إعداد عينة الفحص المجهري للورقة الخفيفة: تركيب أجنة أسماك الزرد الحية للتصوير طويل الأمد

- أولا ، قم بإعداد الاغاروز بإضافة E3 وسط ، الذي يزود الكالسيوم للأجنة المتكللة إلى الاغاروز المنصهر. بعد ذلك ، أضف MS222 لتخدير الأجنة. قم بتبريد مزيج الاغاروز إلى 38 درجة مئوية ، بالقرب من التصلب. حدد عددا قليلا من الأجنة المنكسرة التي تعبر عن البروتينات الفلورية ، وانقلها إلى مزيج الاغاروز.

بعد ذلك ، أدخل المكبس بالكامل في الشعيرات الدموية الزجاجية وارسم جنينا واحدا ، مع التأكد من دخوله إلى الرأس أولا. بمجرد أن يصلب الاغاروز ، استخدم شريطا لتثبيت الشعيرات الدموية في وضع مستقيم في دورق يحتوي على وسط E3. يعزز القاع الشعري المفتوح تبادل الغازات لعينة الجنين.

ضع الشعيرات الدموية في حامل عينة المجهر الفلوري للصفائح الخفيفة. يشكل الليزر ورقة ضوئية رقيقة ، مما يسمح لهدف الكشف - الموجود بشكل عمودي على العينة - بالتقاط صورة مقطعية. في بروتوكول المثال ، سنقوم بتركيب أجنة الزرد لتصوير العين النامية.

ابدأ بتحضير الاغاروز. قم بإذابة كمية 1 ملليلتر محضرة من 1٪ من نقطة انصهار منخفضة في وسط E3 عند 70 درجة مئوية. بعد حوالي 15 دقيقة ، انقل 600 ميكرولتر من الاغاروز المنصهر إلى أنبوب جديد سعة 1.5 مليلتر ، وأضف 250 ميكرولتر من وسط E3 ، و 50 ميكرولترا من 0.4٪ MS222 ، و 25 ميكرولترا من محلول مخزون حبة الفلورسنت الدوامة.

ضع الأنبوب في كتلة تسخين عند حوالي 39 درجة مئوية ، للسماح للأغاروز بالاقتراب من نق