موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:58 دقيقة • April 30th, 2023
- ضع سمكتين من الإناث واثنين من الذكور في حوض تربية مقسم قبل ليلة واحدة من الحقن. في صباح اليوم التالي ، قم بإزالة الحاجز واترك السمك يتكاثر حتى تلاحظ البيض في قاع الخزان. اجمع البيض واغسله بوسط E3 يحتوي على الميثيلين الأزرق ، وهو مبيد للفطريات. راقب البويضات تحت المجهر وقم بإزالة البويضات غير المخصبة. يحتوي البيض غير المخصب على غشاء صفار واضح ، بينما يحتوي البيض المخصب على غشاء صفار داكن.
احتفظ ب 10 أجنة في طبق بتري منفصل كعناصر تحكم غير محقونة. باستخدام ماصة النقل، قم بمحاذاة الأجنة في حوض لوحة الحقن المجهري في درجة حرارة الغرفة وضعها تحت المجهر. ادفع إبرة الحقن المجهري برفق من خلال المشيمة في صفار البيض وقم بحقن مركب مهم ببطء يحتوي على علامة مثل الفينول الأحمر. يسمح التدفق السيتوبلازمي للمركب بالانتشار في الخلايا الجنينية.
بعد الحقن ، قم بزراعة الأجنة في وسط E3 مع الميثيلين الأزرق عند 28 درجة مئوية. استمر في التحقق من صحة الأجنة. قم بإزالة أي أجنة ميتة أو ناتجة بشكل غير طبيعي وقم بتغيير الوسط يوميا. في البروتوكول التالي ، سنستخدم الحقن المجهري لتوصيل بروتين نووي الريبي ، أو مركب RNP ، إلى أجنة الزرد.
- أولا ، قم بإعداد الأشخاص الذين يستخدمون أسماك الزرد للتكاثر في الليلة السابقة لإجراء الحقن كما هو موضح في البروتوكول النصي. ثم امزج بين بروتين Cas9 و sgRNA بنسبة اثنين إلى واحد. ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية