موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:26 دقيقة • April 30th, 2023
- اسمح لذبابة الفاكهة بوضع البيض طوال الليل على طبق يحتوي على أجار مكمل بعصير العنب لتصور البيض ومغطى بالخميرة لتشجيع الذباب على التزاوج ووضع البيض. لإزالة البيض ، أضف الماء المقطر إلى الطبق وامسح السطح برفق بفرشاة الرسم. ثم يسكب المزيج من خلال شبكة نايلون توضع في جلبة بلاستيكية لجمع البيض. انقع البيض في جولتين من المبيض بنسبة 7٪ لإزالة المشيمة ، أو الطبقة الخارجية الواقية ، من الجنين. هذه العملية تسمى dechorionation.
البيض عالق الآن على جانب الجلبة. اغسلها ثلاث مرات بالماء لإزالة المبيض. أخيرا ، استخدم فرشاة الرسم لنقل البيض من الجلبة إلى القوارير لمواصلة التطوير أو للاستخدام الفوري في التجربة. في بروتوكول المثال ، سنقوم بجمع وإزالة بيض ذبابة الفاكهة في ظل ظروف معقمة لتربية الذباب باستخدام ميكروبات محددة.
- ضع شبكة من النايلون في جلبة بلاستيكية لتحضير المنخل لجمع البيض. إذا تم استخدام نفس الذباب في اليوم التالي ، فقم بنقله على الفور إلى قفص جديد يحتوي على أطباق أجار عصير العنب الطازج. يحتوي طبق عصير العنب في القفص السابق على بيض ذبابة الفاكهة. قم بإزالة الذباب الميت بفرشاة رسم نظيفة ، وتوخي الحذر من تفتيت الأجار. اشطف طبق الأجار بالماء المقطر وادهن البيض برفق من سطح الأجار ثم اسكب الملاط فوق الشبكة لجمع البيض.
قم بتعقيم خزانة السلامة الحيوية بنسبة 70٪ من الإيثانول ثم قم بتشغيل ضوء الأشعة فوق البنفسجية. رش جميع الإمدادات غير البيولوجية بنسبة 70٪ من الإيثانول وضعها على الفور في خزانة السلامة الحيوية ، ثم قم بتعقيمها بالأشعة فوق البنفسجية.
- من الأهمية بمكان التأكد من ممارسة تقنية التعقيم الجيدة عند العمل داخل أو عند إضافة أو إزالة مواد جديدة إلى خزانة السلامة الحيوية.
- انقل البطانة مع البيض إلى كوب عينة سعة 120 مل واسكب ببطء 90 مل من محلول هيبوكلوريت الصوديوم 0.6٪ ، أو 7٪ مبيض ، في الجلبة ، أسفل الحافة مباشرة. باستخدام الملقط ، حرك الجلبة بشكل دوري لأعلى ولأسفل في المحلول لإعادة تعليق البيض. انقل البطانة مباشرة إلى كوب عينة ثان مملوء مسبقا ب 90 مل من المبيض.
في نهاية علاج التبييض الثاني ، يجب أن يبدأ البيض في الالتصاق بجوانب البطانة. تخلص من المبيض واشطف الجلبة تماما بالماء المعقم. مرة أخرى ، استخدم الملقط لإعادة تعليق البيضة عدة مرات أثناء كل غسلة. بحلول نهاية الغسيل الثالث ، يجب ربط معظم البيض بجانب البطانة.
باستخدام فرشاة رسم معقمة ، انقل البيض من جانب الجلبة إلى النظام الغذائي المعقم. اترك الأغطية فضفاضة للسماح للأكسجين بالدخول إلى الأنبوب. سيكون البيض المنقول مرئيا على سطح النظام الغذائي.