التزاوج وتحديد مرحلة البويضات: طريقة لتوليد الأجنة وفرزها حسب مرحلة النمو

- ابدأ بخزان التزاوج ، وهو خزان مزود بملحق قابل للإزالة يسمح للبيض بالسقوط. أضف اثنين من الذكور وثلاث سمكة بالغة إلى حوض تزاوج مقسم في المساء قبل جمع الأجنة للتأقلم مع بعضهما البعض بين عشية وضحاها.

في صباح اليوم التالي ، انقل الأسماك إلى خزان تزاوج جديد يحتوي على مياه النظام وقم بإزالة المقسم. انتظر لمدة 15 إلى 30 دقيقة لمنح السمكة وقتا للتزاوج والتكاثر.

الآن اجمع الأجنة وقم بتخزينها في طبق بتري يحتوي على وسط جنين هانك. قم بزراعتها عند 28.5 درجة مئوية طوال البروتوكول. فحص مورفولوجيا الأجنة تحت مجهر تشريح.

سوف تلاحظ العديد من الميزات التنموية. يؤدي انقسام القرص الأريمي إلى ظهور خلايا متعددة. يأخذ الأديم الأريمي شكل كوب مقلوب فوق خلية الصفار. تتطور أجزاء الأديم المتوسط المجاورة للشكل على الجزء الظهري من الجنين وما إلى ذلك.

بعد 24 ساعة من الإخصاب ، ما عليك سوى فرز الأجنة حسب الطول الكلي للجسم. في مثال البروتوكول ، سنقوم بإعداد تزاوج أسماك mCherry المراسلة المعدلة وراثيا وفرز الأجنة الناتجة.

- للبدء ، زراعة الأجنة حتى عمر ثلاثة أشهر ، وهو النضج الإنجابي. افصل اثنين من الأسماك البالغة من الذكور وثلاث أنثى من السلالة المرغوبة إلى أحواض تزاوج مقسمة من مياه النظام العذب في المساء قبل جمع الأجنة. في صباح اليوم التالي بعد إضاءة الأضواء ، قم بإزالة الحاجز واترك الأسماك تتزاوج بشكل طبيعي حتى ي