موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 5:15 دقيقة • April 30th, 2023
- للبدء ، ضع الجانب البطني للأسماك المخدرة لأعلى في شق في إسفنجة مبللة. أدخل القطب الموجب في خط الوسط للسمكة على مستوى الشرايين المنتفخة. بعد ذلك ، أدخل القطب السالب أسفل البطين و 0.5 إلى 1 ملليمتر على يسار خط الوسط لإنشاء رصاص ثنائي القطب يمكن من خلاله قياس الاختلافات في الجهد الكهربائي. أخيرا ، أدخل القطب المرجعي بالقرب من منطقة الشرج لتأريض الإشارة الكهربائية.
ابدأ التسجيل ، وبعد وقت قصير ، راجع التتبع للتأكد من استيفاء أربعة معايير. يجب أن تكون جميع أشكال الموجة مرئية ومتميزة عن بعضها البعض. يجب أن تكون الموجة P ، التي تمثل إزالة الاستقطاب الأذيني ، موجبة. يجب أن يكون المجموع الصافي لموجات Q و R و S ، والذي يمثل إزالة الاستقطاب البطيني ، موجبا. وأخيرا ، يجب أن تكون الموجة T ، التي تمثل إعادة الاستقطاب الأذيني ، موجبة. إذا لم يتم استيفاء المعايير ، فاضبط الأقطاب الكهربائية حتى يتم تسجيل التتبع المناسب.
بعد التسجيل ، أيقظ السمكة عن طريق غمرها في ماء مؤكسج ورش الماء فوق الخياشيم حتى تبدأ الخياشيم أو الأسماك في التحرك بانتظام. في المثال ، سنقوم بإجراء تخطيط كهربية القلب السطحي على سمكة الزرد البالغة.
- في يوم التجربة ، انقل الزرد من الحوض إلى المختبر. لإعداد نظام تسجيل تخطيط القلب في الجسم الحي ، قم بتوصيل القطع الأساسية من المعدات وأدخل الأقطاب الكهربائية الثلاثة المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ المرمزة بالألوان لسلك تخطيط القلب في بوابات الوصول الثلاثة المتطابقة بالألوان لمكبر الصوت. لتحريض التخدير من المستوى 4 ، اغمر سمكة الزرد البالغة في طبق يحتوي على محلول من التخدير بأقل تركيزات محددة مسبقا معتمدة من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسي.
بمجرد أن تحافظ سمكة الزرد على مستوى التخدير لمدة ثلاث ثوان ، استخدم زوجا من الملقط الحاد لنقل السمكة على الفور إلى إسفنجة رطبة مع سطح بطني شقي لوضع أقطاب تخطيط القلب الثلاثة. أدخل القطب الموجب برفق في خط الوسط البطني على مستوى الشرايين المنتفخة من 1 إلى 2 ملم فوق خط وهمي يربط بين الحافتين السفليتين للشعيرات.
ضع القطب السالب ذيليا و 0.5 إلى 1 ملليمتر يسار جانبيا إلى القطب الموجب على مسافة أكبر من الحد الأقصى للطول القمي القاعدي لبطين الزرد البالغ. ثم ضع القطب المرجعي ذيليا بالقرب من منطقة الشرج. لتسجيل تخطيط القلب، ابدأ النظام وافتح برنامج الحصول على بيانات تخطيط القلب. حدد الإعداد المطلوب من القوائم المنسدلة للنطاق والتمرير المنخفض والتمرير العالي.
اضغط على ابدأ لبدء تسجيل مخطط كهربية القلب المستمر الخالي من الفجوات بمعدل أخذ عينات يبلغ 1 كيلو هرتز. لتحسين موضع الرصاص للحصول على أقصى نسبة إشارة إلى ضوضاء ، اضغط على إيقاف لإيقاف التسجيل ومراجعة التتبع بعد فترة وجيزة من محاولة التسجيل الأولى لكل قلب. إذا كان من المتوقع أن يكون مخطط كهربية القلب طبيعيا ، فتأكد من أن جميع أشكال موجات تخطيط القلب مميزة ومرئية بسهولة وأن الموجة P ، ومركب QRS الصافي ، والموجة T كلها موجبة.
- الخطوة الوحيدة الأكثر أهمية هي تحديد موضع الرصاص لزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء. قم بتطبيق جميع معايير التحقق الأربعة بعد أول محاولة لتسجيل تخطيط القلب لكل سمكة للحصول على التغذية الراجعة الصحيحة.
- إذا كان من المتوقع حدوث مخطط كهربية القلب بشكل طبيعي ، فقم بتغيير موضع الأقطاب الكهربائية حسب الضرورة حتى يتم استيفاء جميع معايير التحقق الأربعة هذه. إذا كان من المتوقع وجود موجة T عادية ولكن الموجة T صغيرة جدا ، فقم بتغيير موضع الأقطاب الكهربائية لزيادة سعة الموجة T. استأنف تسجيل تخطيط القلب بعد تحسين وضع الرصاص مع حفظ عمليات مسح مخطط كهربية القلب للتحليل اللاحق.
في نهاية جلسة تسجيل تخطيط القلب ، قم بإزالة الأقطاب الكهربائية بعناية دون إصابة الأسماك. في دراسات البقاء على قيد الحياة ، انقل الأسماك إلى مياه الأسماك العذبة المؤكسجة الخالية من التريكيين. يرجى ملاحظة أنه في هذا الفيديو لتسهيل مشاهدة القراء لتعافي الأسماك من التخدير ، يتم إيقاف الأكسجين.
لتسهيل التعافي من التخدير في دراسات البقاء على قيد الحياة ، استخدم ماصة باستور لرش الماء بقوة فوق الخياشيم حتى تستأنف الأسماك حركة الخياشيم المنتظمة أو السباحة. ثم راقب الأسماك للشفاء التام من التخدير قبل إعادة الأسماك إلى الحوض. تعتبر السمكة متعافة تماما من التخدير عندما يمكنها السباحة في وضع مستقيم لمدة 5 ثوان على الأقل.