Name: تسجيلات صفيف Multielectrode من الطلائية الميكعي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-01T16:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: اكتشف طريقة تسجيل النشاط الكهربائي من الطلائية الميكعية للفأر باستخدام صفائح متعددة الأقطاب الكهربائية. تُستخدم هذه التقنية لدراسة استجابات الخلايا العصبية الحسية للمنبهات السائلة بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر أعضاء مختبر المقدسة. وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات الصمم والاتصالات (R01 DC005964 إلى ذلك) وجبهة الخلاص الوطني IGERT 0548890 (HAA). وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للقوانين الولايات المتحدة رعاية الحيوان والمعاهد الوطنية للصحة والمبادئ التوجيهية التي وافق عليها واشنطن رعاية الحيوان بجامعة ولجنة الاستخدام.

الجزء 1. الأجهزة الكهربائية تسجيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نحن نستخدم مجموعة multielectrode مستو (ALA الآلات العلمية) مع 10 ميكرومتر شقة أقطاب نيتريد التيتانيوم معزولة مع نيتريد السيليكون. مرتبة 60 في حقلين كهربائي يتألف من شبكة 5x6 مع مركز إلى مركز تباعد من 30 ميكرون. (تكوينات أخرى من الممكن أيضا ؛ كهربائية مع سطح تسجيل 10 ميكرومتر في القطر هي أفضل من أكبر الأقطاب من حيث عزل نشاط الخلايا العصبية واحدة.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتتضخم الإشارات الكهربائية (التضخيم 1000x) باستخدام مكبر للصوت الشرق الأوسط وأفريقيا 1060 (ALA الأدوات العلمية). يتم الحصول على إشارات في 10 كيلوهرتز باستخدام بطاقة الحصول على البيانات (الصكوك الوطنية) وبرنامج مخصص للحصول على البيانات (واحد يمكن أيضا شراء البرمجيات التجارية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يقام في الأنسجة أسفل على MEA بواسطة شبكة من النايلون (53 ميكرون) ، وهو يعلق على إدراج مخصص الذي يلائم بشكل مريح داخل أنبوب الثقافة خاتم من الشرق الأوسط وأفريقيا. </li></ol> الجزء 2. السائلة تسليم الأجهزة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> النسيج يتطلب superfusion المستمر ، الذي يضمن لنا من خلال تقديم حل رينغر (115 كلوريد الصوديوم ملم ، وكلوريد البوتاسيوم 5 ملم ، 2 كلوريد الكالسيوم ملم ، 2 كلوريد المغنيسيوم مم ، 25 بيكربونات الصوديوم مم ، 10 HEPES ملم ، و 10 ملي D - (+ ) - الجلوكوز) من مضخة HPLC. يتم تقديم المحفزات التي تؤدي إلى حقن صمام HPLC والتبديل بين والتدفق من خلال حلقة. يتم تزويد كل مضخة HPLC ومضخة حقن الروبوت في المحاقن مع حل رينغر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبقى الحل الجرس في حمام ماء ساخن (ISOTEMP 105) في 42 درجة مئوية في كافة مراحل التجربة ، وانفجر بشكل مستمر مع 95 ٪ O 2 / 5 ٪ CO 2. ويتم إعداد دورق منفصل من دون رينغر في الجلوكوز لدعم ضخ حقنة. يتم تسليم الحل الجرس على النسيج باستخدام 307 مضخة HPLC (جيلسون) بمعدل 3 مل / دقيقة. في تجربة نموذجية ساعة 5-6 ، 1 لتر من محلول كل رينغر كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في كافة مراحل التجربة ، هو نسيج superfused باستمرار مع حل درجة مئوية رينغر 37. يتم وضع مسبار سخان مباشرة فوق الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تسليم المحفزات السائلة باستخدام معالج 215 جيلسون ذراع روبوتية. يتم تخزين المحفزات في قوارير زجاجية المطاط المغطاة ، وتحت سيطرة البرمجيات جيلسون ، الذراع الروبوتية يسلم المحفزات إلى خط نضح في حين يتم الاحتفاظ معدل التدفق المستمر والضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمثل حالة صمام HPLC (حلقة تعمل / لا تعمل) عن طريق الجهد الكهربائي ، والتي يتم تسجيلها من قبل الكمبيوتر اقتناء كقناة إضافية لضمان تزامن مع نشاط الخلايا العصبية. </li></ol> الجزء 3. إعداد شركة طيران الشرق الأوسط والتحفيز الأجهزة التسليم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل أداء التشريح ، وملء MEA جيدا مع جيش صرب البوسنة في dH2O ما لا يقل عن 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف MEA باستخدام الدافئة فقاعات رينغر الحل ووضع شركة طيران الشرق الأوسط على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رئيس معالج السائلة وHPLC مضخة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol> الجزء 4. VNO تشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل أداء التشريح ، وملء 2 60x15 ملم أطباق بتري مع الحل رينغر فقاعات ومكان على الجليد. شغل أيضا 2 Sylgard المغلفة أطباق بتري من نفس الحجم مع الحل رينغر ومكان على الجليد. البرد an 50mL إضافية الدافئة انفجر في رينغر للاستخدام أثناء تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضحى الماوس عبر الخنق CO 2 تليها خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شقوق الثنائية من جانب الفم ، وبالتوازي مع خط الفك السفلي ، والجزء الخلفي من الرأس. الانضمام إلى خفض 2 على طول الظهر والعنق وإزالة الجزء الظهري للرأس ، وترك الفك السفلي تعلق على الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غرامة باستخدام مقص ، وقطع الأنسجة وبين جانبي عظم الفك العلوي لفصل الأنسجة من العظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> # 3 باستخدام الملقط ، تقشر الأنسجة الحنك لفضح تجويف الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص أو مشرط صغير ، وبين قطع على جانبي الأسنان الأمامية العلوية 2 لتحرير الميكعي كبسولة من العظام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> # 3 باستخدام الملقط ، التقط كبسولة الميكعي من العظام المسطحة وضعها في طبق بتري على الجليد. يجب أن يتم تنفيذ الخطوات حتى من خلال الانغماس في اقل من 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع صحن تحت stereomicroscope ، مضاءة مع الضوء المنعكس. إزالة الكبسولة العظمي من VNO في وقت واحد باستخدام الملقط # 3. استخدم يدا واحدة لتحقيق الاستقرار في الكبسولة التي تجتاح عظمي من نهاية الذيل واليد الأخرى لقشر العظم بعيدا عن VNO ، مع الحرص على عدم الإضرار VNO. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما تتم إزالة العظام ، ونقل إلى VNO طبق بيتري Sylgard المغلفة. استخدام طبق المتبقية لVNO الأخرى. تبديل الإضاءة الخفيفة لإرسالها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص أو الجزئي ملقط # 5 ، فصل VNO من الاوعية الدموية عن طريق خفض طول حافة VNO. عند هذه النقطة سوفلقد ورقة منفصلة تماما عن العصبية والأوعية الدموية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع VNO مع الجانب الداخلي حتى (شجيري). # 3 باستخدام الملقط ، ومرساة VNO إلى Sylgard في زاوية من الأنسجة. قشر ظهارة عصبية من الصفيحة القاعدية باستخدام قطعة صغيرة من شفرة حلاقة تفلون المغلفة التي عقدت مع المشبك. عقد شفرة بزاوية ضحلة (&lt;30 درجة من سطح الطبق) هو أفضل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة الزجاج ، ونقل قطعة من الظهارة العصبية من الطبق إلى الشرق الأوسط وأفريقيا. موقف VNO على رأس الحقل الكهربائي مع الجانب شجيري يصل. الحل إزالة الزائدة مع رينغر ماصة. مكان صاحب شبكة نسيج في البئر للصفيف لعقد VNO في مكان ، وملء مع الحل رينغر مبردة ل. </li></ol> الجزء 5. تسجيل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع شركة طيران الشرق الأوسط في شركة طيران الشرق الأوسط 1060 مكبر للصوت وموقف لجنة التحقيق سخان مباشرة فوق الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموضع الصحيح لتأكيد التحقيق جهاز التدفئة ، مع تحفيز حل رينغر البوتاسيوم يحتوي على 50 ملم (الاستعاضة عن الصوديوم متساوي المولية) لمدة 2 ثانية. ضبط تحديد المواقع للحد من الكمون للاستجابة العصبية في حل البوتاسيوم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Superfuse النسيج بمحلول رينغر ساخنة لمدة 45 دقيقة الى 1 ساعة قبل تسجيل للسماح للأنسجة حتى يتأقلم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم حفظ الإشارات الكهربائية إلى القرص باستخدام برامج مخصصة التسجيل. </li></ol> الجزء 6. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن أن يتم حاليا تحليل البيانات باستخدام التسجيلات القطب الخام. على سبيل المثال ، فإننا قياس التغيرات معدل إطلاق الخلايا المسجلة في استجابة ليغاندس معينة. مجموعات البيانات الناتجة تكون كبيرة ، ويمكن استخدامها لمعالجة مسائل مختلفة كثيرة ، مطلوب الألفة مع لغة البرمجة أو التحليل (C ، ماتلاب ، R ، بيثون ، أو ما شابه ذلك). </li></ol> الجزء 7. ممثل النتائج هذا التحضير هو عادة مستقرة بما يكفي لتسجيل من أجل 6 ساعات ، مما يعني أن كمية كبيرة من البيانات (6 ساعات من التسجيل من أقطاب 60). <img src="/files/ftp_upload/1845/1845fig1tmb.jpg" alt="الشكل 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 1"> الشكل 1. تظهر لقطة من النشاط في وقت واحد عبر واحد من نصف الصفيف. نافذة الوقت يمتد 400 مللي ثانية. الرجاء <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1845/1845fig1.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الرقم 1. <img src="/files/ftp_upload/1845/1845fig2tmb.jpg" alt="الشكل 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="الشكل 2"> الشكل 2 في تجربة نموذجية ، ونحن حفز مع مركبات معينة من الفائدة لمدة 10 ثانية. تتبع هذا هو مثال للاستجابة الى 100 أضعاف البول المخفف فئران. الرجاء <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1845/1845fig2.jpg">انقر هنا</a> لرؤية نسخة أكبر من الشكل 2.

<ol><li>Dulac, C., Torelo, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+detection+of+pheromone+signals+in+mammals%3A+from+genes+to+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular detection of pheromone signals in mammals: from genes to behaviour.</a> Nat Rev Neurosci. 4, 551-562 (2003).</li>
<li>Holy, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+Vomeronasal+neurons+to+natural+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Responses of Vomeronasal neurons to natural stimuli.</a> Science. 289, 1569-1572 (2000).</li>
<li>Nodari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfated+steroids+as+natural+ligands+of+mouse+pheromone-sensing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sulfated steroids as natural ligands of mouse pheromone-sensing neurons.</a> J Neurosci. 28, 6407-6418 (2008).</li>
</ol>

تسجيلات الصفيف Multielectrode تسمح لنا القدرة على رصد النشاط المتزامن لعدد كبير من الخلايا العصبية. هذا هو أداة مفيدة لبحث خصائص النظام الحسي ، وتحديدا VNO. على عكس النظام الشمية الرئيسية ، ويكشف VNO المحفزات في المرحلة السائلة. إضافة إلى ذلك ، VNO هو نسيج غير متجانس. هناك ما يقرب من 300 أنواع مختلفة من المستقبلات في الماوس 1 ، ويفترض مع التشكيلات استجابة مختلفة. تسجيلات الشرق الأوسط وأفريقيا مجتمعة مع الذراع الروبوتية تسمح لنا لتقديم المحفزات السائلة موثوق بها لعدد كبي...

تسجيلات صفيف multielectrode من الطلائية الميكعي

Multielectrode Array Recordings of the Vomeronasal Epithelium

فهم الدارات العصبية يتطلب أساليب لتسجيل العديد من الخلايا العصبية في وقت واحد. إلى<em&gt; في المختبر</em&gt; دراسات ، واحدة التكنولوجيا المتاحة حاليا هو مستو multielectrode صفيف (MEA) التسجيل. نحن هنا توثيق استخدام هذه الاتفاقات لدراسة الجهاز الماوس الميكعي (VNO) ، الذي يلعب دورا أساسيا في الكشف عن الفيرومونات والعظة الاجتماعية عبر مجموعة متنوعة من السكان من الخلايا العصبية الحسية معربا عن المئات من أنواع المستقبلات. الجمع بين الشرق الأوسط وأفريقيا مع معالج تسجيل سائل الروبوتية لتقديم المحفزات الكيميائية ، يمكن تسجيل ردود الفعل الحسية من السكان كبيرة ومتنوعة من الخلايا العصبية. إعداد يسمح لنا بإزالة الظهارة العصبية سليمة من VNO من الماوس وحفز مع بطارية من المواد الكيميائية أو يغاندس المحتملة مع رصد النشاط الكهربائي للخلايا العصبية لعدة ساعات. لذلك ، هذه التقنية هي بمثابة وسيلة مفيدة لتقييم النشاط يجند فضلا عن استكشاف خصائص الخلايا العصبية المستقبلة. نقدم التقنيات اللازمة لإعداد الميكعي ظهارة ، وتسجيل شركة طيران الشرق الأوسط ، والتحفيز الكيميائي.

Multielectrode صفيف (MEA) التسجيلات توفر طريقة لدراسة النشاط الكهربائي لأعداد كبيرة من الخلايا العصبية. هنا ، فإننا نقدم تفاصيل التحضير لتسجيل شركة طيران الشرق الأوسط من ظهارة الميكعي الماوس في وقت واحد بينما تحفيز الأنسجة.

تسجيلات صفيف Multielectrode من الطلائية الميكعي

يتطلب فهم الدوائر العصبية طرقاً للتسجيل من العديد من العصبونات في آن واحد. وبالنسبة للدراسات المخبرية، فإن إحدى التقنيات المتاحة حالياً هي ...

تُستخدم مصفوفات الأقطاب الكهربائية المتعددة المستوية للتسجيل من العضو الأنفي العلوي. يتم إزالة العضو الأنفي الملحق (VNO) من الفأر بحيث يظل الظهار العصبي سليمًا. أولاً، يتم إزالة كبسولة العضو الأنفي الملحق (VNO) من الفأر.بعد ذلك، يتم عزل الظهارة العصبية عن الكبسولة العظمية والأوعية الدموية والصفيحة القاعدية. توضع الأنسجة في مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة (MEA) بحيث يكون جانب العقد الشجيرية متجهًا للأعلى. وبمجرد اكتمال هذا الإعداد، نستخدم ذراعًا روبوتية لتقديم المحفزات السائلة إلى الأنسجة.مرحباً، أنا هانا أرنون من مختبر تيم هولي في قسم التشريح وعلم الأعصاب في كلية الطب بجامعة واشنطن. وأنا شيان فو، أيضاً من مختبر هولي. سنعرض لكم اليوم إجراءً للتسجيل بمصفوفة أقطاب كهربائية متعددة من العضو الأنفي V.نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة الخصائص الحسية أو العصبونات المستقبلة في الجهاز الشمي الملحق. لذا، فلنبدأ. يتم الحصول على التسجيلات الكهربائية باستخدام مصفوفة أقطاب كهربائية مستوية متعددة أو MEA تحتوي على أقطاب من نتريد التيتانيوم المسطح بحجم 10 micrometer ومعزولة بنتريد السيليكون.يتم ترتيب 60 قطباً كهربائياً في حقلين يتكون كل منهما من شبكة بحجم خمسة في ستة، مع مسافة فاصلة بين المركز والآخر تبلغ 30 micrometers. وتُضخم الإشارات الكهربائية باستخدام مضخم MEA 10 60، حيث تتطلب الإشارات تضخيماً بمقدار 1000 ضعف عند تردد 10 kilohertz.باستخدام بطاقة الحصول على البيانات وبرمجيات مخصصة للحصول على البيانات، يتم تثبيت النسيج على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة (MEA) بواسطة شبكة نايلون، والتي تكون متصلة بقطعة إدخال مخصصة تثبت بإحكام داخل المزرعة. لإخراج مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة، وبعد أن اطلعنا على القياسات، دعونا نرى كيفية إجراء تشريح العضو الأنفي الوراثي (VNO). قبل إجراء التشريح، املأ بئر مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة بألبومين المصل البقري أو BSA، ثم اشطف مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة باستخدام محلول رينجر الدافئ والمشبع بالفقاعات وضعها على الثلج.للتجهيز لعملية التشريح، املأ طبقين من أطباق بتري بمقاس 60 في 15 مليمتر بمحلول رينجر المشبع بالفقاعات وضعهما على الثلج. كذلك، املأ طبقين من أطباق بتري من المقاس نفسه ومطلية بـ sill guard بمحلول رينجر وضعهما على الثلج. قم بتبريد 50 مليلتر إضافية من محلول رينجر المشبع بالفقاعات لاستخدامها أثناء التشريح.ابدأ بفأر تم التضحية به عن طريق إجراء شقوق ثنائية من جانب الفم تمتد بشكل موازٍ لخط الفك وصولاً إلى مؤخرة الرأس. قم بتوصيل القطعين على طول الجزء الخلفي من الرقبة وإزالة الجزء الظهري من الرأس، مع ترك الفك السفلي متصلاً بالفأر باستخدام مقص دقيق. اقطع بين الأنسجة وأي من جانبي عظم الفك العلوي لفصل الأنسجة عن العظم.بعد ذلك، استخدم ملقط رقم 3 لإزالة أنسجة الحنك، وكشف التجويف الأنفي باستخدام مقص صغير أو مشرط عبر إجراء قطع بين وعلى جانبي السِنّين الأماميين العلويين لتحرير كبسولة العضو الأنفي الرغبي (VNO) الحساسة من العظم باستخدام ملقط رقم 3. ارفع كبسولة العضو الأنفي الرغبي الحساسة من منطقة العظم المسطح وضعها في طبق بتري على الثلج. يجب تنفيذ الخطوات السابقة وصولاً إلى غمر العضو الأنفي الرغبي في محلول رينجر المبرد في أقل من ثلاث دقائق.