابة الفاكهة الثالث طور مرحلي من أجل الحصول على الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية الأمثل للاسكواش الاستعدادات العالية الجودة وشروط زراعة غير مزدحمة ضرورية (أي حوالي 20 مكان وضع البيض الذباب الإناث في مستوى 4 زجاجة الطيران "وتغيير قنينة جديدة كل يوم). حدد الأفراد بدانة من أول محصول من التسلق 3 طور مرحلي اليرقات في حين أنها لا تزال تتخبط ولكن فقط قبل pupation نحن الثقافة بشكل روتيني في 21 درجة مئوية ولكن 18 درجة مئوية وسوف تسفر بدانة الكروموزومات التي قد تكون أكثر ملاءمة لبعض الأغراض مثل على سبيل المثال عندما الفرقة / إنتربيرد مناطق تحتاج إلى تصور بدقة عالية. 2. مواد الاسكواش كثور الخيوط الصبغية <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط تشريح دروموند (2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أطباق بتري (60 × 15 ملم) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شرائح مجهرية بلوري (رقم فيشر 12-544-3) (بولي يسين المغلفة) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 22 × 22 مم تغطية زلات رقم 15 (فيشر رقم 12 - 520B) (مغلفة Sigmacote ؛ سيغما # SL2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رقم 22 × 40 ملم زلات تغطية 15 (فيشر رقم 12 - 530B) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كيم مناديل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المرحلة المجهر يتناقض مع الهدف 20X </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ديوار الصغيرة (على سبيل المثال ، وقارورة فراغ أو زجاجة الترمس) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط طويل </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شفرات حلاقة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coplin جرة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خادمة المطاط أو علبة تثبرور (أو علبة اغلاقها باحكام ما يعادلها) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Parafilm (مقطعة إلى مربعات 22 ملم) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أوزان 175 غرام </li></ul> 3. مثبتات والحلول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5X الأسهم الفورمالديهايد. يعد حلا جديدة من 0.74 غرام. بارافورمالدهيد في مل من 4.0 درهم و 2 O مع 28 ميكرولتر من KOH 1N. الحارة إلى 65 درجة مئوية إلى حل بارافورمالدهيد وتخزينها ثم على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيتي 1. يعد حلا جديدة من برنامج تلفزيوني 0.5 مل 10X ، 50μl تريتون X - 100 ، 3.45 مل درهم 2 O و 1.0 مل من الأسهم الفورمالديهايد 5X. الحارة لتفريق تريتون X - 100 واستخدامها في حدود 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيتي 2. يعد حلا جديدة من 1.5 مل O 2 درهم ، 2.5 مل حمض الخليك الجليدية ، و 1.0 مل من المخزون واستخدام الفورمالدهايد 5X في حدود 1 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Lactoacetic حامض الحل. إعداد محلول حامض اللبنيك 1 مل ، 2 مل 2 O درهم ، و 3 مل حامض الخليك. </li></ol> 4. كثور الخيوط الصبغية إعداد كروموسوم الاسكواش : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف اليرقات بالماء ونقل لبرنامج تلفزيوني في نسيج الثقافة طبق لتشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم غيض من الفم السنانير مع زوج واحد من الملقط ، عقد الجسم حوالي 2 / 3 من الطريق نزولا مع الزوج الآخر ، وسحب السنانير على الفم بحيث تتعرض الغدد اللعابية. فصل الغدد اللعابية من الدماغ والعين antennal أقراص ، وبعيدا عن تشريح الجسم من الدهون والأنسجة الأخرى المرتبطة بها أي من الغدد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 microliters من 1 إلى تثبيتي أول بئر للشريحة two الاكتئاب جيدا و200-300 microliters من 2 مثبت لاثنين ايضا. نقل زوج واحد من الغدد اللعابية في وقت لتثبيتي 1 في بئر واحدة لاحتضان مقدار الوقت اللازم لحاتمة الهدف ، وعادة حوالي 1-2 دقائق. (ملاحظة : بعض الحواتم ، مثل معظم تعديلات بسيطة ، قد تحتاج إلى 5 دقائق أو أطول التثبيت). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط به نقل الغدد اللعابية إلى 2 في 2 مثبت جيدا واحتضان لمدة دقيقتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل إلى الغدد 10-30 ميكرولتر من محلول حمض Lactoacetic على ساترة a Sigmacoted نظيفة. انخفاض بلطف شريحة مجهر متعدد الليزين المغلفة على وساترة ، وبدون الضغط العمودي ، التقط ساترة حتى الغدد ما بين الشريحة وساترة ل. تيسير فورا تحلل الخلايا والكروموسومات التي تنتشر استيعاب بعناية ساترة مع ملقط على حافة واحدة وتتحرك بلطف مرة أخرى بشكل طفيف وإيابا ، في محاولة للحد من أي ضغط عمودي على الأنسجة. بدلا من استخدام الجانب ممحاة قلم رصاص أو حتى الإصبع لتحريك بلطف ساترة ذهابا وإيابا. علما بأن أي تأخير في نقل ساترة ذهابا وإيابا من المرجح أن يتضاءل انتشار الأسلحة الكروموسومات لأنها سوف تميل الى ان تصبح أكثر جمودا عند التعرض لمحلول حمض Lactoacetic. تغيم الحل هو غالبا ما يكون مؤشرا جيدا لفصل الخلايا. التنصت بلطف ساترة بشكل غير مباشر (لتجنب الضغط العمودي) مع الجانب ممحاة قلم رصاص في أوقات قليلة قد تساعد أيضا في نشر الكروموسومات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص الأنسجة على الفور تحت المجهر مرحلة يتناقض مع هدف 40X 20 أو لتحديد ما إذا كانت الصبغيات بشكل جيد الانتشار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما نشر الكروموسومات يكون كافيا وتعيين الشريحة مع الجانب ساترة الخناق على كومة من مناديل وكيم نظيفة. المركز الثاني على رأس كيم يمسح وتتسطح الكروموسومات عن طريق وضع الإبهام على حيث يتم وضع ساترة وضغط بشدة ، وتجنب أي تحرك الأفقي للساترة أن القصالكروموسومات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فحص الشريحة مرة أخرى تحت المجهر لتحديد ما إذا كان إعداد مناسبة لهذا الغرض المقصود. إذا تحركت بشكل ملحوظ الكروموسومات على سحق ، واستخدام أقل حجم من محلول حمض Lactoacetic الخاص في الأعمال التحضيرية اللاحقة. كرر الخطوات من 4،1-4،8 حتى تم الحصول على عدد كاف من الشرائح مناسبة. مكان أوزان 175 غرام على ساترة من الشرائح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء ديوار صغيرة (مثل زجاجة الترمس) مع النيتروجين السائل. باستخدام الملقط طويلة ، وتراجع الانزلاق الى السائل N 2 حتى توقف عن الغليان ، وإزالة الشريحة ، واستخدامها مباشرة على حافة شفرة حلاقة نظيفة في زاوية واحدة على الوجه قبالة ساترة. إذا كان سيتم استخدام الشريحة على الفور ، ومكان في جرة Coplin مع برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية. بخلاف ذلك جمع الشريحة في جرة مليئة Coplin الايثانول 95 ٪. دراسة ساترة مرة واحدة في الصقيع ومصعد بعيدا للتأكيد على أن الأنسجة انضمت إلى الشريحة ، ولم يبقى مع ساترة. أكرر مع بقية الشرائح حتى يتم تخزين كافة الشرائح في أي برنامج تلفزيوني (للاستخدام في غضون عدة ساعات) أو الإيثانول (للتخزين على المدى الطويل). </li></ol> ممثل النتائج الخطوة الأولى الحاسمة للحصول على ارتفاع الاسكواش كثور الخيوط الصبغية إعداد الجودة هي أن تنمو اليرقات الدهون مع كبير نوى الغدة اللعابية. والثاني هو أسلوب جيد للإجراءات نشر ، والذي قد يستغرق بعض الممارسات. طرف واحد لتحسين نجاح نشر هو العثور على كمية ضئيلة من محلول حمض lactoacetic خلال سحق الخطوة. وهذا يكفي تعزيز انتشار الصبغيات دون توليد القوى المفرطة التي يمكن أن تدفق الأسلحة غسل كروموسوم بعيدا. ومن الجدير بالذكر أيضا أن أي تأخير في نقل ساترة ذهابا وإيابا سوف يقلل انتشار الأسلحة الكروموسومات لأنها تصبح أكثر جمودا عند تعرضها للحمض Lactoacetic الحل. إذا كان كل شيء على ما يرام ، يجب أن يكون هناك العديد من الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية انتشار جيدا. ويظهر الشكل 1 مثالا على إعداد مثل هذا المسمى مع علامة ضعف للمناطق الخضراء في إنتربيرد مع وجود بقع الصبغة التي تجمعت في المناطق الزرقاء. إذا تم الحصول على نشر غير كافية ، فإن الصبغيات تبدو وكأنها كرات صغيرة ، كما هو مبين في الشكل 2. من ناحية أخرى ، إذا كان الكثير من الانتشار قد حدث ، فإن chomosomes تكون رقيقة جدا وطويلة أو في بعض الحالات مجزأة الى قطع صغيرة كما هو مبين في الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig1.jpg" alt="الشكل 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الرقم الاسكواش كثور الخيوط الصبغية 1. إعداد المسمى مزدوجة مع الأجسام المضادة للكيناز H3S10 الشبكة الاسلامية الليبرالية هيستون - 1 (باللون الأحمر) وهويشت (الأزرق). <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig2.jpg" alt="الشكل 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> كثور الخيوط الصبغية الاسكواش الرقم 2. مع انتشار غير كافية. <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig3.jpg" alt="الشكل 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 3"> الشكل 3. الاسكواش كثور الخيوط الصبغية مع الكثير من الانتشار.

<ol><li>Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+polymerase+II-mediated+transcription+at+active+loci+does+not+require+histone+H3S10+phosphorylation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila.</a> Development. 135, 2917-2925 (2008).</li>
<li>DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+GFP-fusion+proteins+on+polytene+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Dros.+Inf.+Serv%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes.</a> Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).</li>
<li>Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+transcription+and+epigenetic+chromatin+modification+in+Drosophila+polytene+chromosome+squash+preparations+using+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies.</a> Methods. 48, 387-397 (2009).</li>
</ol>

إدراج الأحماض الخل واللبن في البروتوكولات التقليدية التثبيت الاسكواش يسهل على حد سواء ، والقرار إنتربيرد الذراع الكروموسومات نشر ولكن للأسف بعض الحواتم لا ينجو من هذا العلاج. مثال على مثل هذا هو حاتمة H3S10ph (تساى وآخرون ، 2008). منذ حامض العلاج أيضا لديه عيب أن يروي مضان المتأصلة في GFP الموسومة البروتينات ، DiMario وآخرون. (2006) وضعت مؤخرا الفورمالديهايد المستندة إلى تقنية &quot;الاسكواش الخالية من المواد الحمضية&quot; التي تسمح لرؤية مباشرة من البروتين GFP ا...

إعداد يسحق ذبابة الفاكهة كروموسوم كثور الخيوط الصبغية للجسم وصفها

Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

وقد تم منذ فترة طويلة ذبابة الفاكهة المفضلة لنظام نموذجي لدراسة العلاقة بين لونين وتنظيم بنية الجينات بسبب المزايا التي يقدمها الخلوي العملاقة اللعابية الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية الغدة اليرقات طور مرحلي الثالثة. في هذا النسيج الكروموسومات الخضوع عدة جولات من تكرارها في حال عدم وجود انقسام الخلايا مما يؤدي إلى حوالي 1000 نسخة. الحمض النووي لا يزال الانحياز بعد كل دورة تنسخي مما أدى إلى تضخم كبير الكروموسومات التي توفر فرصة فريدة لربط مورفولوجيا لونين مع توطين للبروتينات محددة. وبالتالي ، كان هناك مستوى عال من الاهتمام في تحديد تعديلات جينية موجودة في جينات مختلفة وفي مراحل مختلفة من عملية النسخ. أداة مهمة لمثل هذه الدراسات هو وضع العلامات من الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية مع الأجسام المضادة للانزيم ، وعامل النسخ ، أو تعديل هيستون في المصالح. هذا البروتوكول فيديو يوضح تقنية الاسكواش المستخدمة في المختبر يوهانسن لإعداد ذبابة الفاكهة الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية لوصفها الأضداد.

هذا البروتوكول فيديو يوضح تقنية الاسكواش المستخدمة في المختبر لإعداد يوهانسن<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية لوصفها الأضداد.

لطالما كانت ذبابة الفاكهة (Drosophila) نظاماً نموذجياً مفضلاً لدراسة العلاقة بين بنية الكروماتين وتنظيم الجينات نظراً إلى الخصائص السيتولوجية...

تبدأ هذه الإجراءات باستزراع يرقات الدروسوفيلا من الطور الثالث ذات المظهر الدهني الزاحف في زجاجة ذباب. وبإستخدام زوجين من الملاقط، يتم تشريح الغدد اللعابية وفصلها عن اليرقات. ثم يتم تثبيت الغدد اللعابية بنجاح في مادتين مختلفتين للتثبيت في شريحة تجويفية ذات بئرين.أخيرًا، يتم سحق الغدد في محلول حمض اللاكتيك والأسيتيك بين شريحة غطاء وشريحة مجهرية. مرحبًا، أنا الدكتورة كريستين جوهانسن من قسم الكيمياء الحيوية والفيزياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية في جامعة ولاية أيوا. مرحبًا، أنا طالب دراسات عليا ومساعد تدريس في مختبر جوهانسن.سوف نعرض لكم اليوم إجراءً لتحضير مسحات صبغية متعددة الألوان لذبابة الدروزو-فيلا (drosophila) بحيث تكون مناسبة لوسم الأجسام المضادة. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة التعديلات الهيستونية فوق الجينية وعلاقتها ببنية الكروماتين والتعبير الجيني. لذا، فلنبدأ.من أجل الحصول على كروموسومات متعددة التكافؤ (polytan) مثالية لتحضيرات قرع عالية الجودة، تعد ظروف الاستزراع غير المزدحمة ضرورية. ضع حوالي 20 ذبابة أنثى واضعة للبيض في زجاجة ذباب قياسية مقاس أربع بوصات، وقم بالنقل إلى زجاجة جديدة كل يوم. يُعد الاستزراع عند 21 درجة Celsius مناسباً لمعظم الأغراض، ولكن الحضن عند 18 درجة Celsius سينتج كروموسومات أكثر سمكاً قد تكون أكثر ملاءمة لبعض التجارب، كما هو الحال عند الحاجة إلى تصور مناطق ما بين النطاقات (interband) المحظورة بدقة عالية.اختر الأفراد الأكثر سمنة من الدفعة الأولى من يرقات المرحلة الثالثة المتسلقة في مرحلة النجم. وبينما لا تزال اليرقات في مرحلة التجوال، ولكن مباشرة قبل التشرنق، تكون اليرقات مرئية بسهولة على جانب الزجاجة فوق الغذاء. استخدم الملقط لنقل اليرقات إلى طبق زراعة أنسجة.لكل جولة من عمليات السحق، اشطف اثنتين إلى ثلاث من اليرقات معاً بالماء قبل نقلها إلى طبق نظيف يحتوي على PBS لإجراء التشريح. يجب أن يغطي PBS اليرقات، ولكن عامل الوقت ليس حرجاً. ونظراً لأن اليرقات يمكنها البقاء على قيد الحياة في هذه الظروف لساعات، ضع طبق اليرقات الموجود في PBS على منصة مجهر تشريحي باستخدام زوج واحد من الملاقط.أمسك بطرف خطافات الفم مع تثبيت الجسم. وباستخدام زوج ثانٍ من الملاقط، اسحب خطافات الفم من مسافة تعادل ثلثي الطريق تقريبًا للأسفل للكشف عن الغدد اللعابية. افصل الغدد اللعابية عن الدماغ والعين والأقراص التناسلية، ثم استأصل الجسم الدهني وأي أنسجة أخرى مرتبطة بها.أضف 200 µL من المثبت الأول إلى البئر الأول من شريحة ذات بئرين غائرين، ومن 200 إلى 300 µL من المثبت الثاني إلى البئر الثاني. انقل زوجاً واحداً من الغدد اللعابية في كل مرة إلى المثبت الأول في البئر الأول باستخدام الملقط، واتركها لتحضن للمدة الزمنية المطلوبة للحاتمة المستهدفة، والتي تتراوح عادةً بين دقيقة إلى دقيقتين.انقل الغدد اللعابية لتثبيتها في البئر رقم 2 واتركها لتحضن لمدة دقيقتين. باستخدام الملقط، انقل الغدد إلى غطاء شريحة مطلي بـ sigma نظيف يحتوي على 10 إلى 30 µL من محلول حمض اللاكتيك والأسيتيك المحضر حديثاً. أنزل ببطء شريحة مجهر مطلية بـ polylysine فوق غطاء الشريحة.