JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 2:05 د • April 30th, 2023
- أولا ، ضع سمكة مخدرة بحيث يكون الجانب الظهري متجها لأعلى في إسفنجة مبللة مسبقا. قبل التثقيب الكهربائي ، قم بحقن مادة وراثية في الأنسجة المستهدفة ، وفي هذه الحالة ، جزء من الدماغ الأمامي يسمى telencephalon. بعد ذلك ، ضع كمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية على الرأس. أيضا ، ضع الجل على طرف الأقطاب الكهربائية لتسهيل التشغيل الفعال. ضع القطب الموجب على الجانب البطني من الرأس والقطب السالب على الجانب الظهري.
الآن ، اضغط على الأقطاب الكهربائية برفق على الرأس وقم بإدارة عدة نبضات من التيار الكهربائي. يخلق التيار مساما مؤقتة في غشاء البلازما للخلايا الكهربائية ويجعلها قابلة للاختراق. يسهل التيار أيضا حركة الجسيمات سالبة الشحنة ، مثل بلازميدات تعبير الحمض النووي أو قليل النوكليوتيدات RNAi الموجودة في المناطق المحيطة ، إلى الخلايا. في المثال التالي ، سنستخدم التثقيب الكهربائي لإدخال البلازميد المؤتلف في الخلايا البطانية العصبية ، وهي الخلايا الجذعية المسؤولة عن توليد خلايا عصبية جديدة.
- قم بتغطية telencephalon السمكة بكمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية. من أجل التثقيب الكهربائي للحيوان المحقون بالبلازميد ، قم بإزالة الإسفنجة من إعداد الطرد واغمر الجانب الداخلي من أطراف القطب في هلام الموجات فوق الصوتية. ضع رأس السمكة بين الأقطاب الكهربائية ، مع وجود القطب الموجب في الجانب البطني من الرأس والقطب السالب على الجانب الظهري. بعد ذلك ، بينما لا تزال تمسك جسم السمكة في الإسفنج ، اضغط على الأقطاب الكهربائية برفق وبدقة ضد telencephalon وقم بإدارة التيار بدواسة القدم ، مع تثبيت الأقطاب الكهربائية في مكانها حتى تنتهي النبضات الخمسة.