الفيزيولوجيا الكهربية لمشبك التصحيح للخلية الكاملة: طريقة لدراسة الخصائص الكهربائية للخلايا العصبية

- ابدأ بوضع غرفة تسجيل تحتوي على عينة في محلول الاستحمام ، الذي يتطابق تكوينه مع البيئة الفسيولوجية خارج الخلية أو السيتوبلازم ، على مرحلة المجهر. قم بتقدم الماصة الدقيقة المسجلة ، وهي ماصة تحتوي على قطب فضي مغمور في محلول إلكتروليت ، والذي يحاكي الظروف داخل الخلايا ، باتجاه الخلايا العصبية عن طريق الضغط الإيجابي ، والاتصال بغشاء الخلية.

قم بالتبديل برفق من الضغط الموجب إلى الضغط السلبي لتشكيل مانع تسرب محكم بين الغشاء والماصة. قم بتعيين إمكانات الاحتفاظ على مكبر الصوت للحفاظ على الخلية عند جهد ثابت. ثم قم بتمزيق غشاء الخلية داخل الماصة الدقيقة عن طريق تطبيق الشفط.

بمجرد تمزق غشاء الخلية ، يتسبب جهد الاحتفاظ بتدفق الأيونات عبر القنوات الأيونية ذات الجهد الكهربائي ، مما يخلق إمكانات غشاء يتم تسجيلها بواسطة قطب التسجيل. سجل على الفور إمكانات الغشاء. ينقل قطب التسجيل الإشارة إلى مضخم التغذية الراجعة ، والذي يطرح جهد الغشاء من إمكانات الاحتفاظ - راسم الذبذبات ، الذي يقدم عرضا مرئيا لإمكانات الغشاء ، وجهاز كمبيوتر. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء قياس مشبك التصحيح على خلية Mauthner في جنين الزرد.

- للتحضير لتثبيت الرقعة، ابدأ بسحب بعض ماصات مشبك التصحيح بزجاج البورسليكات ذي الجدران الرقيقة في مجتذب أفقي. يبلغ طول طرف الماصة حوالي 0.2 إلى 0.4 ميكرومتر بعد تلميع الحريق إلى حافة ناعمة ، ويبلغ طول تفتق الساق حوالي 4 ملليمترات.

املأ طرف الماصة بمحلول داخل الخلايا عن طريق غمس طرفه في السائل داخل الخلايا. ثم أدخل إبرة حقنة في الماصة وطرد المحلول داخل الخلايا برفق من المحقنة لإنهاء ملء الماصة. قم بتوصيل الماصة بمرحلة رأس مكبر الصوت في إعداد الفيزيولوجيا الكهربية. من المهم الحفاظ على مرحلة الرأس بزاوية 45 درجة تقريبا للمحور الأفقي ، حيث يضمن ذلك زاوية دخول للماصة المناسبة لتكوين موانع تسرب عالية المقاومة مع خلية Mauthner.

قبل أن تنخفض الماصة مباشرة إلى محلول الحمام، ضع كمية صغيرة من الضغط الإيجابي على الماصة لتقليل فرصة انسداد الطرف. استمر في الاقتراب من الخلية M بكمية صغيرة من الضغط الإيجابي في الماصة. يدفع الضغط الإيجابي الخلية برفق من جانب إلى آخر ، وعندما يتم وضعه مباشرة فوق الخلية ، يشكل غمازة صغيرة على غشاء الخلية.

الآن ، اترك الماصة في مكانها لبضع ثوان لتنظيف سطح الخلية برفق حتى يمكن تكوين ختم قوي بين الماصة والغشاء. ثم حرر الضغط الإيجابي في الماصة لبدء الختم. تؤدي كمية صغيرة من الضغط السلبي ، إلى جانب إمكانات الماصة السالبة ، إلى تكوين سدادات جيجا أوم في غضون ثوان قليلة.

بعد ذلك ، قم بتغيير إمكانات الاحتفاظ في مكبر الصوت إلى 60 مللي فولت تحت الصفر. تمزق غشاء الخلية بسلسلة من نبضات الشفط القصيرة. ثم قم بتسجيل إمكانات الغشاء على الفور وتقليل القطع الأثرية للسعة. تعويض سعة الخلية ومقاومة الوصول بنسبة 70٪ إلى 85٪.

يجب مراقبة مقاومة الوصول كل 30 ثانية إلى دقيقة ، وإذا كان هناك تغيير بنسبة 20٪ أو أكثر ، فقم بإجهاض التجربة. بمجرد انتهاء التجربة والحصول على بيانات كافية ، ضحي بالجنين عن طريق إزالة الدماغ الخلفي بزوج من الملقط.