تحديد التفاعل وعيار من المصل باستخدام الفحص Haemagglutination

تحديد التفاعل والعيار للمصل باستخدام مقايسة الهيماجلوتينين. أمة الغلوتين هي تفاعل يحدث بين الأجسام المضادة القابلة للذوبان والمستضدات الجسيمية. يمكن أن تشمل هذه الخلايا أو تحمل الجزيئات.

تسمح الحلقات الموجودة على سطح الناقل للجسم المضاد بربط الناقل وربطه معا مما يؤدي إلى تكوين شبكة معقدة تسمى مركب الأجسام المضادة للمستضد. تراص الحاشية هو شكل محدد من أشكال التراص حيث ترتبط الأجسام المضادة بخلايا الدم الحمراء ، والتي تعمل كمستضد للجسيمات. تعتبر خلايا الدم الحمراء أهدافا مفيدة لأنها متاحة بسهولة ويمكن رؤية النتائج بسهولة بالعين المجردة.

يتم تخفيف عينات المصل بشكل متسلسل ثم وضعها في طبق 96 بئر UBO. ثم يضاف تعليق خلايا الدم الحمراء ريفا. عندما توجد الأجسام المضادة بتركيز عال ، يحدث الارتباط بخلايا الدم الحمراء ، وتشكل شبكة كبيرة.

نظرا لأن هذه الشبكة تستقر بالجاذبية ، فإنها تتوافق مع شكل صفيحة UBO. عند النظر إليها من الأعلى ، ترى ورقة عريضة من خلايا الدم الحمراء. هذا تفاعل هيماجلوتينين إيجابي.

عندما تكون مستويات الأجسام المضادة منخفضة ، لا يمكن أن تتشكل أي شبكة وتتوافق خلايا الدم الحمراء مع شكل صفيحة UBO وتتركز في القاعدة لتشكيل حبيبات صغيرة. هذا هو رد فعل تراص الحاشية السلبي. يوضح هذا الشكل تفاعلا موجبا.

تشكل الخلايا شبكة عندما تستقر ، وتتوافق مع شكل الصفيحة السفلية U. على اليسار واليمين ، نرى المنظر العلوي حيث تظهر ورقة عريضة من خلايا الدم الحمراء. في حالة وجود كمية متوسطة من الأجسام المضادة ، سيتم ملاحظة تكوين بعض الحروف.

يسمح تراص الحاشية أيضا باختبار تفاعل عينات المصل المختلفة ضد المستضد المعروف. يمكن أيضا تحديد عيار عينة المصل. العيار هو التخفيف الأخير حيث لوحظ رد فعل إيجابي.

عادة ، كلما زاد تركيز الجسم المضاد في عينة المصل ، ارتفع العيار. يوضح هذا الرسم البياني تفاعل تراص الحاشية السلبي. عدم وجود جسم مضاد كاف لربط خلايا الدم الحمراء.

عندما تستقر الخلايا عن طريق الجاذبية ، فإنها تنزلق إلى أسفل جانب البئر لتشكيل حبيبات ضيقة في الأسفل. يوضح الرسم البياني الموجود على اليمين خلايا الدم الحمراء عند النظر إليها من الأعلى. لهذه التجربة ، ستحتاج إلى 1 96 بئر U صفيحة سفلية.

من الضروري استخدام صفيحة سفلية U لأن الألواح المسطحة السفلية لن تسمح للخلايا بالترسيب في حبيبات مما يجعل التفسير مستحيلا. أليف قادر على توصيل 50 ميكرولتر من مصل الاختبارات ، وتعليق 1٪ من خلايا ريفا ، ومحلول لمرة واحدة من محلول ملحي عازل فيرون لكل بئر من الصف. من واحد إلى 12 ، قم بتوصيل 50 ميكرولترا من محلول ملحي عازلة للروال.

يستخدم هذا كمخفف الخاص بك. الآن ضع 50 ميكرولترا من المصل في البئر ، واحد. هذا هو أول واحد من كل اثنين من التخفيف.

باستخدام البيت ، تأكد من خلط عينة المصل جيدا. بمجرد الخلط ، قم بإزالة 50 ميكرولترا من البئر A واحد وانقله إلى البئر A اثنين. هذا هو الثاني من كل اثنين من التخفيف ، مما يمنحك تخفيفا بمقدار أربعة أضعاف.

استمر في سلسلة التخفيف هذه باستخدام الآبار من ثلاثة إلى 11. لا تضع أي مصل في 12 لأن هذا هو التحكم السلبي للمحلول الملحي. الآن خذ 1٪ تعليق خلايا ريفا ، التي تم خلطها جيدا ونقل 50 ميكرولترا إلى ، حسنا ، واحدة إلى البئر A 12.

بمجرد إضافة الخلايا ، قم بتغطية اللوحة واضغط برفق على اللوحة للتأكد من خلط العينات والخلايا. الآن احتضن عند 37 درجة لمدة 60 دقيقة. حاضنة رطبة مناسبة.

خلال فترة الحضانة التي تبلغ 60 دقيقة ، ستحدث تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد وستبدأ الخلايا في الاستقرار. لقطات الفيديو التي تشاهدها هي تصوير فوتوغرافي بفاصل زمني لفترة 60 دقيقة بأكملها. هذه لقطة مقربة للآبار من خمسة إلى 10.

لقد درسنا بالفعل ، حسنا ، 12 ، الذي كان تحكم VBS الخاص بك في هذا. حسنا ، شكلت الخلايا حبيبات ضيقة تشير إلى أن الاختبار كان يعمل بشكل مناسب. الآبار الخامسة والسادسة هي أمثلة على تراص الحاشية الإيجابية.

حسنا ، سبعة هو مثال على نتيجة التراص الوسيط بينما الآبار ثمانية وتسعة و 10 سلبية لتراص الحاشية. بناء على هذه النتيجة ، سيتم تحديد العيار بناء على التخفيف للبئر ، سبعة حيث كان هذا هو البئر الأخير ، حيث لوحظ رد فعل إيجابي.