April 2nd, 2010
خلايا الشبكية العقدة نقل المعلومات البصرية من العين إلى الدماغ مع سلاسل من إمكانات العمل. هنا ، ونحن لشرح كيفية تسجيل إمكانات عمل خلايا العقدة واحد في الجسم الحي من الفئران تخدير.
سنعرض اليوم نظام تسجيل طورناه للتسجيل في الجسم الحي من chiasm البصري للفئران. كانت هذه الأنواع من التسجيلات نادرة جدا في الفئران ، ويرجع ذلك جزئيا إلى أن محاور الخلايا العقدية الشبكية التي يتكون منها العصب البصري صغيرة جدا ، مما يجعل من الصعب التسجيل من الخلايا الفردية ، وبما أن الفئران هي نموذج حيواني شائع لتنكس الشبكية ، فإن هذه الأنواع من التسجيلات لديها القدرة على إنتاج الكثير من المعلومات المفيدة. كان مفتاح تحقيق هذه التسجيلات هو أقطاب الزجاج الملون التي صممناها والتي لها طرف حاد طويل يسمح بتسجيل إمكانات الفعل من محاور ذات قطر رفيع مع نسبة إشارة عالية إلى الضوضاء.
سنرشدكم خلال عملية تصنيع هذه الأقطاب الكهربائية وسنوضح لكم كيف نضع على الجهاز التجسيمي ، ثم سنعرض لكم مثالا على تسجيل قطارات السنبلية من خلية عقدية واحدة. هناك حاجة إلى ثلاث قطع رئيسية من المعدات لتصنيع أقطاب كهربائية ، وهي منفاخ زجاجي قياسي لصنع الماصات الصغيرة. يتم استخدام ماكينة الخياطة لشحذ التنغستن والمجهر القياسي بهدف 40 ×.
بالإضافة إلى ذلك ، هناك حاجة إلى حلقة الجرافيت ذات القطب المرفق وسيتم وضعها في المحلول المركز لهيدروكسيد البوتاسيوم ونترات الصوديوم. يتم وضع هذا تحت ذراع الخياطة ، ثم يتم لصق قطعة رقيقة من سلك التنغستن على ذراع الخياطة ، مغمورة جزئيا في المحلول. ثم يتم تطبيق الخيوط على عمود الجرافيت على أحد طرفيه في ذراع الخياطة.
على الفولتيين الآخرين سيتم تطبيقها عبر الخيوط ويتم تشغيل ماكينة الخياطة. يؤدي هذا إلى غمس الزنستون في المحلول وشحذه كهرومغناطيسيا لمدة دقيقتين. بمجرد شحذ التنغستن ، يتم إزالته بعناية من ذراع الخياطة ، ثم يغمس في الماء لإزالة المحلول الزائد ، ثم يوضع تحت المجهر تحت هدف 40 ×.
تتميز الماصة الزجاجية الدقيقة بقطر صغير يبلغ قطرها حوالي ميكرون إلى ميكرون. ثم يتم إدخال التنغستن الحاد بعناية في الطرف الخلفي للماصة الدقيقة ويتم دفعه باستخدام مناور ميكانيكي دقيق. يتم دفع التنغستن من خلال نهاية الزجاج بعناية فائقة.
من المهم أن يكون هناك توافق محكم بين التنغستن والزجاج ، ومن الشائع دفع ما يكفي حتى تنكسر كمية صغيرة من الزجاج بالفعل. يمكن وضع كمية صغيرة من الغراء المجنون على الطرف الخلفي من الماصة الدقيقة لربط التونغ بالزجاج. الآن بعد أن اكتمل تصنيع القطب الكهربائي ، يتم قياس مقاومتها باستخدام اختبار مقاومة القطب المعدني.
بشكل عام ، نبحث عن مقاومة بالقرب من ميجا أوم واحد. ثم يتم وضع القطب الكهربائي بعيدا في علبة لحفظها ، لأنه هش للغاية. يتم تقديم المحفزات المرئية على شاشة موضوعة على منصة متحركة.
تستخدم بطانية التدفئة للتحكم في درجة حرارة جسم ، ويسمح النظام التجسيمي بالحركة الإجمالية للمحرك الصغير ، وهو ما هو موضح هنا. العلبة المعدنية في درع إبرة التوجيه تحت الجلد ، يعمل قطب التسجيل لتقليل مستويات الضوضاء. يتم إدخال إبرة التوجيه في الدماغ ويتم استخدام محرك صغير لخفض القطب الكهربائي ببطء من خلال إبرة التوجيه.
يتضح هذا هنا حيث يتم إنزال العلبة المعدنية على عارضة تستقر على جمجمة. ستبرز إبرة التوجيه أسفل العارضة كما هو موضح ، ويعمل التلامس الكهربائي بين العلبة المعدنية والعارضة على تقليل مستويات الضوضاء. ثم يتم وضع على بطانية التدفئة.
يتم إدخال قضبان الأذن بعناية. من المهم في هذه المرحلة التأكد من بقاء الرأس مستويا. ثم يتم إدخال قضيب الأسنان للتأكد من أن الرأس في جميع الاتجاهات.
يتم إدخال مسبار المستقيم باستخدام الفازلين. سيقيس هذا درجة حرارة الجسم ، والتي تستخدم بعد ذلك للتحكم في درجة حرارة بطانية التدفئة. يجب أن تظل درجة حرارة الجسم بين 36 و 37 درجة.
يتم إدخال رصاص مخطط كهربية القلب في الجلد لمراقبة معدل ضربات القلب ، والذي يبلغ عموما حوالي 300 قدم في الدقيقة. معدل ضربات القلب هو مؤشر جيد على عمق التخدير. تتم مراقبة العلامات الحيوية للحيوان باستمرار باستخدام برامج مخصصة.
وتشمل هذه ضغط الدم بعنوان ثاني أكسيد الكربون2 درجة حرارة الجسم ومعدل ضربات القلب. ثم تتم إزالة الجلد من أعلى الجمجمة وتكشف الجمجمة. من المهم تنظيف الجمجمة جيدا من أجل رؤية علامات الجمجمة المناسبة المستخدمة للعثور على chiasm البصري.
ثم يتم وضع مجموعة العارضة في مكانها. يستخدم هذا لتتبع دائرة خمسة ملليمترات على الجمجمة والتي سيتم حفرها وإزالتها بعد ذلك. سيتم حفر الحفرة حول علامة جمجمة bgma الموضحة هنا.
تظهر الجمجمة المكشوفة بعلامة قلم رصاص دائرية حول bgma ، والتي سيتم حفرها قبل حفر الجمجمة. يجب معايرة النظام التجسيمي torema ، ويتم ذلك عن طريق اصطفاف إبرة التوجيه بدقة على bgma وتوثيق موضع الاستريو. بعد الحفر ، تمت إزالة الجمجمة وتعرض الدماغ.
بعد حفر الجمجمة ، يصاب بالشلل والتهوية لمنع حركات العين. يتم ذلك عن طريق حقن الجامين في الوريد. تتم مراقبة التنفس بعناية كما هو ، وعندما يتوقف التنفس ، يتم إدخال أنبوب التهوية في موصل القصبة الهوائية ، وعند هذه النقطة يتنفس بشكل مصطنع.
ثم يتم إنزال إبرة التوجيه في الدماغ. سيتم خفض قطب التسجيل من خلال الجيال إلى حوالي ثمانية إلى 10 ملليمترات تحت الجمجمة حيث يمكن تسجيل إمكانات الفعل من الخلايا البصرية في التصلب البصري. يتم تحميل القطب ببطء في الدماغ.
باستخدام محرك الأقراص الصغير ، يمكن سماع خلية بصرية تستمع تلقائيا إلى الخلية ، وتستجيب لوجود عصا محمولة باليد في مجالها الاستقبالي. ثم يتم تقديم درجات الانجراف ، وفي هذه المرحلة ، يمكن استخدام أي محفزات بصرية ذات أهمية لدراسة خصائص استجابة الخلايا العقدية الشبكية باستخدام chiasm البصري. تسجيل.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
توضح هذه المقالة طريقة لتسجيل إمكانات الفعل من خلايا العقد العصبية في الشبكية المفردة في الفئران المخدرة في الجسم الحي. تستخدم التقنية أقطاب كهربائية زجاجية ملطخة بالوتنغستين مصممة خصيصًا لتحقيق تسجيلات عالية الجودة من المحاور الصغيرة.
Recording from retinal ganglion cell axons in rats enables functional assessment of visual pathways in a widely used disease model, supporting target validation for neuroprotective therapies. This method provides quantitative electrophysiological readouts that can de-risk mechanistic hypotheses in preclinical discovery. By accessing single-unit activity without ocular disturbance, it offers a translational bridge for evaluating drug effects on retinal ganglion cell survival and function.