استئصال الكبد المستهدف: إحداث موت خلايا الكبد باستخدام الميترونيدازول في يرقات الزرد المعدلة وراثيا

- قم بإذابة الميترونيدازول في ماء البيض الذي يحتوي على DMSO ، وهو مذيب ، وأضف فينيلثيوريا ، مما يمنع تكوين الصباغ في الأجنة. انقل بعض اليرقات في العمر المناسب إلى لوحات العلاج والتحكم. بعد ذلك ، أضف التركيز المطلوب لمحلول الميترونيدازول إلى لوحة الاختبار وماء البيض الذي يحتوي على DMSO إلى لوحة التحكم.

دع اليرقات في كلتا الصفيحتين تنمو عند 28 درجة مئوية. تنتج اليرقات المعدلة وراثيا النيتروريدكتيز فقط في خلايا الكبد ، مما يحول الميترونيدازول إلى دواء سام للخلايا ، مما يؤدي إلى موت خلايا الكبد المستهدفة فقط. بعد العلاج ، قم بإزالة محلول الميترونيدازول من لوحة المعالجة وغسل الأجنة بماء البيض.

أضف التريكيين لتخدير اليرقات وفحصها تحت مجهر التألق لاستئصال خلايا الكبد الشديدة - تدمير خلايا الكبد. سوف تلاحظ الكبد أصغر بكثير في الأفراد المعالجين من الأفراد في المجموعة الضابطة. في مثال البروتوكول ، سنستخدم الميترونيدازول لاستئصال خلايا الكبد في يرقات الزرد المعدلة وراثيا لدراسة تجديد الكبد.

- انقل ما يصل إلى 100 جنين إلى طبق بتري مقاس 100 ملم يحتوي على 25 مل من ماء البيض وضع الطبق على حرارة 28 درجة مئوية. لمنع التصبغ ، أضف PTU إلى المزرعة لمدة تصل إلى 10 ساعات بعد الإخصاب. بعد 80 ساعة من الإخصاب ، قم بتخدير اليرقات بطبقة التريكيين واستخدم مجهر التألق لجمع يرقات CFP الموجبة ، مع الاحتفاظ فقط ب