ارفع الشريحة بحذر باستخدام قوة تلاصق السائل بالزجاج لالتقاط غطاء الشريحة دون تسليط ضغط عمودي. ومن أجل نشر الكروموسومات على التحضير على الفور، أمسك حافة غطاء الشريحة بعناية باستخدام الملقط وحركه بلطف ذهاباً وإياباً. ومع الاستمرار في تقليل الضغط العمودي على النسيج، فإن تحريك غطاء الشريحة بهذه الطريقة ضروري لفصل الخلايا الفردية للغدة اللعابية بشكل كافٍ.قد يساعد النقر بلطف وبشكل مائل على غطاء الشريحة باستخدام جانب الممحاة من قلم الرصاص في توزيع الكروموسومات، وغالباً ما يكون تعكر المحلول مؤشراً جيداً على انفصال الخلايا. افحص النسيج فوراً تحت مجهر تباين الأطوار (phase contrast microscope) للتأكد من توزيع الكروموسومات بشكل جيد، وهو ما يتضح من خلال أذرع كروموسومية ممتدة ومنفصلة بوضوح. إذا لم تظهر الكروموسومات موزعة جيداً في المرة الأولى.من الممكن تكرار النقر الخفيف على غطاء الشريحة حتى يتم الحصول على انتشار كافٍ. ضع الشريحة بحيث يكون جانب غطاء الشريحة لأسفل على مجموعة من مناديل Kim النظيفة. ضع منديلاً نظيفاً فوق التحضير.ضع الإبهام فوق موضع غطاء الشريحة واضغط بقوة إلى الأسفل مباشرةً. تجنب الحركة الأفقية التي قد تؤدي إلى قص الكروموسومات. أعد فحص الشريحة تحت المجهر لتحديد مدى ملاءمتها للتجربة الحالية.كرر عملية التشريح وتحضير سحق الكروموسومات للحصول على عدد كافٍ من الشرائح. ضع ثقلاً يزن 175 gram على غطاء الشريحة باستخدام ملقط طويل. اغمس الشريحة المحضرة في وعاء صغير من النيتروجين السائل وثبتها هناك حتى يتوقف الغليان.أخرج الشريحة واستخدم على الفور حافة شفرة حلاقة نظيفة تحت زاوية غطاء الشريحة لقلبه وإزالته. ضع الشريحة في وعاء كوبلان مملوء بـ PBS بارد للاستخدام الفوري، أو مملوء بـ 95% ethanol للتخزين لفترة أطول. بمجرد تسامي الصقيع، افحص غطاء الشريحة للتأكد من بقاء النسيج ملتصقاً بالشريحة.تتمثل الخطوة الأولى والأساسية للحصول على تحضير عالي الجودة لهرس INE في تربية يرقات سمينة ذات نوى كبيرة في الغدد اللعابية. أما الخطوة الثانية فهي إتقان تقنية إجراء الفرد، والتي قد تتطلب بعض التدريب. ومن النصائح لتحسين نجاح عملية الفرد هي تحديد الحد الأدنى من حجم محلول حمض اللاكتيك والأسيتيك أثناء خطوة الهرس.سيؤدي ذلك إلى تعزيز الانتشار الكافي للكروموسومات دون توليد قوى تدفق مفرطة قد تؤدي إلى جرف أذرع الكروموسومات بعيداً. ومن الجدير بالذكر أيضاً أن أي تأخير في تحريك الشريحة الغطائية ذهاباً وإياباً سيقلل من انتشار أذرع الكروموسومات، حيث تصبح أكثر صلابة عند تعرضها لمحلول حمض اللاكتو أسيتيك. وفي حال سارت العملية بشكل صحيح في كل شريحة، يجب أن تظهر العديد من كروموسومات الـ polytan المنتشرة جيداً.نوضح هنا مثالاً لمثل هذا التحضير المصبوغ مزدوجاً بعلامة للمناطق البينية باللون الأحمر وبصبغة تصبغ المناطق ذات الحزم باللون الأزرق. في حال عدم تحقيق انتشار كافٍ، ستظهر الكروموسومات ككرات صغيرة كما هو موضح هنا. ومن ناحية أخرى، إذا حدث انتشار مفرط، ستكون الكروموسومات رقيقة جداً وممتدة أو في بعض الحالات متجزئة إلى قطع صغيرة كما هو موضح هنا.لقد عرضنا لكم للتو كيفية إعداد تحضيرات سحق الكروموسومات متعددة الأطقم (polytene chromosomes) في ذبابة Drosophila. عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر البدء بـ fat larvae. هذا كل شيء.شكراً للمشاهدة، وبالتوفيق في تجاربكم.

preparation-drosophila-polytene-chromosome-squashes-for-antibody

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

وصفت وسائل لعزل وإعداد ذبابة الفاكهة الخصيتين عينات (العيش وثابتة) للتصوير من قبل على النقيض من المرحلة ومضان المجهري في هذه الوثيقة.

تحليل الخلوي الحيوانات المنوية: الأعمال التحضيرية لايف والثابتة من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخصية

الكروموسوم اللوحة هي طريقة مفيدة لدراسة تنظيم نواة الخلية وتطور karyotype. هنا، نظهر نهجا لعزل وتضخيم مناطق محددة ذات أهمية من كروموسومات البوليتين المفردة التي تستخدم لاحقا للفلورسنت ثنائي وثلاثي الأبعاد في التهجين الموقعي (FISH).

2D و 3D كروموسوم اللوحة في البعوض الملاريا

هنا ، نقدم طريقة بسيطة لإجراء التهجين الموضعي للحمض النووي الفلوري (DNA ISH) لتصور التسلسلات غير المتجانسة المتكررة على الكروموسومات المثبتة على الشريحة. تتطلب الطريقة الحد الأدنى من الكواشف وهي متعددة الاستخدامات للاستخدام مع المجسات القصيرة أو الطويلة ، والأنسجة المختلفة ، والكشف عن الإشارات الفلورية أو غير الفلورية.

طريقة بسيطة لDNA الإسفار<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين لسحق الكروموسومات

يصف هذا البروتوكول كيفية إنشاء خط خلية ذبابة الفاكهة S2 حساس لمثبطات الجزيئات الصغيرة ل kinesin-5. كما تم توضيح استخدام هذه الخلايا في مقايسة تصحيح الأخطاء المستندة إلى الخلية.

توليد &quot;أنسنة&quot;<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; S2 خط خلية حساسة للالدوائية تثبيط كينيسين-5

نقدم بروتوكولات لجمع وإعداد وتصوير بويضات ذبابة الفاكهة الناضجة. تسمح هذه الطرق بتصور سلوك الكروموسوم وتجميع المغزل ووظيفته أثناء الانقسام الاختزالي.

تقنيات التصوير طليعة الطور والطورية من الانقسام الاختزالي الأول في مجال الاتصالات الأرضية<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; البويضات

ينتشر السطح النووي هي أداة لا غنى عنها لدراسة الأحداث الكروموسومية أثناء الداء الميوي. هنا نُظهر طريقة لإعداد وتصور الكروموسومات الميوتيكية خلال المرحلة الأولى من الحيوانات المنوية من سمك حمار وحشي.

إعداد ينتشر كروموسوم Meiotic من الحيوانات المنوية زيبرافيش

يهدف هذا البروتوكول إلى تصور مجاميع الهتيروماتين في خلايا البوليتين Drosophila.

تلطيخ immunofluorescent لتصور البروتينات المرتبطة Heterochromatin في الغدد اللعابية Drosophila

يصف هذا البروتوكول وضع العلامات الفلورية المخصصة القائمة على الأجسام المضادة وحقنها في أجنة ذبابة الفاكهة المبكرة لتمكين التصوير المباشر للبروتينات منخفضة الوفرة أو التعديلات اللاحقة للترجمة التي يصعب اكتشافها باستخدام أساليب GFP / mCherry-tag التقليدية.

تصور البروتينات منخفضة الوفرة والتعديلات اللاحقة للترجمة في أجنة ذبابة الفاكهة الحية عن طريق حقن الأجسام المضادة الفلورية

تقدم هذه الدراسة بروتوكولا مبسطا لمعالجة الأنسجة يتضمن قطع الرأس ، والتثبيت ، والقطع بالتبريد ، وتلوين التألق ، والتلوين المناعي ، والتصوير ، والذي يمكن تمديده إلى التصوير متحد البؤر والتصوير متعدد الفوتونات. تحافظ الطريقة على فعالية مماثلة للتشريح المعقد ، متجاوزة الحاجة إلى المهارات الحركية المتقدمة. يوفر التحليل الكمي للصور إمكانات استقصائية واسعة النطاق.

التقطيع بالتبريد المباشر لرؤوس ذبابة الفاكهة لتعزيز تلطيخ مضان الدماغ والتلوين المناعي

في هذه الدراسة ، أنشأنا بروتوكولا مفصلا لوضع العلامات القريبة المستندة إلى TurboID (PL) في D. melanogaster المبيض ، يغطي الخطوات من مكملات البيوتين وتشريح المبيض إلى التحقق من صحة التعبير الجيني وإثراء الببتيدات الحيوية لقياس الطيف الكتلي.

في الجسم الحي تطبيق وضع العلامات على القرب المستندة إلى TurboID في ذبابة الفاكهة السوداء

تصف هذه المقالة بروتوكول تقطيع القرص التخيلي الفعال وتلوين الأجسام المضادة الاقتصادي، وهو اقتصادي مع المواد التفاعلية ويسهل التعامل مع الأقراص التخيلية بأعداد قليلة.

تشريح صغير النطاق وتلوين الأجسام المضادة للأقراص التخيلية للعين والجناح من ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر

تعلم تقنية السحق لإعداد كروموسومات Drosophila متعددة الخيوط من الغدد اللعابية لليرقات. تُستخدم هذه الطريقة في دراسة التعديلات الايبيجينية وبنية الكروماتين.

إعداد يسحق ذبابة الفاكهة كروموسوم كثور الخيوط الصبغية للجسم وصفها

استكشف المزيد من الفيديوهات