Name: إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: تعلم إعداد خلايا Drosophila S2 للميكروسكوب الضوئي باستخدام طبقات زجاجية مغطاة بالليكتين. يُحسّن هذا البروتوكول التصاق الخلايا وتسطيحها لدراسة وظائف الجينات بدقة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل في جزء من المعهد الوطني للسرطان P30 CA23074 ، والجمعية الأميركية لأبحاث السرطان المؤسسية 74-001-31 غرانت ، وجامعة ل. من بوغ GI أريزونا (NCI / CA9506O NIH).

<ol><li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly%2C+dynamics%2C+and+positioning+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li>
<li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

للخلية حقل البيولوجيا ، فإن نظام مثالي للحفاظ على أن تكون غير مكلفة وسهلة التعامل معها ، وقابلة لمجموعة متنوعة من التقنيات. خلايا ذبابة الفاكهة S2 تلبية هذه الاحتياجات ، وهكذا أصبحت بسرعة هذا النظام خيارا بالنسبة لعدد متزايد من الخلايا مختبرات البيولوجيا. قدمنا ​​لمحة موجزة عن الأساليب لإعداد الخلايا S2 للفحص المجهري. فضيلة ملحوظ من خلايا S2 هو حقيقة أنها تنمو جيدا في جو طبيعي ودرجة حرارة الغرفة ، وبالتا...

<table><tbody><tr><td>خلايا S2</td><td>ATCC</td><td>CRL-1963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>خلايا S2</td><td>DGRC</td><td>رقم المخزون 6</td><td>&lt;a href=&quot;https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>خلايا S2</td><td>Invitrogen</td><td>R690-07</td><td></td></tr><tr><td>Sf900 II</td><td>Invitrogen</td><td>10902-096</td><td>وسط خالٍ من المصل</td></tr><tr><td>HyClone SFX-Insect</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>SH30278</td><td>وسط خالٍ من المصل</td></tr><tr><td>Insect-Xpress</td><td>BioWhittaker</td><td>12-730</td><td>وسط خالٍ من المصل</td></tr><tr><td>وسط Schneider&amp;rsquo;s S2</td><td>Invitrogen</td><td>11720-034</td><td>أضف 10% (تركيز نهائي) من مصل جنين البقر الخامل حرارياً لتحضير الوسط الكامل.</td></tr><tr><td>مصل جنين البقر</td><td>Invitrogen</td><td>10438026</td><td>خامل حرارياً</td></tr><tr><td>محلول مضاد حيوي بتركيز 100x</td><td>MP Biomedicals</td><td>91674049</td><td>يحتوي على البنسلين (10000 U/mL)،&lt;br/&gt;الستريبتومايسين (10000 &amp;#x03BC;g/mL)، و&lt;br/&gt;الأمفوتيريسين B (25 &amp;#x03BC;g/mL)</td></tr><tr><td>كونكانافالين A</td><td>MP Biomedicals</td><td>195283</td><td></td></tr><tr><td>فورمالدهيد</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714</td><td>محلول بتركيز 32%</td></tr><tr><td>ميثانول</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>9049</td><td>لامائي، درجة ACS</td></tr><tr><td>مناخل جزيئية</td><td>Acros Organics</td><td>19724</td><td>نوع 3A</td></tr></tbody></table>

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا s2 الميكروسكوب لايت

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

فإن النظام المثالي التجريبية تكون رخيصة وسهلة للحفاظ على ، قابلة لمجموعة متنوعة من التقنيات ، وسوف تكون معتمدة من قبل دراسات واسعة النطاق وقاعدة بيانات الجينوم التسلسل. مثقف خلايا ذبابة الفاكهة S2 ، نتاج نأت الأجنة 20-24 ساعة قديمة 1 ، تمتلك كل هذه الخصائص. وبالتالي ، فإن خلايا S2 هي غاية مناسبة تماما لتحليل العمليات الخلوية ، بما في ذلك اكتشاف الجينات ترميز المكونات الجزيئية لعملية أو آلية للاهتمام. ملامح من الخلايا التي هي الأكثر S2 المسؤولة عن فائدتها هي السهولة التي يتم الحفاظ عليها ، لحساسيتها بديعة المزدوج تقطعت بهم السبل التدخل بوساطة الحمض النووي الريبي (دي إس) ([رني) ، وقابلية الإستطراق لالمجهري مضان إما مباشرة أو ثابتة الخلايا. يمكن زراعة الخلايا S2 في مجموعة متنوعة من وسائل الإعلام ، بما في ذلك عدد من غير مكلفة وسائل الاعلام المتاحة تجاريا المصل الحرة ، كامل المعرفة ، 2. بالإضافة إلى ذلك ، أنها تنمو بشكل أمثل وبسرعة في 21-24 درجة مئوية ، ويمكن تربيتها في مجموعة متنوعة من الحاويات. خلافا لخلايا الثدييات والخلايا S2 لا تتطلب مناخا للوائح ، ولكن بدلا من ذلك بلاء حسنا مع الهواء العادي ، ويمكن أن يستمر حتى في قوارير مختومة. استكمالا للتخفيف من [رني في الخلايا S2 هو القدرة على تحليل الظواهر بسهولة تجريبيا ، الناجمة عن مرحلة أو مضان المجهري للخلايا الحية أو الثابتة. S2 الخلايا تنمو في الثقافة باعتبارها المونولاير واحد ولكن لا تعرض تثبيط للإتصال به. بدلا من ذلك ، تميل إلى الخلايا تنمو في مستعمرات كثيفة في الثقافات. في منخفض الكثافة ، والثقافات S2 نمت على الزجاج أو البلاستيك نسيج الثقافة المعالجة هي جولة وفضفاضة يعلق. ومع ذلك ، يمكن أن تكون خلايا من خلايا S2 تحسنت كثيرا حثها على نطاق واسع في زراعة تتسطح منهم لفترة وجيزة على السطح المطلي مع lectin ، كونكانافالين A (كونا) 3. ويمكن أيضا أن تكون الخلايا S2 transfected ستابلي مع علامات fluorescently الموسومة للهياكل التسمية أو العضيات الفائدة في الخلايا الحية أو الثابتة. ولذلك ، فإن السيناريو المعتاد لتحليل مجهري للخلايا هو هذا : يتم التعامل مع الأولى ، خلايا S2 (التي يمكن أن تمتلك الجينات المحورة للتعبير عن علامات الموسومة) بواسطة رني للقضاء على البروتين الهدف (ق). يمكن ضبط الوقت رني العلاج للسماح للاختلافات في البروتين بدوره على حركية وتقليل الصدمات خلية / الموت إذا كان الهدف هو بروتين مهم لبقاء. المقبل ، يتم نقل الخلايا المعالجة إلى صحن يحتوي على ساترة قبل المغلفة مع كونا للحث الخلايا على الانتشار والتقيد باحكام الزجاج. أخيرا ، يتم تصوير الخلايا مع اختيار الباحث من وسائط المجهري. S2 خلايا جيدة خاصة بالنسبة للدراسات التي تتطلب رؤية طويلة من الخلايا الحية لأن هذه الخلايا البقاء في صحة جيدة في درجة حرارة الغرفة العادية والغلاف الجوي.

ذبابة الفاكهة شنايدر (S2) الخلايا نظام شعبية متزايدة لاكتشاف وتحليل وظيفي من الجينات. هدفنا هو وصف بعض التقنيات التي تجعل الخلايا المجهرية S2 مثل هذا النظام أهمية متزايدة التجريبية.

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت

سيكون النظام التجريبي المثالي رخيص الثمن وسهل الصيانة، وقابلاً للتطبيق مع مجموعة متنوعة من التقنيات، ومدعوماً بأدبيات علمية واسعة...

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف كيفية تحضير خلايا Drosophila S2 للفحص بالمجهر الضوئي. ويتم تحقيق ذلك أولاً من خلال تحضير أطباق استنبات ذات قاع زجاجي، ثم تتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في طلاء القاع الزجاجي ببروتين lectin conval.أ لتعزيز التصاق وتسطح خلايا S two. وتتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في إضافة وسط الزرع وخلايا S two إلى طبق الزرع. والخطوة النهائية من الإجراء هي تثبيت خلايا S two في طبق الزرع وصبغها مناعياً.في النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر تموضع البروتينات المستهدفة الموسومة بـ fluoro four أو الموسومة مناعيًا من خلال المجهر الفلوري لخلايا S two الحية أو المثبتة على التوالي. مرحبًا، أنا جوي كلوب من مختبر غريغ روجرز في قسم بيولوجيا الخلية والتشريح بجامعة أريزونا. وأنا جون ناي، من مختبر روجرز أيضًا.وأنا دان باستر أيضاً، من مختبر غريغ روجرز. سنعرض لكم اليوم إجراءً لتحضير خلايا Drosophila S2 للفحص بالمجهر الضوئي.نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة تنظيم التضاعف المركزي في Drosophila من خلال دراسة التغيرات في عدد وبنية الجسم المركزي بعد حذف أو الإفراط في التعبير عن البروتينات التنظيمية المهمة. لذا، فلنبدأ. نستخدم أطباق بتري القياسية بقطر 35 مليمتر لصنع أطباقنا ذات القاعدة الزجاجية.تحافظ هذه الأطباق ذات القاعدة الزجاجية على الخلايا في حالة مشابهة جداً لظروف زراعتها الطبيعية، كما تسمح بفحص الخلايا الحية من خلال زجاج مخصص للمجهريات. ولتجميع الأطباق ذات القاعدة الزجاجية، يُستخدم سطح مغطى بالشريط اللاصق لصندوق من البوليستيرين (styrofoam) ذو جدران سميكة كسطح للثقب. ضع النصف السفلي من طبق بتري بقطر 35 مليمتر على سطح الثقب بحيث يكون الجانب السفلي للطبق مواجهاً لصندوق البوليستيرين، وأثناء الإمساك بجوانب الطبق بإحكام، استخدم مثقاباً يدوياً مع ريشة ثقب مسطحة (spade drill bit) بحجم ثلاثة أرباع البوصة لثقب فتحة عبر الطبق.بعد الانتهاء من ثقب جميع الأطباق، استخدم ريشة مثقاب صنفرة مخروطية الشكل ذات حبيبات خشنة وقطر مماثل تقريبًا لقطر ريشة الثقب المسطحة لتنعيم الحواف الخارجية للثقوب. ضع المثقاب الكهربائي على جانبه بحيث تكون الريشة بارزة خارج حافة الطاولة. قم بتثبيت المثقاب في مكانه عن طريق وضع شيء ثقيل ولكن مرن فوقه، مثل كيس بلاستيكي متين يحتوي على 10 kilograms من الرمل.استخدم زر القفل لإبقاء المثقاب يعمل باستمرار. قم بتنعيم حافة الطبق عن طريق إمساكه وتحريكه مقابل ريشة التجليخ لإزالة الحواف الخشنة للثقب الجديد. بعد تنعيم الحافة الخارجية للثقوب، ضع قواعد الأطباق في دورق كبير واشطفها عدة مرات بالماء المقطر.سيؤدي ذلك إلى إزالة القطع الصغيرة السائبة من البلاستيك أو البوليسترين التي ستطفو بعد ذلك. ضع قواعد الأطباق لتجف. وبمجرد جفاف الأطباق، قم بتحضير الغراء Sard 180 4.امزج الراتنج وعامل المعالجة بنسبة وزنية 10 إلى 1 وحركهما جيداً. ضع دائرة صغيرة من الغراء حول الثقب المحفور على السطح الخارجي لكل طبق. بعد ذلك، ضع شريحة غطاء زجاجية فوق الثقب بحيث تلامس الغراء.