موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 2:52 دقيقة • April 30th, 2023
- للبدء ، قم بزراعة الأجنة في 3 أطباق بتري. الأول عبارة عن لوحة تحكم تحتوي على محلول هانك - محلول ملح متوازن. تحتوي الصفيحتان الثانية والثالثة على محلول هانك مع مركب يحتمل أن يكون ساما للأعصاب بتركيزات مختلفة.
يخترق المركب السام العصبي في محلول التعرض الغشاء الخارجي للأجنة عن طريق الانتشار السلبي ويغير عمليات الجهاز العصبي مثل الانتباه والتنسيق ونشاط العضلات. بمجرد أن تتطور الأجنة إلى يرقات في العمر المناسب ، انقل كل يرقة إلى بئر فردي من صفيحة 48 بئر. تتبع حالة العلاج لكل.
انقل لوحة البئر إلى منصة التسجيل واسحب الغطاء لأسفل. دع اليرقات تتأقلم لمدة 10 دقائق. قم بتعيين دورات متناوبة من الفترات الفاتحة والمظلمة باستخدام البرنامج.
عادة ما تظهر يرقات الزرد مزيدا من الحركة في الظلام وحركة أقل في الضوء. سجل المسافة الإجمالية التي قطعتها يرقات الضابطة ومجموعات التعرض في كل فترة. إذا كان المركب ساما للأعصاب ، فإن اليرقات تظهر حركة في الظلام وفي الضوء أكثر من التحكم.
في البروتوكول التالي ، سنجري اختبارات سلوكية على يرقات الزرد المعرضة لمركبات سامة للأعصاب.
- قبل ساعتين على الأقل من إجراء التجربة ، اضبط درجة حرارة الغرفة على 28 درجة مئوية وأضف 800 ميكرولتر من محلول التعرض إلى كل بئر من 48 بئر ميكروبليت. ثم استخدم ماصة سعة 1 مليلتر بطرف معدل لنقل يرقة واحدة في 200 ميكرولتر من محلول التعرض إلى كل بئر من الصفيحة الدقيقة ، استعدادا لتجربة الحركة وزاوية المسار.
عندما يتم تعيين جميع المعلمات ، قم بخفض الإضاءة في غرفة الاختبار واسمح لليرقات بالتأقلم مع النظام لمدة 10 دقائق. في نهاية فترة التأقلم، انقر فوق التجربة والتنفيذ، وقم بإنشاء المجلد الذي سيتم حفظ الملفات التجريبية فيه. ثم أدخل اسم النتيجة وانقر فوق الخلفية وابدأ
في نهاية التجربة، انقر فوق تجربة وإيقاف. ثم أعد الصفيحة الدقيقة 48 بئر مرة أخرى إلى حاضنة الضوء لإجراء تجارب لاحقة.