موسوعة JoVE للتجارب
أبحاث السرطان
0 مشاهدة • 3:19 دقيقة • April 30th, 2023
الفيروس العدسي هو فيروس قهقري يحتوي على مادة وراثية للحمض النووي الريبي. يوفر هذا الفيروس طريقة فعالة ومستقرة لإدخال الجينات المعدلة وراثيا إلى خطوط الخلايا السرطانية. ابدأ بإضافة النيورامينيداز إلى أنبوب يحتوي على فيروس العدسات الذي يعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر ، أو GFP. احتفظ بالأنبوب عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لزيادة كفاءة ربط الفيروس.
بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي أنبوبا يحتوي على تعليق الخلايا السرطانية لتشكيل حبيبات. أضف وسائط الماموسفير التي تحتوي على البوليبرين لإعادة تعليق الخلايا. البوليبرين هو بوليمر كاتيوني يزيد من كفاءة العدوى الفيروسية. الآن قم بوضع العدد الأمثل من الخلايا السرطانية لكل بئر في لوحة ثقافة أنسجة بستة آبار. أضف الكمية المطلوبة من Lentivirus إلى كل بئر من لوحة الاستزراع.
قم بتدوير الطبق لخلط المحتوى ، واحتفظ به عند 37 درجة مئوية لمدة 96 ساعة مع إمداد مستمر بثاني أكسيد الكربون. يدخل فيروس العدسات الخلية ويطلق الحمض النووي الريبي. يحول النسخ العكسي الفيروسي الحمض النووي الريبي إلى حمض نووي مزدوج تقطعت به السبل يندمج في جينوم المضيف. ضع اللوحة تحت مجهر الفلورسنت وراقب الخلايا لنقل ناجح. تتألق الخلايا المنقولة بسبب تعبير GFP.
في مثال البروتوكول ، سنقوم بنقل الخلايا السرطانية المنفصلة PDX مع نواقل الفيروسات العدسية.
لتحويل الخلايا السرطانية ، قم بالطرد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية