تجنب أسماك الزرد ومقايسة Thigmotaxis: طريقة عالية الإنتاجية لفحص سلوك اليرقات استجابة للتحفيز البصري البغيض

- للبدء ، ضع خمس يرقات في كل حارة من لوحة الاغاروز المكونة من ستة حارات. أضف ماء بيض إضافيا ، لكن لا تملأ الممرات. يحتوي ماء البيض على الميثيلين الأزرق ، مما يمنع نمو العفن. دع اليرقات تتأقلم لمدة 10 دقائق على الأقل لتقليل إجهادها.

الآن ضع لوحة البئر في غرفة التصوير فوق شاشة الكمبيوتر المحمول. ركز الكاميرا على لوحة البئر. املأ الممر بالكامل بماء البيض.

بعد ذلك ، سجل سلوك اليرقات الموضوعة على الخلفية الفارغة عن طريق التقاط صور بفاصل زمني. اعرض شريطا أحمر متحركا على شاشة الكمبيوتر المحمول ، والتقط صورا بفاصل زمني لليرقات استجابة للشريط الأحمر المتحرك.

ينظر إلى الشكل الأحمر على أنه تهديد ، ومحفز مكروه، ويسبب إجهاد اليرقات. ردا على ذلك ، يتجنبون الشريط ويظهرون الانجذاب الإيجابي. الانجذاب الإيجابي هو استجابة الأسماك للحافز الذي يسعى إلى الاتصال بالجدار والسباحة على حافة الممر.

في بروتوكول المثال ، سنقوم بتحليل الاستجابات التجنبية والانسيابية ليرقات الزرد المعالجة بالمركبات الصيدلانية أو السموم البيئية.

- لبدء التقاط الصور ، انقل اليرقات بعناية من طبق بتري إلى حارة الاغاروز للمساعدة في تقليل إجهاد اليرقات. يمكن وضع ما يصل إلى 20 يرقة في كل حارة ، ولكن عادة ما تستخدم خمس يرقات لكل حارة لتسهيل التتبع الأكثر دقة لسرعة السباحة وتقليل عدد اليرقات المطلوبة لكل تجربة.

املأ الممرات بماء البيض مع أو بدون الأدوية أو المواد السامة حسب التجربة. لا تملأ الممرات بالكامل حتى يتم وضعها في خزانات التصوير لمنع الفائض. اترك 10 دقائق حتى تتأقلم اليرقات. بعد فترة التأقلم ، ضع أربع لوحات يدويا مباشرة أعلى شاشة الكمبيوتر المحمول.

في هذا الوقت ، يمكن تغطية الممرات بماء البيض أو المعالجة الكيميائية بحيث تكون مستوية مع الجزء العلوي من الممر ، للتخلص من الظلال على حواف الممرات في الصور.

قم ببرمجة الكمبيوتر للتصوير الفوتوغرافي بفاصل زمني ، والتقاط الصور كل ست ثوان ليصبح المجموع 300 صورة لكل تجربة. اضبط الكاميرا على دقة أقل للتصوير بسرعة الفيديو. في حين أن الدقة المنخفضة تحد من التسجيلات إلى لوحة واحدة متعددة الآبار ، فإن تسجيلات الفيديو مناسبة لتصوير أحداث السباحة السريعة.

استخدم عرض PowerPoint التقديمي كمحفز مكروهة لليرقات. في هذا العرض التوضيحي ، يبدأ PowerPoint بخلفية بيضاء فارغة لمدة 15 دقيقة ، تليها 15 دقيقة من شريط أحمر متحرك في النصف العلوي من اللوحة. لتجنب تبخر السائل داخل ممرات الاغاروز ، حافظ على الحد الأقصى لوقت التصوير أقل من ساعة واحدة.