موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 2:47 دقيقة • April 30th, 2023
- انقل سمكة مخدرة من التريكيين إلى إسفنجة مبللة بحيث يكون الجانب الظهري متجها لأعلى. ضع الإسفنجة التي تحمل السمكة تحت المجهر. ضع إبرة الحقن الدقيقة بزاوية 45 درجة من محور الجسم بالقرب من العضلة الظهرية.
بعد ذلك ، حدد المكان أمام الزعنفة الظهرية غير المغطاة بمقاييس حيث يمكنك إدخال الإبرة دون استخدام قوة كبيرة. ثم أدخل الإبرة برفق وحقن المركب محل الاهتمام ببطء مع علامة مثل الفينول الأحمر في العضلات.
إذا كان المركب محل الاهتمام يحتوي على مادة وراثية ، فقم بتزويد الخلايا بالكهرباء عن طريق وضع أقطاب كهربائية على جانبي موقع الحقن وإدارة التيار. يجعل التيار خلايا العضلات قابلة للاختراق وقادرة على امتصاص المادة الوراثية بكفاءة. بعد العملية ، انقل الأسماك على الفور إلى خزان الاسترداد. في البروتوكول التالي ، سنقوم بإجراء حقنة عضلية على أسماك زرد بالغة لتوصيل لقاح الحمض النووي ضد المتفطرة.
للحفاظ على السمكة في وضع ثابت أثناء الحقن ، استخدم قطعة من الإسفنج مع أخدود مقطوع في المنتصف كحشوة. انقع الإسفنجة جيدا في ماء النظام وضعها في طبق بتري. باستخدام ملعقة بلاستيكية ، انقل سمكة الزرد المخدرة إلى الإسفنجة المبللة مع الجانب البطني للسمكة لأسفل في الأخدود. تحت المجهر ، ضع الإبرة بزاوية 45 درجة بالقرب من العضلة الظهرية لسمك الزرد. ثم ابحث عن البقعة الصغيرة بدون قشور أمام الزعنفة الظهرية وادفع الإبرة إلى العضلات.
إذا شعرت بأي مقاومة ، فجرب بقعة مجاورة. استخدم مفتاح القدم لحقن محلول البلازميد تدريجيا في العضلات. تحت المجهر ، يجب أن يكون الفينول الأحمر مرئيا عند دخوله الأنسجة العضلية.
قم بتزويد الأسماك بالكهرباء مباشرة بعد الحقن عن طريق وضع أقطاب من نوع الملقط على كل جانب من موقع الحقن. اضغط على زر البدء في المثقب الكهربائي وامنحه ست نبضات 40 فولت و 50 مللي ثانية. ثم انقل السمكة برفق إلى خزان الاسترداد. أخيرا ، بعد تخدير الأسماك وفقا لبروتوكول النص ، استخدم ضوء الأشعة فوق البنفسجية لرؤية تعبير EGFP بالقرب من موقع الحقن.