فلاش التجميد وCryosectioning E12.5 مخ الفأر

مرحبا ، أنا سبنسر كيرلي من جامعة كاليفورنيا إيرفين ومختبر إد ماكي ، وسأوضح كيفية إجراء التشريح بالتبريد. للقيام بذلك ، أستخدم هذه الكواشف شائعة الاستخدام أولا. يطلق على مركب التضمين أو وسائط التضمين التي أستخدمها OCT للحصول على درجة حرارة القطع المثلى.

إنه محلول واضح ، إنه سميك ولزج للغاية ، ويحمل الأنسجة بشكل جيد بينما يمكنك توجيهها ثم يتجمد ، وفي النهاية يكون قابلا للذوبان في الماء حتى تتمكن من التخلص منه أثناء أي نوع من إجراءات التلوين. لذلك قمت بتضمين الأنسجة في قالب. حاويات خزعة العفن بالتبريد هذه ، تأتي بأحجام مختلفة.

سأستخدم هذا القالب الأصغر هنا لأنني أقوم بعمل أنسجة جنينية من الفأر. نحن وميض تجميد الأنسجة والنيتروجين السائل. لذا سأملأ أولا قارورة التفريغ الواقية هذه بالنيتروجين السائل من خزاننا هنا.

قبل تجميد الأنسجة بشكل سريع ، يجب عليك ما يسمى بالتبريد لحماية الأنسجة ، وإلا فإن التجميد نفسه سيؤدي إلى تدمير الأنسجة. لذا ما تفعله هو إغراق الأنسجة في محلول سكروز بنسبة 30٪ بين عشية وضحاها. وإذا استغرق الأمر وقتا أطول ، فلا بأس بذلك ، طالما أن الأنسجة تغرق.

وكما ترون, تأشيرة يوم جنيني 12.5 رؤوس الفئران, غرقت في, في محلول السكروز, لذلك فهي جاهزة للتجميد. لذا سأقوم الآن ببساطة بصب الأنسجة الموجودة في محلول السكروز في طبق أكبر ، حتى أتمكن من التلاعب بالأنسجة. سآخذ بعضا من OCT هذا وأسكبه في هذا الطبق الذي يبلغ طوله 35 ملم والذي يستقر بالفعل على غطاءه حتى أتمكن من الحصول عليه بزاوية.

لذا فإن OCT تتجمع على طول الحافة من أجل العمق. لذلك أنا أستخدم زوجا من الملقط القديم لمجرد أنك لست بحاجة إلى أن تكون حادة ولا تريد تدمير زوج آخر من الملقط. لذا أقوم بأخذها وأرفع أحد هذه الرؤوس برفق شديد ، وأضعه في هذا الحمام الأول من أكتوبر.

أريد فقط تغطية الجنين في OCT. هذا يسمح بتجميد أفضل وأكثر اتساقا للأنسجة. لا تريد أي سكروز متبقي حول الأنسجة أو أي فقاعات هواء.

بالتأكيد تجنب فقاعات الهواء. لذلك أقوم فقط بتقليب OCT برفق حول وتحت الرأس ، وتحريك الرأس عبر OCT واتركه يجلس هناك لبضع ثوان فقط بينما أقوم بملء قالب التبريد الخاص بي. لذا سأقوم الآن بملء قالب التبريد ب OCT ، مرة أخرى ، لتجنب الفقاعات.

وسأقوم فقط بملئه حتى أعلى القالب. وكما ستلاحظ ، لقد قمت بتسمية القالب. لذلك سأفعل ، سأكون قادرا على رؤية اتجاهي بعد تجميده.

عندما يتجمد OCT ، يتحول إلى اللون الأبيض ، ولم يعد بإمكانك رؤية أنسجتك. لذلك تريد بالتأكيد تسمية علامة دائمة. ال ، قالب التبريد.

لقد حصلت بالفعل على فقاعة في OCT ، لذلك سأستخدم ملقطي لدفعها للخارج فوق الحافة. أنت لا تريد أن يتداخل ذلك مع تجميد أنسجتك. لذا سأقوم الآن بنقل الرأس من هذا الطبق إلى OCT الموجود في قالبي.

سأقوم فقط بإزالته من الطبق ووضعه في القالب برفق شديد. ثم سأذهب إلى المجهر حيث سأقوم بتوجيه الأنسجة. لدي الأنسجة الموجودة في قالب التبريد الخاص بي هنا ، وسأنظر في النطاق حتى أتمكن من توجيهه.

سأقوم بعمل أقسام إكليلية من خلال رأس الماوس هذا. لذلك أحتاج إلى توجيهه حتى أتمكن من وضعه في ناظم البرد للأقسام الإكليلية. لذا مرة أخرى ، أنا أستخدم هذه الملقط القديم الضعيف وكما ترون ، هناك بعض الفقاعات هنا وسأبذل قصارى جهدي لإخراجها.

لكن هذه الفقاعات الصغيرة ليست سيئة. لم ألاحظ أي شيء مع هذه الفقاعات الأصغر. أنت فقط لا تريد فقاعات كبيرة.

لذلك سأقوم فقط بإخراجهم بأفضل ما أستطيع وبالتأكيد امسح الملقط كثيرا لأنه يمكنك تجنب الفقاعات بشكل أفضل بهذه الطريقة. والآن إذا كان بإمكانك رؤية الملصقات الخاصة بي ، فلدي حرف T هنا إلى الأعلى و F على يساري هنا. هذا يشير لي فقط إلى أن الرأس والجزء العلوي من الرأس سيكون لأعلى والجزء الأمامي أو الوجه سيكون على يساري.

بهذه الطريقة أعرف السطح الذي يجب أن أقسم من خلاله للأقسام الإكليلية وأنا فقط أدفع الأنسجة. ومرة أخرى ، في بعض الأحيان يؤدي ذلك إلى ظهور فقاعات وتريد فقط دفعها للخارج حتى لا تتجمد بجانب الأنسجة. لذلك من السيئ أن يكون لديك فقاعات ، ويرجع ذلك أساسا إلى أنه عندما تتجمد ، يمكن أن تتسبب فقاعات الأنسجة في تجميدك بشكل غير متسق.

الغرض من التجميد السريع هو تجميد كل شيء مرة واحدة. أيضا ، عندما تكون ، عندما تقوم بقطع الأنسجة والتبريد ، إذا مرت الشفرة عبر فقاعة بدلا من OCT أو الأنسجة ، فقد يتسبب ذلك في حدوث عقبة أو تمزق ، وتدمير أو كسر الأنسجة الخاصة بك. لذلك تريد بالتأكيد تجنب هذه الفقاعات بأي ثمن.

الأكبر منها على وجه الخصوص. لذلك ما زلت أوجهها هنا. تم إصلاح هذا النسيج لمدة 24 ساعة ، لذا فهو قوي جدا في التلاعب ببي.

قد تكون الأنسجة الأخرى أكثر نعومة قليلا ، لذلك تريد فقط أن تكون لطيفا جدا. لذلك بمجرد وضعه أسفل النطاق مع وضع الوجه إلى اليسار وأعلى الرأس لأعلى ، سأحتاج إلى التأكد من أنه صحيح في مستويات الاتجاه الأخرى أيضا. لذلك سأرفع وأنظر من خلال جميع وجوه المكعب للتأكد من أنه صحيح.

وأرى أنه بزاوية لأسفل قليلا ، لذا يجب أن أرفع بالملقط. حسنًا؟ وهذا بالتأكيد يتطلب الكثير من الممارسة. حسنا ، تبدو جيدة.

الآن سأمشي هنا وأقوم بتجميده في النيتروجين السائل. حسنا ، الآن بعد أن تم توجيه الأنسجة بشكل صحيح في قالب التبريد ، سأسكب النيتروجين السائل في هذا الطبق هنا. هذا مجرد طبق بتري بلاستيكي عادي لزراعة الأنسجة حتى الأعلى.

يتبخر بسرعة كبيرة. سآخذ ملقطي وأخفض قالب التبريد. وكما ترون ، لقد ثني الشفة السفلية بالفعل.

هذا يسمح بالتأكيد بمعالجة أفضل وأفضل. سأقوم بتجميدها. وعندما يتجمد النسيج و OCT ، يتحول إلى اللون الأبيض الصلب.

وبمجرد اكتماله ، سيكون كل شيء أبيض. وبعد ذلك يجب أن أضع الأنسجة المجمدة بسرعة في الفريزر 80 تحت الصفر للتخزين. تريد أن تمسك بها بحيث لا تغمر الأنسجة.

لذلك عليك أن تكون حريصا جدا فقط على تثبيته في السطح العلوي للنيتروجين السائل. حسنا ، الآن تم تجميدها. احتفظ بها هناك لبضع ثوان إضافية قبل أن أذهب إلى سالب 80.

حسنا، سآخذها الآن إلى سالب 80. لذلك أخذت أنسجتي من سالب 80 ووضعتها في هذا الناجمة هنا. في الواقع ، انخفضت الغرفة إلى سالب 24 درجة مئوية.

في الوقت الحالي ، عليك ترك الأنسجة تتوازن لمدة نصف ساعة إلى ساعة قبل أن تتمكن من البدء في التقسيم. خلاف ذلك ، فهي هشة للغاية. لذا ، في حين أن جميع إحصائيات التبريد مختلفة ، سأشير فقط إلى بعض الأشياء الأساسية حول هذا الجهاز هنا.

لذلك نستخدم Leica CM 30 50 ثانية. إنها آلة جيدة لأنها تحتوي على وحدة تبريد منفصلة للعينة نفسها ، وهي ميزة إضافية لطيفة. يمكنك ضبط درجة حرارة العينة ، وتتطلب الأنسجة المختلفة درجات حرارة مختلفة للقطع.

لذلك عندما تقوم بتحميل أنسجتك لأول مرة ، تحتاج إلى إجراء العديد من التعديلات. وهذه متشابهة في جميع إحصائيات التبريد. هذه إلكترونيات ، بعضها يعمل يدويا.

على سبيل المثال ، ستحتاج إلى سحب ذراع ناظم التبريد أو تقدمه لوضعه أبعد أو أقرب إلى الشفرة. يمكنك القيام بذلك بسرعة أو بطيئة. يمكنك ضبط سمك القطع الخاص بك ، مع هذا زائد أو ناقص هنا.

وستختار بين القطع أو سمك المقطع ، وهو ما يشار إليه في الزر الأوسط هنا. ستقوم بضبط درجة حرارة الغرفة أو العينة نفسها بجوار هذه الشاشة الرقمية ببساطة عن طريق الضغط على هذا واستخدام هذه الأسهم لأعلى أو لأسفل لضبط درجة الحرارة. لذلك ، بالنسبة لنا ، عندما نقوم بالتقطيع بالتبريد ، نستخدم هذه العلامة التجارية لصيادي الأسماك Super frosts بالإضافة إلى شرائح المجهر.

يتم تغليفها ببعض المواد اللاصقة حتى لا تؤتي الأنسجة أثناء المعالجة. في بعض الأحيان أثناء التقسيم ، ستلاحظ أن الأنسجة تبدو ناعمة بعض الشيء وستكون بعض المؤشرات على ذلك إذا اصطدمت بالشفرة وتجمعت. وما يمكنك استخدامه لإصلاح ذلك هو تجميد ماركة فيشر الودية للغاية.

إنه وميض يجمد الأنسجة وتقوم فقط بتوجيهه إلى أنسجتك والضغط على الزناد وسيقوم بإعادة تجميد الأنسجة بسرعة إذا كانت ناعمة جدا. قبل تركيب المنديل على ظرف للتقسيم ، أود أن آخذك في جولة سريعة لبعض الأشياء الموجودة في الجهاز هنا. هذا هو المكان الذي تقوم فيه بالفعل بتحميل الشفرة ، والتي يتم تثبيتها بهذه الصفيحة المعدنية.

عن طريق سحب هذا الذراع ، يمكنك بالفعل إزالة الشفرة واستبدالها حسب الحاجة. تأكد من أنها لطيفة وآمنة. لا تريد تأمين الشفرة أكثر من اللازم ، وإلا فإنها تتشوه بالفعل.

وستلاحظ في التقسيم أن سمك الأنسجة ليس متسقا. لذلك تريد ، لا تريد دفع هذه الذراع لأسفل. تريد فقط نقلها إلى حيث تدور حولها ، حتى مع الشفرة نفسها.

هذا شيء آخر قد تضطر إلى تعديله أثناء التقسيم. يطلق عليه اللوحة المضادة للانزلاق. إنها قطعة من الزجاج تتناسب مع هذا الحامل هنا ويمكنك ضبطها باستخدام هذا المسمار المحمل بنابض هنا.

وتقوم بشكل أساسي بتحريكه للأمام أو للخلف. وهذا سيحافظ على منديلك أو أقسامك مسطحة بحيث يمكنك تركيبها على شريحة. شيء آخر قد ترغب في ضبطه أثناء التقسيم هو المكان الموجود على الشفرة الذي يقوم بالقطع الفعلي.

إذن كيف يمكنك ضبط ذلك هو أنك ببساطة ترفع هذه الرافعة ويمكنك تحريك هذه الأداة الغريبة بأكملها إلى اليسار أو اليمين. وأنت تستخدم ذلك فقط إذا لاحظت أن أنسجتك تتعطل في جزء معين من الشفرة أو كنت ترغب في حفظ الشفرات لأنها باهظة الثمن إلى حد ما. حتى تتمكن من العثور على منطقة نظيفة لطيفة فقط عن طريق تحريكها ذهابا وإيابا.

شيء آخر يمكنك ضبطه هو زاوية القطع. الآن على الجانب هنا، الذي لن تتمكن من رؤيته، هناك ثلاثة أوضاع مختلفة. نحن فقط نستخدم الموضع الأوسط وتقوم بضبط ذلك عن طريق رفع هذه الرافعة الأخرى.

وهذا يمكن ، يمكنك جعل هذه الأداة الغريبة ترتفع وتنخفض. نحن دائما نبقيها في المنتصف. لذلك سأبقيها عند هذا الحد الآن.

إذن هذا هنا هو رأس ناظم البرد. ستحتفظ في الواقع بعينة الأنسجة المجمدة أثناء تقسيمها. يتأرجح لأعلى ولأسفل ويتقدم نحو النصل.

وتقوم في الأساس بتركيب الأنسجة على هذا الظرف هنا وسنضع الظرف في الرأس ، ونشدها لأسفل ، ثم نستخدم هذه المقابض في الخلف لضبط الزاوية لجعلها أكثر استقامة. لذا سأقوم الآن بتركيب الأنسجة على الظرف تريد الاحتفاظ بالخراطيش في درجة حرارة الغرفة لأنك ستضيف أولا طبقة من OCT ولا تريد أن يتجمد ذلك على الفور لأنك تريدها أن تكون طبقة مسطحة لطيفة.

وسنستخدم هذه الأداة الغريبة هنا ، تسمى مستخرج الحرارة. في الواقع ، سيتم استخدامه لتسطيح OCT أثناء تجميده. لذا ما أفعله أولا هو أن أجري فحص درجة حرارة الغرفة وأضعه في هذا الحامل هنا.

خذ بعضا من فقاعات OCT الخاصة بي. لا يهم هنا لأنه سيتم ضغطهم. فقط أضف القليل ، لا تحتاج إلى الكثير.

خذ مستخرج الحرارة واجلس هناك مباشرة. انتظر بضع ثوان. ثم هناك يمكنك أن ترى أن OCT لطيف ومسطح.

الآن لدي أنسجتي وأحتاج إلى تحديد OCT الفعلي. حسنا ، سأضع علامة على نقطة OCT ، للإشارة إلى موضعها. لذلك هناك ، لقد قمت للتو بتمييز الجزء العلوي بنقطة زرقاء.

لذا سأقوم الآن بإخراج كتلة الأنسجة من القالب وأفعل ذلك فقط عن طريق الضغط على الجزء الخلفي منه. لذلك سأضغط على ظهري برفق وأدفعه في يدي ، لكن مرة أخرى ، لا أريد أن يذوب. لذلك أعدتها إلى الداخل.

والآن يمكنكم رؤية كتلة الأنسجة مع العلامة الزرقاء التي وضعتها عليها. لذلك أعلم أن هذا هو الجزء العلوي من رأس الجنين. وأريد أن أقسم الوجه لأن هذه أقسام إكليلية.

لذا ما سأفعله الآن هو أن أضيف قطرة أخرى من قطرة كبيرة من OCTA ، ويجب أن أتصرف بسرعة الآن لأن كل شيء بارد. وسآخذ منديلي وأضعه في المنتصف مباشرة ، وتأكد من أنه مسطح مقابل سرير OCT المصنوع بالفعل. الآن سأترك هذا يتجمد وسيستغرق ذلك حوالي دقيقة أو دقيقتين.

حتى الآن انتهى التجميد. وسأقوم بأخذ الأنسجة المثبتة على الظرف ، ووضعها في الرأس ، وجعلها مستقيمة قدر الإمكان ، ثم شدها. يمكن ، إنه لطيف وضيق.

سأضعها أمام الشفرة مباشرة ثم أقدمها ، الأمر الذي قد يستغرق عدة ثوان. حسنا ، سأستخدم الآن الحافة المسطحة للشفرة للقيام بوضع جيد للأنسجة. لذلك أنا ببساطة ، سأنظر إلى الحافة وأتأرجح الأنسجة لأعلى ولأسفل فقط للتأكد من أن الحواف تصطف.

إذا لم يفعلوا ذلك ، كما تعلمون ، يمكن أن يبدو شيئا كهذا. من الواضح أنني أبالغ في الأمر ، لكن يمكنك أن ترى هنا أنه ليس مستقيما ضد النصل. لذلك أستمر في إجراء التعديلات حتى أشعر أنها مستقيمة بقدر ما أستطيع الحصول عليها.

أعتقد أن هذا جيد جدا. لذلك أنظر من ، من كل زاوية للتأكد من أن الأنسجة ستقطع مباشرة ضد الشفرة وأستخدم حافة الشفرة للإشارة إلى ذلك. لذلك أنا أنظر إلى الأعلى وأنظر من الجانب والأنسجة تبدو جيدة بالفعل.

لست مضطرا لإجراء العديد من التعديلات ، ولكن إذا فعلت ذلك ، فسأستخدم المقابض الموجودة في مؤخرة الرأس. ومن خلال تدوير تلك التعديلات إلى اليسار أو اليمين ، يمكنك أن ترى أنه يمكنك إجراء تعديلات دقيقة بهذه الطريقة. لكنها تبدو جيدة جدا.

الآن ، أنا ، أنا في الواقع أقوم بتطوير الأنسجة. إنه لم يقطع بعد لأنه ليس ضد الشفرة. الأنسجة مدمجة في الداخل في عمق OCT.

لذلك قد يستغرق الأمر عدة دقائق للوصول إلى الأنسجة. لا تريد أن تسير بسرعة كبيرة لأنه يمكن أن يلتقط OCT وأنسجتك ويكسرها ، لكنك أيضا لا تريد أن تسير ببطء شديد لأن الأمر قد يستغرق وقتا طويلا. هناك وظيفة واحدة لطيفة على هذا الجهاز حيث يمكنك القيام بتقليم في قسم أكثر سمكا ، مما سيسمح لك بالتحرك بشكل أسرع.

لذا أنا الآن في الواقع ، أنا أقوم بقطع OCT الآن ، لذلك أنا أبطئ قليلا. لذلك ما زلت لم أصل إلى الأنسجة بعد ، ولكن هذا هو الوقت الذي أقوم فيه بتقييم كيفية سير القسم. يمكن أن تتسبب الكثير من المتغيرات في تقسيم أنسجتك بشكل جيد أو أو سيء حقا.

ما أجده يحدث في أغلب الأحيان مع هذا التبريد هو أن الأنسجة في الواقع باردة جدا. لقد خفضت درجة الحرارة ، لكن لا يزال يبدو أن الجو بارد بعض الشيء. وما يحدث هو أن الشفرة سوف تثرثر من خلال الأنسجة أو من خلالها ومن خلال OCT.

لذا ستحصل على هذه الخطوط الصغيرة ، هذه الخطوط الأفقية من خلال OCT. ما أفعله هو أنني سآخذ إبهامي وسأقوم ببساطة بتسخين الحافة ، وتسخين OCT فقط عن طريق لمسها برفق ، وتحريك إبهامي ، ليس لفترة طويلة. وبعد ذلك عندما قمت بتقسيمها ، لاحظت أنها خرجت بشكل أفضل كثيرا وتوقفت الثرثرة.

إذن هذه هي أنواع الأشياء التي سأقوم بتقييمها قبل أن أصل إلى الأنسجة. لذلك لاحظت أنه عندما تمر الشفرة عبر الأنسجة ، هناك عقبة أو أو صدع في الواقع في OCT. لذا فإن أحد الأشياء التي أفعلها أولا هو تغيير الشفرة.

لست متأكدا من المدة التي استغرقتها هذه الشفرة هنا ومن استخدمها قبلي ، لذلك سأمضي قدما وأخرج شفرة جديدة. من الواضح أن هذه حادة جدا ، لذلك عليك توخي الحذر. لذلك سأقوم بضبط اللوحة المضادة للانقلاب وهناك برغي محمل بنابض لولبي في الجزء السفلي هنا عليك فقط الوصول إليه ويمكنك تحريكه للداخل أو الخارج.

لذلك تقدمت وقمت بتقسيم ما يكفي لأنني الآن في الأنسجة. ولسوء الحظ ، هناك صدع من خلال كتلة OCT ، والذي يحدث كثيرا وللأسف لا يمكنك التحكم فيه حقا ، ولكن هناك أشياء يمكنك القيام بها لإصلاحها. إذا كان الكراك قد مر عبر الأنسجة ، فعليك التخلص من العينة أو محاولة إنقاذ ما تستطيع.

في هذه الحالة ، يبدو أن الكراك فوق الأنسجة. لذا ما سأفعله هو أخذ شفرة حلاقة موجودة في التبريد. إنه مبرد.

وسأحاول فقط تقليم الجزء المتصدع ، الموجود في الجزء العلوي من كتلة OCT. لذا مرة أخرى ، سأستخدم إبهامي لتسخين وجه كتلة OCT. وبعد ذلك سأقوم بتقسيم ، وإذا كان بإمكانك رؤيته هنا ، فهو متصدع.

لذلك هناك خلعت القطعة بالمناديل ثم بقية OCT OCT التي رميتها للتو ، كان الجزء المتصدع. لذا ما سأفعله هو أنني سأحاول تقليم هذا الجزء المتصدع باستخدام شفرة حلاقة مبردة. يجب أن أذهب بشكل مستقيم للغاية ويجب أن أستخدم كلتا يدي وأضغط بالتساوي على الشفرة.

وسأقوم بهز الشفرة ذهابا وإيابا في OCT. لذلك أنا أتأرجح ذهابا وإيابا ، وأقطع ببطء في OCT. آمل أن أقوم بإزالة الجزء المتصدع.

حسنا ، سأقوم بتقليل إزالة هذا OCT الزائد. حسنا ، تبدو جيدة. سأقوم بعد ذلك بسحب الرأس قليلا لأنني قمت بإنشاء حواف يمكن أن تلتقط الشفرة ، وإذا حدث ذلك ، فقد يؤدي ذلك بالفعل إلى كسر OCT والأنسجة مما قد يفسد عينتي.

لذلك تراجعت ، لذلك سأحتاج إلى التقدم أكثر قليلا للعودة إلى الأنسجة وآمل أن أكون قد صححت الكراك. حسنا ، الآن أعود إلى الأنسجة. حسنا ، يبدو أنني قمت بتصحيحه.

لذلك لم يعد هناك أي شقوق في OCT ستجعل التقاط الأقسام أسهل كثيرا. لذا سأتقدم الآن إلى جزء الأنسجة الذي أهتم به. في الوقت الحالي ، أنا الآن أضرب السطح وأود الدخول إلى دماغ هذا الجنين.

هذه كبيرة بما يكفي لأنني أستطيع أن أرى بالفعل الهياكل التي أهتم بها. فشلت في ذكر أنني أستخدم هذه الفرش لتنظيف الشفرة بين كل قسم سألتقطه. هذا الكبير مخصص فقط لتنظيف المنطقة وإزالة OOC الزائد OCT.

أستخدم أيضا هذه الفرش الدقيقة لمعالجة القسم مقابل هذه اللوحة الباردة هنا لوضعه عندما ألتقطه في القسم. مرة أخرى ، يتم الاحتفاظ بها باردة ، لذلك لا يذوب OCT ويلتصق بالفرشاة. لذا لالتقاط الأنسجة ، سأقوم أولا بتسخين OCT والأنسجة بإبهامي.

وسآخذ إحدى هذه الشرائح التي قمت بتسميتها بالفعل. أحملها رأسا على عقب والجميع يفعل ذلك بشكل مختلف. لكن الطريقة التي أفعل بها ذلك هي أنني أحب أن أمسك بهذه الزاوية اليمنى العليا عندما تكون الشريحة متجهة لأسفل بيدي اليمنى.

ثم استخدم إبهامي الأيسر كنقطة محورية حتى أتمكن من النزول مباشرة على اللوحة والتقاط القسم. سوف يذوب OCT والأنسجة في الواقع ضد الشريحة وتتصاعد نفسها. لذا سأقوم أولا بتسخين المنديل بإبهامي ببطء ، وأمسك شريحتي ، وأمسك الزاوية اليمنى بيدي اليمنى ، وحرك اللوحة ، وخفضها لأسفل بشكل مستقيم ، واتركها تذوب.

سألقي نظرة على الأنسجة للتأكد من عدم وجود طيات أو فقاعات وتبدو جيدة. وسأستمر في القيام بذلك حتى أقوم بتقسيم الدماغ بأكمله. أنا الآن أنظر إلى الأقسام من خلال نطاق التشريح للتأكد من أنها ، أنها تبدو جيدة وأنها تفعل ذلك ، يمكنك أن ترى ، الدماغ الأمامي في الجزء العلوي من القسم وكلها تبدو لطيفة جدا.

يمكنك استخدام أقسام التبريد هذه لأشياء مثل التهجين في الموقع. نقوم أحيانا بعمل الأنسجة الأساسية ، بقع h و e. يمكنك أيضا إجراء التألق المناعي وكما تعلمون ، عدد من المقايسات من هذا القبيل.

بالنسبة لي على وجه الخصوص ، تم إصلاح هذه الأقسام ومعالجتها من أجل التهجين في الموقع. هذا ما سأفعله بعد ذلك.