موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:02 دقيقة • April 30th, 2023
- تتمثل إحدى طرق تحديد وظيفة الجين في إسقاط تعبيره ومراقبة التأثير. غالبا ما تستخدم أوليغومرات المورفولينو في الدراسات القاضية في أسماك الزرد. المورفولينو هو جزيء اصطناعي يشبه الحمض النووي يبلغ طوله حوالي 25 قاعدة ، مما يمنع التعبير الجيني المستهدف.
لعلاج المورفولينو ، ضع سمكة مخدرة بزعنفة ذيل مبتورة جزئيا على صفيحة حقن وضع اللوحة تحت مجهر استريو. حقن الجانب الظهري فقط بينما يعمل الجانب البطني غير المحقون كعنصر تحكم. يمكن أن تعمل Morpholinos بطريقتين اعتمادا على التسلسل الذي تستهدفه. أولا ، تتحد في موقع بدء الترجمة على mRNA وتمنع تخليق البروتين عن طريق منع الترجمة.
ثانيا ، يمكن أن يرتبط بتقاطع الإنترون والإكسون على ما قبل الرنا المرسال ويمنع التضفير المناسب ، مما يؤدي إلى نسخة معيبة ستتحلل بواسطة الخلية. في وقت لاحق ، افحص الزعانف الذيلية بحثا عن النمو. تشير الاختلافات بين إعادة نمو المناطق المعالجة بالمورفولينو وغير المعالجة إلى أن البروتين المستهدف يلعب دورا في تجديد الزعانف. في هذا البروتوكول ، سنستخدم المورفولينوس كجزء من مقايسة تجديد الزعنفة الذيلية.
- في اليوم السابق لحقن مورفولينو ، اصنع صفيحة حقن تحتوي على 2٪ agarose بها شق مقطوع في أحد طرفي البئر ، مما يساعد على استقرار الأسماك لإجراء الحقن. قبل الحقن مباشرة ، قم بتخفيف المورفولينو الموسوم بالفلوروسين في الماء الخالي من ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية