JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 2:54 د • April 30th, 2023
- للبدء ، انقل بعض الأجنة برفق إلى طبق بتري يحتوي على وسط جنيني. الآن امسك المشيمة بالملقط وقم بتمزيق ملقط آخر.
بعد ذلك ، ادفع الجنين برفق من خلال المسيل للدموع. تؤدي إزالة المشيمة من الجنين إلى تسريع نموه وحركته. للتخلص من الحطام ، انقل الأجنة إلى طبق بتري آخر يحتوي على وسط جنين باستخدام ماصة باستور.
ضع طبق بتري في حاضنة ، واترك الأجنة تنمو عند 28 درجة مئوية. اضبط مرحلة المجهر المملوء بالماء المضيء على 28 درجة مئوية قبل التجربة لتجنب أي انحرافات مرتبطة بدرجة الحرارة في سلوك اليرقات.
ضع طبق بتري على المسرح وقم بتثبيته في الكاميرا فوق الطبق. بعد ذلك ، قم بتوسيط الجنين في مجال رؤية الكاميرا. الآن المس الجنين برفق بإبرة حادة ، وسجل استجابة اليرقات على برنامج تسجيل كاميرا الفيديو.
عند التحفيز ، يظهر الجنين استجابة هروب قوية - سباحة متفجرة مع المنعطفات الحادة. قم بقياس الوقت بين اللمس وذروة تسارع اليرقات أثناء هروبها.
في مثال البروتوكول ، سنلاحظ استجابة يرقات الزرد للمنبهات الخارجية.
- لإجراء الفحص ، ضع طبق بتري مملوء بحوالي 25 مل من وسط الجنين على مرحلة مضاءة يتم التحكم فيها في درجة الحرارة على حوالي 28 درجة مئوية. قم بتركيب الكاميرا عالية السرعة فوق الطبق. قم بتشغيل برنامج تسجيل الفيديو ، واضبط سرعة الالتقاط على 1,000 إطار في الثانية لضمان إمكانية التقاط سرعات السباحة السريعة.
ضع الجنين في وسط طبق بتري ، مرئيا بوضوح في مجال الرؤية. اضغط على سجل ثم قم بتوصيل حافز حسي ميكانيكي عن طريق لمس الجنين برفق بإبرة حادة أعلى الرأس.
أوقف التسجيل بمجرد أن يسبح الجنين خارج مجال الرؤية أو يعود إلى الراحة.
- قد يؤدي الاختبار المتكرر لنفس اليرقات إلى التعود أو تعزيز ضعف العضلات في بعض نماذج الأمراض ، مما يؤدي إلى انخفاض الاستجابة للمحفز اللمسي. لذلك ، يجب اختبار كل جنين مرة واحدة فقط.