يجب أن تكون شريحة الغطاء أكبر بنحو ملليمتر واحد على الأقل من الثقب الموجود في طبق بتري وأصغر من قطر الطبق. كما ينبغي أن تستقر شريحة الغطاء على الطبق بشكل سلس ومستوٍ. الآن، ضع الأطباق جانباً.ضع الجانب السفلي للأعلى للتجفيف. قد تستغرق هذه العملية يوماً أو أكثر في درجة حرارة الغرفة، ولكن يمكن زيادة معدل التصلب عن طريق وضع الأطباق في حضانة دافئة. بمجرد جفاف الأطباق، يمكن طلاؤها بـ lectin conent A أو con A. نحن نستخدم con A لأن خلايا S two التي يتم تثبيتها على شرائح غطاء مطلية بـ con A ستتسطح بشكل كبير لتصبح عينات ممتازة للفحص المجهري.لطلاء طبق ذو قاعدة زجاجية، قم بتوزيع 10 microliters من محلول conne على الجانب العلوي للزجاج. وبعد الجفاف، قم بتعقيم الطبق وغطائه باستخدام الأشعة فوق البنفسجية UV. وفي غطاء زراعة الأنسجة، قم بتدوير القطع بحيث تكون أسطحها الداخلية مواجهة مباشرة لمصباح UV، ثم قم بتشغيل ضوء التعقيم UV لمدة 45 minutes على الأقل.يمكن استزراع خلايا S two في أوساط زراعية متنوعة. ولأغراضنا، نستخدم وسط in VITROGEN SF 902. ولتحضير خلايا S two المعالجة بتقنية RNAi للفحص المجهري، أعد تعليق الخلايا برفق وانقلها إلى طبق زجاجي القاع مطلي بـ conne يحتوي على 2 mL من الوسط؛ حيث ستلتصق الخلايا السليمة التي تلامس الغطاء الزجاجي المطلي بـ conne به بقوة وتبدأ في الانتشار.من المفترض أن تظهر هذه العملية بعد حوالي 15 دقيقة، وأن تكتمل في غضون 45 دقيقة إلى ساعة. نظرًا لأن خلايا S two يمكن الحفاظ عليها بسهولة في ظل ظروف درجة الحرارة والجو المعتادة في المختبر، فلا حاجة إلى ظروف أو معدات خاصة عند وضع الخلايا على المجهر لمنع الجفاف؛ فقط حافظ على وجود كمية كافية من الوسط في الطبق الموجود على المجهر. كما يمكن إجراء التصوير الحي لخلايا S two لفترات طويلة.تقتصر مدة تشغيل هذه التجارب فقط على المشكلات المعتادة المتعلقة بالتبييض الضوئي والسمية الضوئية. يمكن تثبيت خلايا S two إما على طبق ذي قاعدة زجاجية أو على شريحة غطاء عادية. ولكن في هذا الفيديو، سنقوم بشرح عملية التثبيت والصبغ المناعي في طبق ذي قاعدة زجاجية.يُعد الميثانول والفورمالديهايد من المثبتات الشائعة لخلايا S two؛ ولتثبيت الخلايا باستخدام الميثانول، قم أولاً بتبريد حوالي 300 milliliters من الميثانول اللامائي في دورق زجاجي سعة لتر واحد مغطى، داخل مجمد مضاد للانفجار عند درجة حرارة -20 °C. وعندما يبرد الميثانول، أخرجه من المجمد. قم بإزالة الوسط بسرعة من الطبق ذو القاعدة الزجاجية، ثم اغمر الطبق بسرعة في الميثانول.أعد الكأس الذي يحتوي على الطبق بسرعة إلى المجمد وثبّت الخلايا لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة. بعد مرور 10 إلى 15 دقيقة، أخرج الطبق من الكأس، وصُب أي كمية متبقية من الميثانول، ثم أعد ترطيب الخلايا. وبإضافة PBST، تصبح الخلايا الآن جاهزة لإجراءات الصبغ القياسية كما سيتم توضيحها لاحقاً في عملية تثبيت الخلايا.نستخدم الفورمالديهايد بنسبة 10% مع محلول منظم. ويُستخدم هذا التركيز المرتفع نسبياً من الفورمالديهايد لأن خلايا S two تفتقر إلى الخيوط المتوسطة السيتوبلازمية، والتي من شأنها أن تساعد في الحفاظ على مورفولوجيا الخلايا وتنظيمها أثناء عملية التثبيت. ثبّت الخلايا في 10% formaldehyde لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة.عند اكتمال عملية التثبيت، قم بسكب الفورمالديهايد في كأس نفايات واغسل الخلايا المثبتة بثلاث غسلات قصيرة من PBST. ابدأ إجراء التلوين المناعي بإضافة 1 ml من محلول الحجب إلى الخلايا المثبتة لمدة 15 دقيقة. نستخدم بشكل روتيني مصل ماعز طبيعي بتركيز 5% في PBST.قم بسكب محلول الحجب وأضف الجسم المضاد الأولي مباشرة على الخلايا. أعد غطاء طبق بتري إلى مكانه لمنع تبخر محلول الجسم المضاد، واترك الجسم المضاد يحضن مع الخلايا لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد مرور 30 دقيقة، قم بإزالة محلول الجسم المضاد الأولي.استخدم ماصة نقل لإضافة 2 milliliters من PBST إلى الطبق وانتظر لمدة خمس دقائق قبل استبدال PBST. بعد ذلك، اغسل ثلاث مرات باستخدام PBST. بعد الغسلة النهائية، أضف 100 microliters من الجسم المضاد الثانوي مباشرة فوق الخلايا.أعد غطاء طبق بتري إلى مكانه واترك الأجسام المضادة تتحضن مع الخلايا لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. وعند انتهاء الـ 30 دقيقة، أزل الأجسام المضادة الثانوية وقم بإجراء ثلاث عمليات غسيل بمحلول PBST، مدة كل منها خمس دقائق.وأخيراً، أضف بضع قطرات من وسيط التثبيت مباشرة على الخلايا. أعد غطاء طبق Petri، وإذا لزم الأمر، خزن الطبق عند درجة حرارة 4 °C في الظلام. تظهر هنا صور تمثيلية باستخدام تباين الطور لخلايا S two بعد زراعتها في طبق زجاجي قاعدي غير مطلي وآخر مطلي، حيث تشير الأرقام إلى عدد الدقائق بعد الزراعة.يظهر التسطح الذاتي بحلول الدقيقة 15 ويكون مكتملاً أساساً بحلول الدقيقة 60. لاحظ أن الخلايا تصبح داكنة في الطور بينما تتسطح على شريحة الغطاء المطلية. في هذه الصورة المكبرة للخلايا الملتصقة، تظهر بوضوح حوافها الممتدة والمسطحة التي يشير إليها رأس السهم.يمكن ترانسفكشن خلايا S two للتعبير عن بروتينات موسومة بفلوروفورات تحدد تراكيب ذات أهمية في الخلايا المثبتة أو الحية. في هذا المثال، تم إجراء ترانسفكشن عابر لخلايا S two باستخدام بناء اندماجي يتكون من nucleo foin، وهو وسم للنواة مدمج مع الفلوروفور EGFP. تم زرع هذه الخلايا في طبق زجاجي القاع مطلي بـ conna، ثم تم تصويرها باستخدام مجهر تباين التداخل التفاضلي (DIC) والمجهر الفلوري فوق البؤري (epi fluorescence).يمكن أيضاً تثبيت خلايا S two المعالجة بـ RNAi وتحليلها عن طريق التألق المناعي. تُظهر هذه الصور خلايا S two مثبتة ومصبوغة مناعياً للمؤشر المركزي PLP الموضح باللون الأخضر، والأنيبيبات الدقيقة الموضحة باللون الأحمر، بالإضافة إلى صبغ HOEK للكروموسومات الموضحة باللون الأزرق. قبل التثبيت والصبغ المناعي، خضعت الخلايا لمعالجة لمدة أربعة أيام باستخدام إما مجموعة ضابطة، أو RNAi، أو RNAi لتقليل تعبير بروتين NCDA KINESIN الذي يعزز تركيز قطب المغزل.أدى العلاج بـ NCD RNAi إلى ظهور خلايا ذات أقطاب مغزلية متباعدة ومغازل غير منظمة. عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر توخي الحذر الشديد عند ثقب الفتحات في أطباق الزرع. هذا كل شيء.شكراً للمشاهدة، مع تمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

preparation-of-drosophila-s2-cells-for-light-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

ويقدم طريقة بسيطة وغير مكلفة وفعالة للتحضير للأجنة ذبابة الفاكهة تعيش التصوير التحليل. بروتوكول يتيح لنا الرطوبة والغاز والصرف لا ضغط الجنين ذبابة الفاكهة. هذا الأسلوب هو مناسبة لGFP القائم على التصوير المباشر للأجنة ذبابة الفاكهة باستخدام stereomicroscope أو تستقيم المجهر المركب.

لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق

نحن تصف عملية لترسيخ وتثبيت ، sectioning ، والتصوير من مرحلة...

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

إعداد وتطوير الكبار ذبابة الفاكهة الأمخاخ والشبكية للتصوير لايف

نحن تصف الإجراء الذي قام...

التصور الجهاز العصبي الجنينية في جبل لالجامع ذبابة الفاكهة الأجنة

إعداد الكبار ذبابة الفاكهة لعيون Sectioning رقيقة والتحليل المجهري

خلايا ذبابة الفاكهة S2 والخلايا العصبية مثقف هي أنظمة كبيرة للتصوير النقل عضية بالمحركات في الجسم الحي. نحن هنا تصف بروتوكولات مفصلة لزراعة كل من أنواع الخلايا، والتصوير، وتحليل النقل.

النقل عضية في مثقف ذبابة الفاكهة الخلايا: S2 الخط الخليوي والخلايا العصبية الابتدائية.

هذا العمل تفاصيل طريقة المناعية القياسية لتصور توقعات الخلايا العصبية الحركية من أواخر المرحلة 16 الأجنة ميلانوجاستر ذبابة الفاكهة . إعداد فيليه من الأجنة ثابتة ملطخة الأجسام المضادة فاسي يوفر أداة قوية لتوصيف الجينات المطلوبة لمحور محور عصبي باثفيندينغ والاعتراف الهدف خلال التنمية العصبية.

التصور من محور الإسقاط نمط من الخلايا العصبية المحرك الجنينية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

تحليل وزارة شؤون المرأة طريقة فعالة للمساعدة في تحديد الأنواع أو التمييز المظهرية. هذا البروتوكول يصف الأساليب لدراسة التفاصيل المورفولوجية الخاصة ثلاثة أنواع تمثيلية من الكائنات الحية وستطبق على نطاق واسع لدراسة ملامح كثيرة العضوي وأنواع الأنسجة.

إعداد الكائنات الحية بدائية وحقيقية النواة باستخدام التجفيف الكيميائية للتحليل المورفولوجي في المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (SEM)

يتم تقديمها هنا هو بروتوكول لmicroinject وفي وقت واحد صورة الأجنة Drosophila متعددة خلال النمو الجنيني باستخدام لوحة المستندة إلى، صورة عالية المحتوى.

Drosophila إعداد الجنين و Microinjection لالمجهر الخلية لايف تنفيذها باستخدام محلل المحتوى العالي الآلي

المجهر الفلوري القائم على الورقة الخفيفة هو الأداة الأكثر قيمة في علم الأحياء التنموي. ومن القضايا الرئيسية في الدراسات المقارنة التباين المحيط. يصف بروتوكولنا إطارا تجريبيا للتصوير الحي المتزامن لعينات متعددة ، وبالتالي ، يعالج هذه المشكلة بشكل نشط.

التصوير الحي المتزامن للأجنة الحشرية المتعددة في مجاهر فلورسينس ورقة الضوء المستندة إلى غرفة العينة

هنا ، يتم تقديم بروتوكول لتنفيذ الفحص المجهري التوسعي في أجنة ذبابة الفاكهة المبكرة لتحقيق تصوير فائق الدقة باستخدام مجهر متحد البؤر تقليدي للمسح بالليزر.

استخدام الفحص المجهري التوسعي لتكبير أجنة ذبابة الفاكهة المثبتة بالكامل جسديا للحصول على تصوير فائق الدقة

تعلم إعداد خلايا Drosophila S2 للميكروسكوب الضوئي باستخدام طبقات زجاجية مغطاة بالليكتين. يُحسّن هذا البروتوكول التصاق الخلايا وتسطيحها لدراسة وظائف الجينات بدقة.

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت

استكشف المزيد من الفيديوهات