نموذج اعتلال عضلة القلب في أسماك الزرد: السمية القلبية الناجمة عن الأدوية

- اعتلال عضلة القلب هو حالة تضعف فيها عضلة القلب وتفقد القدرة على ضخ الدم. يمكن تكرار هذه الحالة في أسماك الزرد. أولا ، قم بتخفيف محلول مخزون الدواء المسؤول عن السمية القلبية في محلول الملح المتوازن من هانكس لتحضير العديد من تركيزات العمل. بعد ذلك ، ضع سمكة مخدرة ثلاثية الأبعاد ، بحيث يكون الجانب البطني لأعلى ، على إسفنجة تعليق تحت مجهر تشريح. ضع الإبرة بين زعانف الحوض بزاوية 45 درجة من الأفقي.

الآن ادفع الإبرة برفق من 1 إلى 2 ملم في التجويف البريتوني وحقن محلول الدواء ببطء. انتظر خمس ثوان قبل سحب الإبرة لمنع تسرب المحلول. انقل الأسماك على الفور إلى خزان نظيف يحتوي على مياه النظام العذبة. سجل عدد الأسماك التي تموت كل يوم بسبب السمية القلبية الشديدة ، وتلف عضلة القلب. يرتبط الدواء بمستقبلات الموت الموجودة على غشاء خلية عضلة القلب ويؤدي إلى موت الخلايا المبرمج ، مما يؤدي إلى سمية قلبية شديدة.

قم بإنشاء منحنى البقاء على قيد الحياة ، وهو رسم بياني يعرض احتمالية البقاء على قيد الحياة بمرور الوقت لكل تركيز دواء. في المثال ، سنقوم بحقن دوكسوروبيسين ، أو DOX ، للحث على اعتلال عضلة القلب في أسماك الزرد البالغة بطريقتين.

قبل حقن الأسماك ب DOX ، صوم السمك لمدة 24 ساعة. بعد ذلك ، قم بتجميع السمكة. أثناء التخدير ، استخدم ورق ترشيح نظيف لتجفيف كل سمكة وقياس وزن جسمها. اصنع مجموعات من الأسماك كلها في حدود 10٪ من نفس وزن الجسم بحيث يمكن حقن كل مجموعة بنفس جرعة DOX. بعد ذلك ، احسب تركيز عمل DOX لكل مجموعة بحيث يتم حقن كل مجموعة بخمسة ميكرولترات من المحلول وتتلقى نفس جرعة DOX بوزن الجسم.

ثم قم بتخفيف مخزون DOX في 1x HBSS. امزج التخفيف مع دوامة ثم قم بتدوير التخفيف النبضي لإبقائه مجمعا معا في الأنبوب. للحقن ، قم بإعداد منصة الحقن. في طبق بتري نظيف 100 ملم ، ضع إسفنجة. بمساعدة مجهر تشريح ، قم بقطع تجويف في الإسفنجة لحمل سمكة واحدة ، وعادة ما تعمل أربعة سنتيمترات.

بعد ذلك ، على إبرة قياس 34 ، قم بتوصيل حقنة صغيرة سعة 10 ميكرولتر. ثم اشطف الإبرة ب 1x HBSS لإزالة أي فقاعات أو كتل من المحقنة والأنبوب. الآن ، قم بتخدير الأسماك البالغة لفترة وجيزة باستخدام التريكيين. بعد ذلك ، انقع الإسفنجة في ماء الجنين مع التريكيين وانقل سمكة إلى الإسفنجة مع رفع بطنها للحقن. الآن ، قم بحقن محلول DOX داخل الصفاق عن طريق إدخال الإبرة بسرعة بزاوية 45 درجة في خط الوسط بين زعانف الحوض بعمق حوالي 1 إلى 2 ملليمتر.

بعد ذلك ، حرر ببطء كل حل DOX. قبل سحب الإبرة ، انتظر خمس ثوان. بدلا من ذلك ، يمكن وضع الأسماك بشكل جانبي مع الداخل إلى اليمين. بعد ذلك ، قم بحقن الخط الجانبي فوق زعنفة الحوض مع الشطبة لأعلى مشيرا نحو الساعة 7 بزاوية 45 درجة وعمق 3 إلى 4 ملليمترات. إذا نجحت أي من طرق الحقن ، فسيكون هناك لون أحمر في البطن.

بعد الحقن ، انقل الأسماك بسرعة إلى خزان معبر نظيف مملوء بمياه النظام العذبة حيث يمكنها التعافي. ثم اشطف الإبرة باستخدام HBSS واستمر في حقن السمكة التالية. في وقت لاحق ، أعد الأسماك المحقونة إلى نظام به دوران مستمر ولكن منفصل عن النظام الرئيسي لتجنب التلوث المتبادل. خلال ال 24 ساعة القادمة ، استمر في صيام السمك. خلال الأسبوع الأول ، بعد الحقن ، تأكد من فحص الأسماك يوميا وإزالة أي سمكة ميتة.