لمنع موت الأنسجة، ضع الطبق تحت مجهر ستيريو (مجسم) مضاء بضوء منعكس. استخدم ملقطاً من المقاس رقم ثلاثة لإزالة المحفظة العظمية من عضو VNO واحد في كل مرة. استخدم إحدى اليدين لتثبيت المحفظة العظمية عن طريق الإمساك بها من الطرف القريب، واليد الأخرى لتقشير العظم بعيداً عن VNO مع الحرص على عدم إتلاف VNO.بمجرد إزالة العظم، انقل الـ v و o إلى طبق بتري مطلي بالسيجار. استخدم الطبق المتبقي للعصب الأنفي المداري (VNO) الآخر. قم بتغيير الإضاءة لاستخدام الضوء النافذ باستخدام مقصات دقيقة.أو استخدم ملقط رقم 5. افصل العصب الأنفي المشترك (VNO) عن الوعاء الدموي عن طريق القص على طول حافة الـ VNO. عند هذه النقطة، ستكون الصفيحة العصبية منفصلة تماماً عن الوعاء الدموي.ضع العصب الأنفي (VNO) بحيث يكون الجانب الداخلي للأعلى باستخدام ملقط رقم 3. قم بتثبيت العصب الأنفي (VO) في الواقي (S guard) عند زاوية النسيج باستخدام قطعة صغيرة من شفرة حلاقة مطلية بالتفلون مثبتة بمشبك. قم بتقشير الظهارة العصبية من الصفيحة القاعدية مع إمساك الشفرة بزاوية ضحلة تقل عن 30 درجة من سطح الطبق.تعمل هذه الطريقة بشكل أفضل عند استخدام ماصة زجاجية. انقل قطعة الظهارة العصبية من الطبق إلى موقع مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة (MEA)، مع وضع العضو الأنفي الومضاني (VNO) فوق حقل الأقطاب الكهربائية بحيث يكون الجانب الشجيري للأعلى.قم بإزالة محلول رينجر الزائد باستخدام ماصة، ثم ضع حامل الأنسجة الشبكي في بئر المصفوفة لتثبيت الـ vno في مكانه. املأ البئر بمحلول رينجر المبرد بعد اكتمال عملية التشريح. لنرى كيفية التسجيل لبدء جلسة تسجيل، ضع الـ MEA في مضخم MEA 10 60 وقم بوضع مسبار السخان مباشرة فوق النسيج للتأكد من عمل السخان بشكل صحيح.يتم تحفيز موضع المسبار بمحلول رينجر الذي يحتوي على 50 millimolar من البوتاسيوم لمدة ثانيتين. يتم ضبط الموضع لتقليل زمن وصول الاستجابة العصبية لمحلول البوتاسيوم. تتطلب الأنسجة تروية سطحية مستمرة، وهو ما يتم تحقيقه عن طريق تزويد محلول رينجر باستخدام مضخة HPLC.قم بإجراء تروية فائقة (Super fuse) للأنسجة باستخدام محلول رينجر المسخن لمدة تتراوح من 45 دقيقة إلى ساعة واحدة قبل البدء بالتسجيل للسماح للأنسجة بالتأقلم. يتم تقديم المحفزات باستخدام الذراع الروبوتية لجهاز مناولة السوائل Gilson two 15. ويتم تقديمها عن طريق إجراء حقن في صمام HPLC والتبديل بين التدفق المباشر والحلقة (loop). وتحت تحكم برنامج Gilson، تقوم الذراع الروبوتية بإيصال المحفزات إلى خط التروية مع الحفاظ على معدل تدفق وضغط ثابتين.تُمثَّل حالة صمام HPLC بجهد كهربائي، يقوم كمبيوتر الحصول على البيانات بتسجيله كقناة إضافية. ولضمان التزامن مع النشاط العصبي، تُحفظ الإشارات الكهربائية على القرص باستخدام برنامج تسجيل مخصص. سنعرض لكم الآن بعض النتائج التمثيلية لتسجيل مصفوفة الأقطاب الكهربائية المتعددة في العضو الأنفي والمنقاري (VNO).ينتج عن هذا الإجراء كميات كبيرة من البيانات نظرًا للعدد الكبير من الأقطاب الكهربائية، وعادة ما يظل التحضير مستقرًا لمدة ست ساعات تقريبًا. إليكم مثال على بيانات لمدة 400 milliseconds من نصف واحد من الـ MEA. هذا الإجراء مفيد في قياس استجابة العصبونات الحسية للروابط (ligands)؛ وما يظهر هنا هو الاستجابة لبول فأرة أنثى مخفف بمقدار 100 ضعف، تم تسجيلها بواسطة قطب كهربائي واحد.تم تقديم البول لمدة 10 ثوانٍ كما يشير الشريط الأسود. لاحظ زيادة معدل التنشيط العصبي بعد تقديم المحفز. لقد أظهرنا لك للتو كيفية إجراء تسجيلات المصفوفة điệntrodية المتعددة على العضو الأنفي الملحق (VNO) للفأر عند تنفيذ هذا الإجراء.من المهم تذكر ضرورة التحلي بالصبر. هذا كل شيء. شكراً لمشاهدتكم ونتمنى لكم التوفيق في تجاربكم.

