موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:27 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بطبق بتري يحتوي على أجنة في وسط E3. أضف التريكيين لتخدير الأجنة ومحلول فينيلثيوريا ، PTU ، لمنع تكوين الصبغة. بمساعدة مجهر تشريح ، قم بتفكيك الأجنة.
استخدم ماصة زجاجية لنقل أحد الأجنة المتكللة إلى طبق بتري صغير مع قاع زجاجي ضحل جيدا في المنتصف وإزالة الوسط الزائد. بعد ذلك ، ضع محلول الاغاروز بتركيز مثالي لتقليل تشوه الجنين وحركته في أنبوب ميكرو فوج وتسخينه. خفض درجة الحرارة إلى 30 درجة مئوية لتجنب إتلاف الجنين بسبب الحرارة.
صب الطبقة الأولى من الاغاروز فوق الجنين ، واملأ البئر الضحل بالكامل. ضع كوبا آخر فوق البئر وأضف 1٪ agarose فوقه. الطبقة الثانية تثبت زجاج الغطاء في مكانه.
بمجرد أن يصلب الاغاروز ، املأ طبق بتري بوسط E3 الذي يحتوي على التريكيين. هذه هي الطبقة الثالثة وتحافظ على ترطيب الاغاروز والجنين. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء تركيب أجار متعدد الطبقات لأجنة أسماك الزرد للتصوير بفاصل زمني طويل.
- قبل التركيب مباشرة ، سخني محلول الاغاروز إلى 65 درجة مئوية ثم اتركيه يبرد إلى حوالي 30 درجة مئوية حتى لا يتضرر الجنين من الحرارة وأضف التريكايين إلى محلول الاغاروز. استخدم أطباق ذات قاع زجاجي مقاس 35 ملم مع قاع زجاجي مغطى برقم صفر. ضع جنينا منزوعا برفق بأحد جوانبه الجانبية باتجاه قاع الطبق باستخدام ماصة زجاجية أو ماصة دقيقة. ثم قم بإزالة أي E3 متبقي بعناية باستخدام ماصة د
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية