تركيب أجار: طريقة أساسية لتركيب أجنة أسماك الزرد الحية للتصوير طويل الأمد

- ابدأ بإضافة E3 متوسط إلى منخفض نقطة انصهار الاغاروز وتسخينه حتى يذوب الاغاروز تماما. يبرد الاغاروز إلى 37 درجة مئوية ويضاف محلول التريكايين. بعد ذلك ، قم بتخدير الأجنة عن طريق إضافة التريكيين إلى طبق بتري يحتوي على أجنة في وسط E3. حرك طبق بتري لجمع الأجنة في المنتصف.

باستخدام ماصة النقل ، ارسم جنينا واحدا بأقل قدر من الوسط. أمسك الماصة في وضع رأسي وارتجد الجنين لوضعه عند طرف الماصة. الآن ضع الجنين في محلول الاغاروز دون إضافة أي وسط زائد ، مما يخفف من الاغاروز ويمنع التبلور. امزج الجنين برفق داخل الاغاروز وانقل المحلول إلى بئر لوحة التصوير باستخدام الماصة.

ضع الصفيحة تحت المجهر واستخدم طرف ماصة لوضع الجنين في الاتجاه المطلوب. بمجرد أن يصلب الاغاروز ، اسكب وسط E3 الذي يحتوي على التريكين فوقه للحفاظ على رطوبة الأجار وتصوير الجنين. في مثال على البروتوكول ، سنقوم بتركيب أجنة الزرد الباربايوتكية للتصوير والتحليل.

للحصول على صور للأجنة المنصهرة ، قم بإعداد 0.8٪ من الاغاروز ذات نقطة الانصهار المنخفضة. بينما لا تزال ساخنة ، قم بتقطيع مليلتر واحد من الاغاروز في أنابيب ميكروفوج سعة 1.5 مليلتر موضوعة في كتلة تسخين 37 درجة مئوية. تخدير الأجنة البارابايتيك عن طريق إضافة 1 مليلتر من 4 ملليغرام لكل مليلتر ، ودرجة الحموضة 7.0 ثلاثية الأبعاد إلى 25 ملليلترا من وسط E3 الذي يحتوي على الأجنة. قم بتدو