الزراعة المشتركة ثلاثية الأبعاد مع التفاعل المباشر: الزراعة المشتركة للخلايا السرطانية مع الخلايا الوحيدة لدراسة تفاعلها

للبدء ، أضف DQ collagen IV ، وهو ركيزة بروتينية مروية بصبغة فلورية في مستخلص مصفوفة خارج الخلية أو ECME. صب هذا المستخلص في كل بئر من شريحة بئرين. قم بتسمية الأول جيدا بالثقافة المشتركة ، والثاني على أنه تحكم. أضف كمية مناسبة من تعليق الخلايا السرطانية المسمى بالفلورسنت في الآبار ، واحتضن الشريحة عند 37 درجة مئوية للوقت المطلوب لتعزيز ارتباط الخلية.

أضف الكمية المطلوبة من تعليق الخلايا الوحيدة إلى البئر الأول. دع ECME يتجمد عند 37 درجة مئوية. صب نسبا متساوية من الخلايا السرطانية ووسائط زراعة الخلايا الأحادية في كل بئر واحتضان الشريحة عند 37 درجة مئوية للمدة المطلوبة في بيئة ثاني أكسيد الكربون. في الثقافة المشتركة جيدا ، تفرز الخلايا السرطانية بروتينات مثل البروتين الجاذب الكيميائي للخلايا الوحيدة لجذب الخلايا الوحيدة.

في المقابل ، تنتج الخلايا الوحيدة مصفوفة البروتين المعدني أو MMP ، لتحلل الكولاجين ، وتعزيز غزو الخلايا السرطانية. راقب الشريحة تحت المجهر متحد البؤر. ينبعث تحلل الكولاجين DQ من التألق الذي يمكن رؤيته بشكل أكبر في خلايا الزراعة المشتركة مما يشير إلى تفاعل الخلايا ، بينما أقل في الخلايا الضابطة. في البروتوكول التالي ، سنقوم بزراعة خلايا سرطان الثدي مع الخلايا الوحيدة لدراسة تفاعلها.

لتسمية خلايا BRC والخلايا الوحيدة بالكومارين والرودامين المتاحين تجاريا قبل زراعة الخلا