ذبابة الفاكهة في الجسم الحي تصوير الكالسيوم: طريقة للتصوير الوظيفي للنشاط العصبي

- لإجراء تصوير الكالسيوم في الجسم الحي في ذبابة الفاكهة الجهاز العصبي ، استهدف التعبير عن مؤشر الكالسيوم المشفر وراثيا ، مثل GCaMP ، للخلايا العصبية ذات الأهمية. عندما تطلق الخلايا العصبية جهد فعل ، يؤدي إزالة الاستقطاب السريع للغشاء إلى فتح قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم خارج الخلية إلى الخلية.

GCaMP هو بروتين اندماج يتم فيه تعديل البروتين الفلوري الأخضر المعزز ، أو EGFP ، ودمجه في جزء M13 من السلسلة الخفيفة للميوسين في الطرف N ، والبروتين المرتبط بالكالسيوم ، كالمودولين ، في الطرف C. يرتبط الكالسيوم بالكالمودولين ، ويؤدي إلى تغييرات في التشكل في GCaMP ، مما يتسبب في زيادة مضان البروتين.

لتصوير التغييرات في مضان GCaMP كبديل للنشاط العصبي في الجسم الحي ، قم بتعريض منطقة الجهاز العصبي بنشاط متوقع. بعد ذلك ، استخدم مجهر الفلورسنت الذي يمكنه التقاط ديناميكيات GCaMP ومجهز بإعداد توصيل التحفيز. قم بتوصيل المنبه ، على سبيل المثال ، رائحة ، أثناء تسجيل مضان GCaMP في الخلايا العصبية المستجيبة.

في بروتوكول المثال ، سنرى التصوير الوظيفي GCaMP يستخدم لتصور الاستجابات في أجسام الفطر في الدماغ أثناء التعلم الترابطي الشمي.

- لتصور مؤشرات الكالسيوم المستندة إلى GFP ، قم بضبط ليزر مجهر متعدد الفوتون المجهز بليزر الأشعة تحت الحمراء وهدف الغمر في الماء ، مثبت على ط