multielectrode-array-recordings-of-the-vomeronasal-epithelium

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

وelectroolfactogram (EOG) هو تسجيل بالمعلومات ، طريقة سهلة لقواعد السلوك ، وموثوق بها لتقييم وظيفة حاسة الشم عند مستوى الظهارة الشمية. يصف هذا البروتوكول على إعداد تسجيل ، والماوس إعداد الأنسجة ، وجمع البيانات وتحليل البيانات الأساسية.

تحليل الردود من الخلايا العصبية الحسية الشمية ماوس باستخدام تسجيل Electroolfactogram الهواء المرحلة

وهناك طريقة قوية لدراسة الانهيارات العصبية ، أي الحجم ثابتة رشقات نارية النشاط المكانية والزمانية ، مما يدل على دينامية حالة حرجة في القشرة. الانهيارات الثلجية تظهر تلقائيا في وضع طبقات القشرة السطحية للمثقف الذي يسمح على المدى الطويل قياسات للنشاط متكامل مع المصفوفات مستو متعددة القطب (MEA) في ظل الظروف تسيطر على وجه التحديد.

تسجيلات صفيف متعدد القطب من الانهيارات الجليدية الخلايا العصبية في الثقافات عضوي النمط

الجهاز الميكعي (VNO) بالكشف عن اشارات كيميائية إختلافات بين الأنواع التي تنقل المعلومات الاجتماعية والإنجابية. لقد أجرينا تجارب التصوير + CA2 الفئران المعدلة وراثيا باستخدام تعبير عن G - CaMP2 في الأنسجة VNO. هذا الأسلوب يتيح لنا لتحليل أنماط استجابة معقدة من الخلايا العصبية الميكعي لأعداد كبيرة من المحفزات فرمون.

الردود تصوير الخلايا العصبية في الجهاز الاستعدادات لقطات للالميكعي تعرب عن جهاز استشعار الكالسيوم مشفرة وراثيا

يوضح هذا الفيديو التسجيل الفيزيولوجي الكهربي للخلايا العصبية الحسية الشمية (OSNs) في الفئران باستخدام تقنية مشبك التصحيح المثقوب. يتم عزل الظهارة الشمية ، التي تحتوي على OSNs مع مستقبلات رائحة تحمل علامات الفلوروفور ، عن الفأر وتثبيتها في غرفة التسجيل. يتم تثبيت ماصة التسجيل على المقبض الشجيري ل OSN، ويقوم النيستاتين داخل الماصة بثقب الغشاء لتكوين اتصال كهربائي بالخلية. أخيرا ، يتم استخدام ماصة أخرى لتوصيل منشط للرائحة ، ويتم تسجيل النشاط الفيزيولوجي الكهربي للخلية المرقعة.

تسجيل مشبك التصحيح المثقوب للخلايا العصبية الحسية الشمية في الفئران

يصف فيديو البروتوكول إنشاء مشبك تصحيح خلية كاملة للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي من الخلايا العصبية الحسية للعضو الصوتي (VNO) في الفئران. يتم وضع شريحة VNO الإكليلية مع الخلايا العصبية الحسية المسماة بالفلورسنت في إعداد التسجيل. يتم تصحيح الخلايا العصبية المسماة بماصة تسجيل في تكوين خلية كاملة للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي استجابة للمنبهات الكيميائية.

إنشاء مشبك رقعة كامل الخلية للتسجيل الفيزيولوجي الكهربي من الخلايا العصبية الحسية Vomeronasal

أنشئت التسجيلات المدى الطويل خارج الخلية في وقت واحد من اثنين neuropiles الدماغ المختلفة أو اثنين مساحات تشريحية مختلفة في نحل العسل. تسمح هذه التسجيلات التحقيق في الجوانب الزمنية للتجهيز الخلايا العصبية في مناطق الدماغ المختلفة في الخلايا العصبية واحد، وكذلك على مستوى الفرقة في حيوان يتصرف.

تسجيلات في وقت واحد على المدى الطويل في مرحلتين العصبية في معالجة يتصرفون نحل العسل

وكان الماوس لمبة حاسة الشم التبعي (AOB) صعبة للدراسة في سياق الترميز الحسي. هنا، ونحن يبرهن على وجود تشريح التي تنتج خارج الحي إعداد الخلايا العصبية التي لا تزال متصلة وظيفيا AOB لمدخلاتها الطرفية، وتسهيل البحث في معالجة المعلومات من الفيرومونات الماوس وkairomones.

فيفو السابقين الاستعدادات للالميكعي الجهاز سليمة والإكسسوار الشم لمبة

نحن هنا تصف كيفية إجراء التسجيلات مجموعة متعدد القطب الأنسجة القشرية صرع الإنسان. وأظهرت استئصال الأنسجة الصرع، إعداد شريحة ومجموعة متعدد القطب تسجيلات لأحداث النشبات ونشبي بالتفصيل.

متعدد القطب تسجيلات صفيف من داء الصرع بعد الجراحة القشرية الأنسجة البشرية

لا يزال تحليل الخصائص الفسيولوجية للخلايا العصبية الحسية الشمية يواجه قيودا تقنية. هنا نقوم بتسجيلها من خلال مشبك رقعة مثقب في تحضير سليم للظهارة الشمية في الفئران المستهدفة بالجينات. تسمح هذه التقنية بتوصيف خصائص الغشاء والاستجابات لروابط معينة من الخلايا العصبية التي تعبر عن مستقبلات حاسة الشم المحددة.

مثقب تسجيل التصحيح، المشبك من الماوس العصبونات الحسية الشمية في الظهارة العصبية السليمة: التحليل الوظيفي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها إبداء الرائحة مستقبلات

هنا ، نصف نهجا فسيولوجيا يسمح بتحديد وتحليل متعمق لمجموعة محددة من الخلايا العصبية الحسية في شرائح الأنسجة الإكليلية الحادة لعضو الفأر الصوتي باستخدام تسجيلات مشبك التصحيح للخلية بأكملها.

في التحليل المتعمق الفسيولوجية لبالسكان خلية المعرفة في الحادة الأنسجة شرائح من الميكعي الجهاز ماوس

يقدم هذه الدراسة أسلوب التسجيل المتزامن للإمكانات الميدانية المحلية في الدماغ، كهربية، اليكتروميوجرامس، وإشارات للفئران تتحرك بحرية في التنفس. هذا الأسلوب، مما يقلل من تكاليف التجريبية ويبسط تحليل البيانات، سوف تسهم في فهم التفاعلات بين الدماغ والأجهزة الطرفية.

التسجيلات المتزامنة الإمكانات الميدانية المحلية القشرية، ورسم القلب، اليكتروميوجرام وإيقاع من الفئران تتحرك بحرية في التنفس

اكتشف طريقة تسجيل النشاط الكهربائي من الطلائية الميكعية للفأر باستخدام صفائح متعددة الأقطاب الكهربائية. تُستخدم هذه التقنية لدراسة استجابات الخلايا العصبية الحسية للمنبهات السائلة بدقة عالية.

تسجيلات صفيف Multielectrode من الطلائية الميكعي

استكشف المزيد من الفيديوهات