موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:24 دقيقة • April 30th, 2023
- ضع الأجنة ذات الأهمية في فينيل ثيوريا ، PTU ، محلول Ringer لمنع تكوين الصباغ ، والذي يبدأ بعد 24 ساعة من الإخصاب. هذا يجعل التشريح النامي أكثر وضوحا ، وهو أمر ضروري لهذا الإجراء. نقل جنين مخدر ثلاثي الأبعاد إلى غرفة التصوير. ضع شريحة زجاجية في الأعلى واعرضها تحت المجهر. ركز على المحور العصبي المراد إصابته ، والذي يمكن رؤيته تحت ليزر 488 نانومتر لأنه يعبر عن GFP عبر الوراثة.
التقط صورة مسبقة للموقع. بعد ذلك ، اعرض المحور العصبي باستخدام ليزر 910 نانومتر مما يتسبب في تألق GFP باللون الأحمر. زيادة شدة هذا الليزر لإصابة المنطقة المستهدفة دون التأثير على الأنسجة المحيطة. هذه العملية تسمى بضع المحور. التقط صورة جديدة باستخدام الليزر الأول لتأكيد بضع المحور ، والذي يظهر على شكل حطام متناثر. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء بضع محاور محسية للمحاور الحسية المحيطية في أجنة الزرد باستخدام ليزر ثنائي الفوتون.
- إذا لم يكن منظار الفوتون المخصص متاحا في مختبرك ، فيمكن أيضا استخدام مجهر Zeiss 510 ثنائي الفوتون ثنائي البؤر لقطع المحاور. نبدأ بوضع الجنين المركب على المسرح والتركيز عليه باستخدام هدف مائي 25x. بعد ذلك ، قم بتشغيل ليزر الفوتون والأرجون في إعداد متعدد المسارات بحيث يمكن التبديل من واحد إلى آخر.
على الرغم من استخدام كلا الليزرن للكشف عن GFP ، إلا أن انبعاث الفوتونين يتم تصورهما بال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية