زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج دقيق وطريقة سهلة التنفيذ لبحث تطور اعتلال الأوعية الدموية الناجم عن الزرع. ويتم تحقيق ذلك باستخدام مزيج من سلالات PVG و CI. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في استئصال الشريان الأبهر من المتبرع.

تتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في تحضير المستقبل. أما الخطوة النهائية من الإجراء فهي إجراء مفاغرة للشريان الأبهر المتبرع مع الشريان الأبهر للمستقبل. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر تكوين الغشاء الباطن الجديد باستخدام علم الأمراض النسيجي.

مرحباً، أنا سونيا شتيفل، أستاذة في مناعة الزرع في مختبر TS Eye في المركز الجامعي للقلب في هامبورغ، ألمانيا. وأنا مانيش دوبوف، أيضاً من مختبر TS Eye.

يهتم مختبري بمناعة الزرع. سنقدم لكم في هذا الفيديو نموذج زراعة الأبهر في الموضع الأصلي، وهو نموذج سهل ومعتمد لدراسة تطور اعتلال الأوعية الدموية الناجم عن الزرع في الفئران. نحن نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لاستقصاء الرفض المزمن في عمليات زراعة القلب والأوعية الدموية.

في نموذج زراعة الأبهر في الموقع الأصلي (Orthotopic)، يمكن تقييم الأبهر نسيجيًا بسهولة. بالإضافة إلى ذلك، فإن زراعة الوريد البابوي (PVG) في نموذج الإصابة القلبية (CI) مفيدة بشكل خاص لدراسات اعتلال الأوعية الدموية الناتج عن الزرع؛ نظرًا لأن الرفض الوعائي الحاد لا يشكل عامل تداخل رئيسي، كما أن تطور اعتلال الأوعية الدموية يشبه النتائج الملاحظة في العيادات.

لنبدأ الآن. المتبرع المستخدم في عملية زراعة الأبهر في الموضع الأصلي هذه هو جرذ من سلالة PVG يزن ما بين 250 إلى 300 جرام تقريبًا. بعد تخدير الحيوان، قم بحلاقة الشعر من منطقتي البطن والصدر.

ضع الجرذ على ظهره وضع قناعاً للوجه فوق أنفه وفمه. وللحفاظ على التخدير، قم بتطهير المنطقة البطنية والصدرية على نطاق واسع باستخدام Provo iodine، يليه ethanol 80%. بعد ذلك، تحقق من ردود أفعال الحيوان عن طريق قرص قدميه الخلفيتين.

للتأكد من تخدير الجرذ بشكل كافٍ. يتم تفريغ دم الجرذ عن طريق فتح البطن وعمل فتحة في الأبهر البطني. افتح الصدر بعناية للعثور على الأبهر الصدري النازل.

قم بتشريح الأبهر الصدري من الأنسجة المحيطة، مثل الأعصاب الدهنية والمريء. استخرج قطعة بطول 1.5 سنتيمتر من الأبهر باستخدام مقص acuta دون إلحاق أي ضرر بأنسجة الأبهر. قم بتروية الطعم الأبهري جيداً بمحلول ملحي بارد واحفظ الطعم عند درجة حرارة أربع درجات Celsius.

يكون الحيوان المستقبل في عملية زراعة الأبهر في الموقع التشريحي الأصلي جرذًا من سلالة A CI يزن ما بين 250 إلى 300 جرام تقريبًا. لبدء هذا الإجراء، يتم حلق منطقة البطن للجرذ المخدر ووضع مرهم للعين لمنع جفاف العينين أثناء التخدير. يوضع الجرذ على ظهره ويوضع قناع وجه فوق أنفه وفمه للحفاظ على التخدير.

بعد ذلك، قم بتطهير منطقة البطن باستخدام اليود، يليه الإيثانول بتركيز 80%. وبعد قرص القدمين الخلفيتين للتأكد من تخدير الجرذ بشكل كافٍ، افتح البطن عن طريق إجراء شق جراحي في خط الوسط وفصل الجلد والعضلات. خطوتان.

بمجرد فتح البطن، ضع الأمعاء في القفاز المبلل بالمحلول الملحي. اطوِ القفاز حول الأمعاء لمنع فقدان الرطوبة. ثم قم بإزالة الأنسجة الدهنية التي تغطي الشريان الأبهر البطني.

قم بتشريح الشريان الأبهر من المنطقة تحت الكلوية وصولاً إلى التفرع، مع الحرص على عدم إتلاف فروع الأوعية الدموية. إذا لزم الأمر، قم بربط فروع الشريان الأبهر بعد الانتهاء من تشريحه. أولاً، استخدم ملقط جراحة مجهرية على الجزء تحت الكلوي من الشريان الأبهر لإيقاف تدفق الدم.

ضع بعد ذلك ملقطاً ثانياً بالقرب من تفرع الأبهر. والآن وبعدما تم إيقاف تدفق الدم، قم بإزالة قطعة قصيرة من الأبهر. ثم أحضر طعم الأبهر المانح الذي تم حفظه في محلول ملحي 0.9% على الثلج.

قم بتقصيرها إلى الطول المناسب ووضعها في الفجوة الموجودة في الأبهر. صِل الأبهر المانح بالأبهر المستقبل عن طريق إجراء غرز متصلة من مادة البرولين قياس 8-0، بدءاً من المفاغرة الطرفية القحفية. وعند الانتهاء من المفاغرة الطرفية القاصية، افتح الملقط القاصي بعناية.

بعد ذلك، افتح الملقط القحفي بعناية. يجب أن يكون هناك نبض مرئي عند الطرف القاصي للشريان الأورطي. الآن قم بإعادة الأمعاء إلى البطن واغسل التجويف البطني بمحلول ملحي معقم ومسخن مسبقاً.

أغلق طبقة العضلات في جدار البطن باستخدام غرز Prolene متصلة بقياس 6-0. بعد ذلك، استخدم غرز Prolene متصلة بقياس 5-0 لإغلاق الجلد بينما لا يزال الجرذ تحت تأثير التخدير. احقن 4-5 mg/kg من carprofen تحت الجلد.

أعد الحيوان إلى قفصه. أضف الميثيمازول إلى مياه الشرب كمسكن للألم لمدة ثلاثة أيام. ما بعد الزرع.

سيتم عرض نتائج الفحص النسيجي المرضي بعد 120 يوماً باستخدام المجهر النسيجي الخاص بنا. ستظهر الصور بوضوح تطور اعتلال الأوعية الدموية في العضو المزروع. كما سيتم تسليط الضوء على تضيق اللمعة المتطور من خلال رسوم متحركة حاسوبية.

لقد عرضنا لكم للتو كيفية إجراء عملية زرع الأبهر ذاتي الموضع في الجرذان. كما أثبتنا النجاح في تطوير اعتلال وعائي بعد الزرع بعد مرور 120 يوماً باستخدام الفحص النسيجي المرضي. تتيح هذه الطريقة استقصاء التأثيرات الأولية للأدوية على الاعتلال الوعائي المزمن للطعم الخيفي.